Muitos tipos de tumores cerebrais humanos estão localizados em regiões específicas do cérebro e são difíceis de cultivar em cultura. Este protocolo aborda o papel do microambiente tumoral e investiga novos tratamentos medicamentosos analisando células tumorais cerebrais primárias fluorescentes que crescem em uma fatia de cérebro de camundongo organotípica.
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Artigo de método
Um tumor cerebral / Slice organotípicas Co-cultura Sistema de Estudos de Tumor Microenvironment e alvejado droga Terapias
Neste artigo
Resumo
Resumo
Os tumores cerebrais são uma das principais causas de morbidade e mortalidade relacionadas ao câncer. O desenvolvimento de novas terapias para esses cânceres é difícil, pois muitos desses tumores não são facilmente cultivados em condições de cultura padrão. Culturas de neuroesferas em condições livres de soro e xenoenxertos ortotópicos expandiram a gama de tumores que podem ser mantidos. No entanto, muitos tipos de tumores cerebrais permanecem difíceis de propagar ou estudar. Isso é particularmente verdadeiro para tumores cerebrais pediátricos, como astrocitomas pilocíticos e meduloblastomas. Este protocolo descreve um sistema que permite que tumores cerebrais humanos primários sejam cultivados em cultura. Este ensaio quantitativo pode ser usado para investigar o efeito do microambiente no crescimento do tumor e para testar novas terapias medicamentosas. Este protocolo descreve um sistema em que células tumorais cerebrais marcadas com fluorescência são cultivadas em uma fatia organotípica do cérebro de um camundongo juvenil. A resposta das células tumorais aos tratamentos medicamentosos pode ser estudada neste ensaio, analisando as mudanças no número de células na fatia ao longo do tempo. Além disso, esse sistema pode abordar a natureza do microambiente que normalmente promove o crescimento de tumores cerebrais. Este ensaio de co-cultura de fatia organotípica de tumor cerebral fornece um sistema propício para testar novos medicamentos em células tumorais humanas dentro de um microambiente cerebral.
Introdução
Uma pesquisa recente do cancro tem feito avanços significativos na identificação de mutações genéticas, alterações moleculares e os possíveis tratamentos para uma variedade de tumores cerebrais. Apesar deste progresso, tumores cerebrais continuam a ser uma das principais causas de mortalidade relacionada ao câncer em adultos e crianças. Fatores limitantes na investigação tumor cerebral incluem a disponibilidade restrita de amostras de pacientes primários e linhas celulares ea dificuldade em replicar o microambiente único e heterogêneo cérebro em sistemas experimentais acessíveis. Para muitos tumores cerebrais as condições necessárias para manter as células tumorais a....
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Protocolo
Declaração de Ética: O procedimento a seguir envolvendo seres animais foram realizados de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde e orientações foram aprovadas pelo Comitê de Dana-Farber Cancer Institutional Animal Care e Use. Todos os seres humanos trabalho foram revisadas pelos Comitês Conselho de Revisão Institucional do Hospital Brigham and Women e Dana-Farber Cancer Institute, e pela Universidade de Stanford para o uso apropriado, que informaram o consentimento foi obtido de todos os indivíduos, quando necessário, e dispensa adequada dos requisitos de consentimento Obteve-se por estudos com risco mínimo.
Timeline de Fatia Cultura....
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Resultados
Esta seção exemplifica o tipo de resultados que se espera de utilizar o tumor cerebral / organotípico fatia co-cultura para investigar preferências microambiente regional, bem como para testar novas terapias. Mostra-se que o ensaio é concebido para reproduzir o microambiente para tumores cerebrais, como a organização do tecido e o estado proliferativo de fatia é mantida (Figura 3). Nós também demonstram que um aumento do número de células tumorais na fatia ao longo do tempo pode ser parcialmente devido .......
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Discussão
Este protocolo descreve como células tumorais do cérebro pode ser marcado por fluorescência e plaqueadas sobre uma secção sagital do cérebro de um rato e, em seguida, P6 monitorizada durante uma semana em cultura. Este ensaio fatia de co-cultura do tumor cerebral / organotípica pode ser utilizado para determinar o efeito do microambiente regional sobre o número de células tumorais e pode também ser usado como um sistema para medir a eficácia de novos tratamentos com drogas sobre o crescimento de tumores humanos. Estudos.......
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Divulgações
Nenhum dos autores tem interesses conflitantes ou conflitantes.
Agradecimentos
Este trabalho é apoiado por doações do NIH (P01CA142536 para RAS, T32CA009361 para DPY) e da fundação Pediatric Low Grade Astrocytoma.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| HEPES | Invitrogen | ||
| Glicose | Invitrogen | 17502048 | |
| Penicilina Estreptomicina | Life Technologies | 15140-122 | |
| HBSS | Life Technologies | 14185-052 | |
| B-27 | Life Technologies | 17504-044 | |
| N2 | Life Technologies | 17502-048 | |
| Glutamax | Life Tecnologias | 35050061 | |
| Neurobasal-A- Meio menos vermelho fenol | Invitrogen | ||
| Baixo Ponto de Fusão Agarose | Promega | V2111 | |
| Inserções de Cultura de Fatias | Milipore | PICM0RG50 | |
| laminina | Invitrogen | 23017015 | |
| Cm-DiI | Invitrogen | V22888 | |
| EDU (Rotulagem e Detecção) | Life Technologies | c10337 | |
| Microesferas | Life Technologies | F-21010 | |
| Vibratome | Leica | ||
| Software Nikon Eclipse Ni C2si | |||
| ImageJ | |||
| Óculos de Cobertura de 5 mm | Fisher Scientific | 64-0700 (CS-5R) |
Referências
- Heddleston, J. M., et al. Glioma stem cell maintenance: the role of the microenvironment. Curr Pharm Des. 17 (23), 2386-2401 (2013).
- Sasai, K. Shh pathway activity is down-regulated in cultured medulloblastoma cells: implications fo....
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Reimpressões e permissões
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