A realização de ensaios virais em um laboratório BSL-4 é mais complicada em comparação com o trabalho em um laboratório BSL-2 devido às precauções de segurança adicionais necessárias. Aqui, apresentamos uma visão geral das práticas e procedimentos usados dentro de um laboratório BSL-4, ilustrando o uso adequado do gabinete de biossegurança Classe II, gerenciamento/descarte de resíduos e remoção de amostras.
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Artigo de método
Precauções de segurança e Procedimentos Operacionais em um (A) de laboratório BSL-4: 2. Práticas Gerais
Neste artigo
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Resumo
Resumo
Trabalho em um laboratório de contenção biossegurança nível 4 (BSL-4) requer tempo e uma grande atenção aos detalhes. O mesmo trabalho que é feito em um laboratório BSL-2 com patógenos sem alto consequência vai demorar muito mais em um ambiente BSL-4. Este aumento da exigência de tempo é devido a uma multiplicidade de factores que visam proteger o pesquisador da infecções adquiridas em laboratório, o ambiente de trabalho de contaminação potencial e da comunidade local da possível libertação de patógenos de alta-consequência. Dentro do laboratório, o movimento é restrito devido a mangueiras de ar ligados aos ternos de segurança de corpo inteiro obrigatórios. Além disso, a desinfecção de cada artigo que é removido armários de segurança biológica de Classe II (BSC) é necessária. especialistas de laboratório deve ser treinado nas práticas de laboratório BSL-4 e deve mostrar alta proficiência nas habilidades que eles estão realizando. O foco deste artigo é descrever procedimentos e técnicas para garantir laboratório b adequadasiosafety e precisão experimental utilizando um ensaio de placa viral padrão como um procedimento de exemplo. Em particular, as técnicas adequadas para trabalhar com segurança em um ambiente de BSL-4 ao realizar um experimento será visualmente enfatizado. Estas técnicas incluem: a criação de um BSC Classe II em experiências, limpeza adequada do BSC Classe II, quando terminar o trabalho, gestão de resíduos e eliminação segura dos resíduos gerados dentro de um laboratório BSL-4, ea remoção de amostras inativadas de dentro de um BSL- 4 laboratório para laboratório BSL-2.
Introdução
Como a segurança do pessoal de laboratório de manipulação patógenos de alta-consequência (sem profilaxia de infecção nem opções de tratamento existe) é primordial, o Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos Estados Unidos estabeleceu diretrizes para construção de instalações e melhores práticas para a condução segura do trabalho com patógenos em biomédica e laboratórios de análises clínicas, numa perspectiva de biossegurança 1. Através de legislação e regulamentação, muitas das práticas e procedimentos tornaram-se requisitos obrigatórios que devem ser seguidas para o trabalho com esses patógenos. Em os EUA, patógenos que são facilmente transmitidos de ....
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Protocolo
1. Laboratório Entry
- Reúna todos os fornecimentos de um laboratório BSL-2 para o experimento (por exemplo, células, mídia e consumíveis) antes da entrada para o laboratório BSL-4.
- Conclua o procedimento de entrada BSL-4 (descrito em detalhe na referência 7).
2. Preparação de uma Classe II Biossegurança Gabinete na BSL-4 Laboratory
- Uma vez que no interior do laboratório BSL-4, assegurar a lista de verificação interna diariamente (Figura 1) tiver sido completada. Complete a lista de verificação se a lista de verificação não tenha sido previamente preenchida e indicar....
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Resultados
Seguindo os procedimentos adequados dentro do laboratório BSL-4 são críticas para assegurar a conclusão segura e eficaz de ensaios. Ao referir-se a lista de verificação interno diário concluída (Figura 1), o pessoal do laboratório garantir que o equipamento esteja totalmente operacional. Posicionamento apropriado do corpo no centro do BSC garante que a experiência é realizada em condições óptimas de fluxo de ar (Figura 2). A amostra de vírus é diluída em.......
