Aumentos relacionados à idade na rigidez da lente ocular estão ligados à presbiopia. Este protocolo descreve um método simples e econômico para medir a rigidez da lente do mouse. As lentes de camundongos, como as lentes humanas, tornam-se mais rígidas com a idade. Este método é preciso e pode ser adaptado para lentes de animais maiores.
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Artigo de método
Aplicação sequencial de lamelas de vidro para avaliar a compressão Rigidez do Lens Mouse: tensão e morfométricas Análises
Neste artigo
Resumo
Resumo
A lente do olho é um órgão transparente que refrata e focaliza a luz para formar uma imagem nítida sobre a retina. Nos seres humanos, os músculos ciliares contrato para deformar a lente, levando a um aumento na potência óptica das lentes para focar objetos próximos, um processo conhecido como acomodação. mudanças relacionadas à idade na rigidez da lente têm sido associados a presbiopia, uma redução na capacidade da lente para acomodar, e, por extensão, a necessidade de óculos de leitura. Mesmo que as lentes do mouse não acomodar ou desenvolver presbiopia, modelos de ratos pode fornecer uma ferramenta genética inestimável para patologias lente compreensão, eo envelhecimento acelerado observado em camundongos permite o estudo de mudanças relacionadas à idade na lente. Este protocolo demonstra um método simples, precisa e de custo eficaz para determinar a rigidez da lente do mouse, utilizando lamelas de vidro para aplicar sequencialmente crescente cargas de compressão na lente. Os dados representativos confirmar que as lentes do mouse se tornar mais rígida com a idade, comolentes humanas. Este método é altamente reprodutível e pode, potencialmente, ser ampliados por meios mecânicos lentes de teste a partir de animais maiores.
Introdução
O cristalino é um órgão transparente e avascular na câmara anterior do olho que é responsável pelo foco fino da luz na retina. Uma membrana basal transparente, chamada cápsula do cristalino, envolve uma grande quantidade de células de fibra alongadas cobertas por uma monocamada anterior de células epiteliais1,2. O crescimento ao longo da vida do cristalino depende da proliferação e diferenciação contínuas de células epiteliais no equador do cristalino em novas células de fibra que são adicionadas às gerações anteriores de células de fibra de maneira concêntrica2. Com o tempo, as células da fibra do cristalino sofrem compactação, resultando em um ....
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Protocolo
Todos os procedimentos com animais foram realizados de acordo com as recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório pelos Institutos Nacionais de Saúde e sob um protocolo aprovado pelo Comitê de Cuidado e Uso Institucional animal no Scripps Research Institute.
1. Lens Dissection
- Euthanize camundongos acordo com as recomendações dos Institutos Nacionais de Saúde "Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório" e protocolos de uso instituição animais aprovados.
- Enuclear o olho de ratos usando uma pinça curva. Deprimir o tecido em volta do olho com a pinça para trazer o olho para fora da tomada....
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Resultados
A rigidez e dimensões de lentes 2-, 4- e 8 meses de idade rato foram medidos. Os ratinhos foram todos os animais de tipo selvagem sobre um fundo puro estirpe C57BL6 obtido a partir da criação de animais Facilidade TSRI animal, e cada lente foi carregado com 1 a 10 lamelas. As estirpes axiais e equatoriais foram calculadas como uma função da carga aplicada através da medição do diâmetro equatorial e axial da lente após a adição de cada lamela, e depois normalizando a cada mudança de diâme.......
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Discussão
Há várias considerações importantes quando se usa este método para medir a rigidez da lente. Em primeiro lugar, as lamelas são aplicados para a lente com um ângulo ligeiramente oblíquo (8-8,5 °) em relação ao fundo da câmara (θ). Isto aplica-se um componente muito pequeno da carga equatorial ao invés de axial. No entanto, essa carga equatorial é considerado insignificante, porque o pecado θ ≈ 0,1 19. Se este método é adaptado para lentes maiores, o ângulo das lamelas para o fundo da câmara que têm de ser medi.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo National Eye Institute Grant R01 EY017724 (VMF) e pelo National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and Skin Diseases Grant K99 AR066534 (DSG).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Pinça reta de ponta fina | Fine Scientific Tools | 11252-40 | |
| Tesoura de microdissecação, borda reta | Fine Scientific Tools | 15000-00 | |
| Pinça curva | Fine Scientific Tools | 11272-40 | |
| Pinça de apreensão | Hammacher | HSC 702-93 | Prato de |
| dissecção | Fisher Scientific | 12565154 | |
| Placa de Petri de 60 mm | Fisher Scientific | 0875713A | |
| 1x solução salina tamponada com fosfato (PBS) | Life Technologies | 14190 | |
| 18 x 18 mm lamínulas de vidro | Fisher Scientific | 12-542A | |
| Câmara de medição com divots para segurar as lentes | Feito sob medida (ver Figura 1) | ||
| Espelho de ângulo reto | Edmund Optics | 45-591 | |
| Fonte de luz | Schott/Fostec | 8375 | |
| Microscópio de dissecação iluminado | Olympus | SZX-ILLD100 | Com tubo fotográfico SZ-PT |
| Câmera digital | Nikon | Coolpix 990 |
Referências
- Lovicu, F. J., Robinson, M. L. Development of the ocular lens. , Cambridge University Press. (2004).
- Piatigorsky, J. Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features. Differentiation. 19 (3), 134-153 (1981).
- Glasser, A.
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Reimpressões e permissões
