O modelo de trombose induzida por FeCl3 em camundongos é descrito aqui. Um método para monitorar o crescimento do trombo por observação de microscopia intravital em um vaso mesentérico e por medição do fluxo sanguíneo na artéria carótida é apresentado.
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Artigo de método
Férrico Thrombosis Modelo rato na artéria carótida e Mesentery Vessel induzida por Chloride
Neste artigo
Resumo
Resumo
A trombose grave e suas consequências isquêmicas, como infarto do miocárdio, embolia pulmonar e acidente vascular cerebral, são os principais problemas de saúde em todo o mundo. A lesão por cloreto férrico é agora uma técnica bem estabelecida para induzir com rapidez e precisão a formação de trombos em veias ou artérias expostas de pequeno e grande diâmetro. Esse modelo tem desempenhado um papel fundamental no estudo da fisiopatologia da trombose, na descoberta e validação de novos fármacos antitrombóticos e na compreensão do mecanismo de ação desses novos agentes. Aqui, é apresentada a implementação desta técnica em um vaso mesentérico e artéria carótida em camundongos. O método descreve como marcar leucócitos e plaquetas circulantes com um corante fluorescente e observar, por microscopia intravital no mesentério exposto, seu acúmulo na parede do vaso lesado, o que leva à formação de um trombo. Na artéria carótida, a oclusão causada pela formação do coágulo é medida pelo monitoramento do fluxo sanguíneo com uma sonda Doppler.
Introdução
O estudo dos mecanismos envolvidos no desenvolvimento de trombose e a avaliação da eficácia de fármacos anti-trombóticos bem estabelecida requer modelos animais experimentais. Grandes modelos animais foram os primeiros a ser utilizado uma vez que proporcionam grandes vasos mais semelhantes aos seres humanos do que roedores 1. No entanto, de alto custo, as instalações maiores necessários e da dificuldade em manipulá-las geneticamente são os principais inconvenientes para a sua utilização e animais de grande porte são agora limitados a estudos pré-clínicos final uma vez ensaios preliminares em roedores têm dado resultados conclusivos 2. Com a disp....
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Protocolo
Todos os experimentos envolvendo animais foram aprovados pelo Alfred Pesquisa Médica e da Educação Comissão de Ética Animal Precinct (E / 1534/2015 / B). Todas as manipulações cirúrgicas foram realizadas sob anestesia geral e os animais não apresentaram dor em qualquer fase. Todas as experiências descritas são não-recuperação.
1. Preparação
- Cortar bandas finas de papel de filtro (1 mm x 2 mm).
- Recentemente preparar duas soluções de cloreto férrico, de 4% (w / v) e 6% (w / v) diluída em água desionizada. Preparar a solução de rodamina 6G 0,3% em PBS, filtrou-se através de 0,22 um.
- Corte um pequeno pedaço (5 m....
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Resultados
A observação de microscopia intravital fluorescente do mesentério irá revelar a acumulação de Rodamina 6G marcado plaquetas e leucócitos ao longo da parede do vaso lesionado por FeCl 3. A formação progressiva de um trombo é monitorizado parcial num recipiente de 200 um mesentério (Figura 1). Um trombo aparece lentamente e é claramente identificável após o primeiro minuto de exposição à FeCl 3 (Figura 1, t = 60 segundos). 40 segundos após a remoção do papel de filtr.......
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Discussão
O modelo de trombose cloreto férrico induzida é uma excelente ferramenta de pesquisa. Como se mostra neste estudo, é extremamente fácil de implementar e, quando utilizado em combinação com a microscopia intravital ou medidor de fluxo de Doppler, que fornece uma boa monitorização em tempo real de formação de trombos. Ajustando o tempo de exposição e a concentração do FeCl 3, como também oferece a possibilidade de produzir ou trombos oclusivos ou não-oclusivos.
No entanto, este méto.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer o apoio técnico da Alegria Yao e Dr. Karen Alt, bem como o financiamento do NHMRC e NHF.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Papel para cromatografia Whatman | GE Healthcare | 3030917 | |
| Cloreto de ferro (III) 40% (w/v) | VWR | 24212.298 | |
| Rodamina 6G | Sigma | R4127 | |
| Microscópio invertido | Câmera | IX81 | |
| Olympus | XM10 | ||
| Transonic | TS420 | ||
| Sonda de fluxo Nano-doppler | Transônico | 0.5 PBS | |
| Ketamine | Hospira | 0409-2051-05 | |
| xilazina (Rampun) | Bayer | 75313 | |
| Placa de Petri | Sarstedt | 82.1472 | |
| Seringa de insulina (29 G) | BD Ultra-Fine | 326103 | |
| Aplicadores com ponta de algodão | BSN medical | 211827A | |
| Suturas Dynek dysilk | Dynek Pty Ltd | CS30100 | |
| tampão fosfato salino Dulbecco (PBS) | Gibco life technologies | 21600-069 | |
| Almofada térmica | Kirchner | T60 |
Referências
- Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L.
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Reimpressões e permissões