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Discussão
Trabalho em um laboratório BSL-4 requer um tempo considerável e atenção adicional aos detalhes. Qualquer tipo de trabalho neste ambiente requer bem treinado, completa e indivíduos conscientes. O ensaio de placa viral norma fornece um modelo preciso de um procedimento comum para trabalhar com patógenos de alta-consequência no laboratório BSL-4, como o ensaio envolve vários conceitos importantes em que os trabalhadores de laboratório devem ser treinados.
A primeira grande conceito é o uso e ap.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
O conteúdo desta publicação não reflete necessariamente as opiniões ou políticas do Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA (DHHS) ou das instituições e empresas afiliadas aos autores. Este trabalho foi financiado em parte pelo contrato principal do Battelle Memorial Institute com o Instituto Nacional de Alergia e Doenças Infecciosas dos EUA (NIAID) sob o Contrato No. HHSN272200700016I. M.R.H., D.P., L.B., K.J. e J.W. realizaram este trabalho como funcionários do Battelle Memorial Institute. Os subcontratados do Battelle Memorial Institute que realizaram este trabalho são: S.M. como funcionário da MRI Global; M.G.L. como funcionário do Lovelace Respiratory Re....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
| Etanol | Fisher | BP2818500 | |
| 2 ml Placas de poços de 96 | Fisher | 278743 | |
| Pipeta sorológica de 10 ml | Fisher | 13-678-11E | |
| Pipeta sorológica de 25 ml Fisher | 13-678-11 | ||
| Placas de 6 poços | Fisher | ||
| Cristal Violeta | Sigma | HT90132-1L | |
| 10% Formalina Tamponada Neutra | Fisher | 22-050-105 | |
| Tragacanth | Fisher | 50-702-2000 | |
| 20 μ l Ponteiras de Pipeta | Fisher | 21-402-550 | |
| 200 μ l Ponteiras de Pipeta | Fisher | 21-402-561 | |
| 1,000 μ l Ponteiras de Pipeta | Fisher | 21-402-581 | |
| DMEM | Lonza | 12-604Q | |
| FBS | Sigma | F2442-500mL | |
| Penicilina/Estreptomicina | Lonza | 17-602E | |
| 2x EMEM | Qualidade Biológica | 115-073-101 | |
| Pipettor | Drummond | 4-000-101 | |
| 1.000 μ l Pipeta | Chuva | L-1000XLS+ | |
| 200 μ l Pipeta | Chuva | L-200XLS+ | |
| 12-Well, Multicanal 200 μ l Pipetador | Rainin | L12-200XLS+ | |
| 8-Well, Multicanal 1.000 μ l Pipetador | Rainin | LA8-1200XLS | |
| Atestam | Suprimentos Médicos Expressos | ||
| Autoclave | Getinge | GEB 2404 AMB-2 | |
| Saco de Autoclave | Fisher | 01-828E | |
| 2,000 ml Copo | Fisher | 02-591-10H | |
| Bandeja de Autoclave | Fisher | 13-359-20B | |
| Bandeja de Pipeta | Fisher | 13-361-5 | |
| 37 ° C Incubadora | Fisher | WU-39321-00 | |
| Biohazard Can | Rubbermaid Commercial | FG614500 RED | |
| Autoclave Tape | Fisher | 15-903 | |
| Autoclave Rod | Fabricado pela IRF Facility | N/A | |
| Light Box | Fisher | S11552 | |
| Seladora Térmica | Fisher | NC9793612 | |
| Bolsas de Selagem Térmica | Fisher | 01-812-25H | |
| Saco de Risco Biológico | Fisher | 01-828E |
Referências
- Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. 5th edn. Chosewood, L. C., Wilson, D. E. , , U.S. Dept. of Health and Human Services. Washington, D.C. Available from: http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/ (2009).
- Bioterrorism agents/diseases by category. , Centers for Disease Control and Prevention. Atlanta, GA, USA. Available from: http://emergency.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp (2014).
- Executive order 13546 -- Optimizing the security of Biologi....
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Reimpressões e permissões
Errata
Formal Correction: Erratum: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
Posted by JoVE Editors on 12/05/2016. Citeable Link.
A correction was made to the authors section in: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
One of the authors names was corrected from:
Nicole Joselyn
to:
Nicole Josleyn
