Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Resumo

Descrevemos um modelo de camundongo de AVC induzido pela oclusão da artéria cerebral média usando uma sutura revestida de silicone. O protocolo pode ser aplicado para induzir oclusão permanente ou isquemia temporária, seguida de reperfusão.

Resumo

A doença cerebrovascular é altamente prevalente na população global e engloba vários tipos de condições, incluindo acidente vascular cerebral. Para estudar o impacto do AVC na lesão tecidual e avaliar a eficácia das intervenções terapêuticas, vários modelos experimentais em uma variedade de espécies foram desenvolvidos. Elas incluem isquemia cerebral global completa, isquemia global incompleta, isquemia cerebral focal e isquemia cerebral multifocal. O modelo descrito neste protocolo é baseado na oclusão da artéria cerebral média (OCM) e está relacionado à categoria de isquemia focal. Essa técnica produz isquemia focal consistente em uma região estritamente definida do hemisfério e é menos invasiva do que outros métodos. O procedimento descrito é realizado em camundongos, dada a disponibilidade de diversas variantes genéticas e o elevado número de testes padronizados para camundongos para auxiliar na avaliação comportamental e do neurodéficit.

Introdução

O estudo de doenças cardiovasculares, tais como acidente vascular cerebral, baseia-se na utilização de modelos in vivo. Para compreender a possível implicação de isquemia, toxicidade da droga, e / ou de tratamento, existe a necessidade de usar um modelo adequado, padronizada, fiável e reprodutível da doença, o que permite estudos comparativos entre os grupos de tratamento. Neste artigo, nós estamos usando ratos, dada a disponibilidade de um grande número de ratos transgénicos e modelos de avaliação padronizados. Raking pontuação para avaliar comportamento motor e déficits seguintes AVC isquêmico experimental ea seguinte de recuperação foram desenvolvidos

Protocolo

Todos os procedimentos foram aprovados pela Universidade de Miami Institutional Animal Care e Use Committee (IACUC), de acordo com os Institutos Nacionais de diretrizes de Saúde (NIH). É necessária a utilização de equipamento estéril e técnicas assépticas.

1. Preparar o Oclusão Sutura

1. Utilize uma sutura de 0,21 mm de diâmetro para os ratos entre 20-25 g e 0,23 mm para os ratos entre 25 - 35 g de peso corporal. A escolha do tipo de sutura para o procedimento MCAO depende do peso do animal.
2. Usando uma caneta de prata, marque a sutura em 9 mm a partir da ponta de silicone revestido. Isto irá servir como um guia para o co....

Resultados

O percurso de inserção do fio de sutura oclusão é demonstrado na Figura 1. A sutura MCAO é para ser encaminhado para a área de oclusão, bifurcando na ICA. oclusão bem sucedida do MCA vai levar à lesão tecidual, visível por coloração TTC. A Figura 2 apresenta imagens de manchas de animais com tratamento simulado (Figura 2A) e de um 60 min de reperfusão de isquemia MCAO animais (coloração em 90 minutos ou 24 horas após a oclusão, a

Discussão

A utilização com sucesso do método descrito MCAO é altamente dependente de uma compreensão da anatomia do fluxo sanguíneo cerebral. Desde o posicionamento correto da sutura é difícil discernir devido à falta de pistas visuais diretos, a prática repetida é importante dominar o procedimento antes de usá-lo para estudos de investigação. volume de curso devem ser analisados ​​para garantir resultados consistentes. A adição de um sistema de laser Doppler pode ajudar a determinar o sucesso da oclusão do fluxo de sangue e deve.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Sutura MCAO 0,23 mm	Doccol	702345PK5Re
Sutura MCAO 0,21 mm	Doccol	702145PK5Re
Grampos	de caneta prateada	503205
Máquina de anestesia	Vetequip	901806
Tesoura cirúrgica	Ferramenta de ciência fina	14558-09
Pinça cirúrgica ponta reta	Fina ferramenta científica	00108-11
Pinça cirúrgica ponta angular	Ferramenta de ciência fina	00109-11
Tesoura de mola	Ferramenta de ciência fina	15000-08
Sutura de nylon	Braintree scintific	SUT-S 104
Sutura de fechamento	VWR	95057-036
Isoflurano	Piramal
2,3,5- Cloreto de trifeniltetrazólio	FisherSci	50-121-8005
Bloqueio cerebral	Braintree scintific	BS-A 5000C
Lâmina de criostato	VWR	89202-606
Opcional:
Periflux Sistema doppler a laser	Perimed	Periflux 5000
Unidade de monitoramento	Perimed	PF 5010 - LDPM