Microdiálise é uma técnica comumente usada em pesquisas de neurociência. Portanto sondas comerciais estão em grande demand.In neste trabalho um conjunto de sonda é explicado em detalhes para construir um concêntrico, sonda de microdiálise confiável, feito sob medida para menos de 10 dólares.
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Resumo
Resumo
Microdiálise é uma técnica comumente usada em pesquisas de neurociência. Portanto sondas comerciais estão em grande demanda para monitorar as mudanças fisiológicas, farmacológicas e patológicos no líquido cefalorraquidiano. Infelizmente, as sondas comerciais são caros para grupos de pesquisa em instituições públicas. Neste trabalho, um conjunto de sonda é explicado em detalhes para construir um concêntrico, sonda de microdiálise confiável, feito sob medida para menos de 10 dólares. A sonda de microdiálise consiste de uma membrana de polissulfona com um corte molecular de 30 kDa. Sonda in vitro recuperações de substâncias com peso molecular diferente (no intervalo de 100-1,600 Da) e diferentes propriedades físico-químicas são comparados. A sonda produz uma recuperação in vitro de aproximadamente 20% para o de glicose compostos pequenos, lactato, acetilcolina e ATP. In vitro recuperações para neuropeptídeos com um peso molecular entre 1,000-1,600 Da quantidade de 2-6%. Assim, enquanto o w molecular mais elevadooito dos neuropeptídeos reduzido em valores de recuperação in vitro, diálise de compostos na gama mais baixa (até 500 Da) de pesos moleculares não tem grande impacto sobre a taxa de recuperação in vitro. O presente método permite a utilização de uma membrana de diálise com o outro valor de cut-off e material de membrana. Portanto, este conjunto de sonda feitos por medida tem a vantagem de flexibilidade suficiente para dialisar substâncias em uma ampla gama de pesos moleculares. Aqui, nós apresentamos uma sonda de microdiálise com um comprimento de permuta de 2 mm, o que é aplicável para microdiálise no rato e regiões do cérebro de rato. No entanto, as dimensões da sonda pode ser facilmente adaptado para comprimentos maiores de câmbio para ser utilizado em animais maiores.
Introdução
Microdiálise é uma técnica comumente usada em pesquisas de neurociência. Durante os últimos 50 anos, a técnica minimamente invasiva de microdiálise foi continuamente melhorado para se tornar um método bem estabelecido para monitorizar as concentrações locais de compostos de pequeno peso molecular, no espaço extracelular. Quase todos os tecidos fluidos intersticiais podem ser investigados em animais que se movem livremente.
Gaddum introduziu a técnica push-pull na década de 1960. Ele modificado a partir de uma abordagem Feldberg et al., Em que tubocurarina foi perfundido através de uma cânula terminando no ventrículo lateral e rec....
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Protocolo
1. Preparando-PTFE tubing
- Encurtar PTFE-tubulação em 2,5 centímetros peça. Use um papel escala para estimar as dimensões físicas. (Veja a Figura 3-A)
- Corte um fim em um ângulo para facilitar a ligação da tubulação de saída. (Veja a Figura 3-A)
- Roughen PTFE-tubagem através da utilização de papel de lixa para permitir a aderência da cola epóxi.
2. Preparar Fused Silica
- Encurtar sílica fundida em 2,25 centímetros peça. (Veja a Figura 3-A)
3. Introduzir a Fused Silica no PTFE-tubulação
- Inserir uma câ....
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Resultados
A sonda de microdiálise concêntrico feito por medida é constituído por uma membrana de polissulfona com um corte molecular de 30 kDa. O conjunto de sonda é ilustrado na Figura 3.
Ele exibiu uma recuperação in vitro para a glicose metabolitos pequena de energia (180,16 Da) e lactato (112,06 Da) de 19,10 ± 1,2% e 21,2 ± 1,6%, respectivamente. Para a acetilcolina carregado positivamente com um peso molecular de 181,66 Da, que mostrou um valor em recuperação
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Discussão
A Figura 3 mostra um conjunto de sonda exemplar. Dimensões de diâmetro interno e externo corretos têm de ser cuidadosamente observados no tubo (OD 1,6 milímetros; ID 350 mm), de sílica fundida (OD 105 mm; ID 40 mm) e membrana de diálise (OD 245 mm; ID 210 mm). É também importante para manter um espaço entre a membrana e de sílica fundida de (105 um) e entre a membrana e os tubos (105 mm), bem. Se os valores forem diferentes, a pressão na sonda pode subir e provocar o vazamento da membrana.
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Os autores agradecem a G. Barka (SunChrom GmbH, Friedrichsdorf, Alemanha) por seu apoio e por fornecer a cola epóxi. Além disso, os autores agradecem à Fresenius Medical Care (Bad Homburg, Alemanha) pelo fornecimento do filtro hemodialógico capilar FXCorDiax. O financiamento foi obtido da Universidade Goethe de Frankfurt.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Cola epóxi | SunChrom GmbH, Fiedrichsdorf, Alemanha | ||
| Sílica fundida ID 40 µ m OD 105 µ m | Ziemer-Chromatographie, Mannheim, Alemanha | Art. Nº: 6.040105 | |
| Membrana de polissulfona (filtro de hemodiálise FX Cor Diax 600) | Fresenius Medical Care AG & Co. KGaA, Bad Homburg, Alemanha | REF: F00001593 | |
| Cola de cianacrilato (plástico de supercola Pattex®) | Henkel AG&Co. KGaA, Dü sseldorf, Alemanha | ||
| Tubo de TEFLON 1.6 x 0.35 mm | SunChrom® GmbH, Friedberg, Alemanha | Art. No: 969-195.219 | |
| Bisturi (Pena® Lâmina cirúrgica nº 10) | pfm medical ag, colônia, Alemanha | Art. No: 07310 | |
| Microscópio | MEIJI Techno | Cânula EMZ-8TR | |
| 30 G x 11" (0.3 x 25 mm) Sterican® Z | B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Alemanha | REF: 9324500 | |
| Cânula de 25 G x 11/2" (0.5 x 40 mm) 100 Sterican® | B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Alemanha | REF: 9186166 | |
| Caneta fina (Stabilo point 88 fine 0.4) | Schwan-STABILO Schwanhä uß er GmbH & Co. KG | Art. Não: 88/36 | |
| Cola quente (Bastões de cola ULTRA Power x 11 mm) | Steinel® GmbH, Herzebrock-Clarholz, Alemanha | Art. Nº: 4007841046910 | |
| Lixa P60 230 x 280 | Robert Bosch GmbH, Gerlingen-Schillerhö he, Alemanha | Número de catálogo: 2608605397 |
Referências
- Feldberg, W., Malcom, J. Experiments on the site of action of tubocurarine when applied via the cerebral ventricles. J Physiol. 149, 58-77 (1959).
- Gaddum, J. H. Push-pull cannulae. J Physiol. 155 (1 P), (1961).
- Bito, L., Davson, H., Levin, E., Murray, M., Snider, N.
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Reimpressões e permissões
