Dextran aumenta a eficiência de Lentivirus transdução das células NK primário murino e humano

Arash Nanbakhsh; Brad Best; Matthew Riese; Sridhar Rao; Li Wang; Jeffrey Medin; Monica S. Thakar; Subramaniam Malarkannan

doi:10.3791/55063

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Artigo de método

Dextran aumenta a eficiência de Lentivirus transdução das células NK primário murino e humano

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DOI:

10.3791/55063

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15 de janeiro de 2018

Arash Nanbakhsh¹ , Brad Best² , Matthew Riese³ , Sridhar Rao⁴ , Li Wang⁵ , Jeffrey Medin⁶ , Monica S. Thakar⁶ , Subramaniam Malarkannan¹^,⁵^,⁶^,⁷

¹Laboratory of Molecular Immunology and Immunotherapy, Blood Research Institute, The Blood Center of Wisconsin, ²Vector Core Lab, Blood Research Institute, The Blood Center of Wisconsin, ³Laboratory of Lymphocyte Biology, Blood Research Institute, The Blood Center of Wisconsin, ⁴Laboratory of Stem Cell Transcriptional Regulation, Blood Research Institute, The Blood Center of Wisconsin, ⁵Department of Microbiology and Immunology, The Medical College of Wisconsin, ⁶Department of Pediatrics, The Medical College of Wisconsin, ⁷Department of Medicine, The Medical College of Wisconsin

Neste artigo

Resumo

O objetivo deste estudo foi a formulação de tecnologias que permitem a transdução de gene bem sucedido na primária natural killer (NK) as células. O dextran-mediada Lentivirus transdução de humanos ou rato primário NK células os resultados, em maior eficiência de expressão do gene. Este método de transdução gene vastamente irá melhorar a manipulação genética de células NK.

Resumo

A transdução eficiente de genes específicos nas células de (NK) assassinos naturais tem sido um grande desafio. Transductions sucesso são fundamentais para definir o papel do gene de interesse no desenvolvimento, diferenciação e função das células NK. Avanços recentes relacionados com os receptores de antígeno Quimérico (carros) em imunoterapia acentuam a necessidade de um método eficiente entregar genes exógenos para linfócitos efetores. As eficiências de transductions gene Lentivirus mediada em humanos primários ou rato NK células permanecem significativamente mais baixas, que é dos principais fatores limitante. Avanços recentes usando polímeros catiônicos, tais como polybrene, mostram uma eficiência de transdução melhorada de gene em células T. No entanto, estes produtos não conseguiram melhorar as eficiências de transdução das células NK. Este trabalho mostra o dextrano, um polissacárido ramificado glucan, melhora significativamente a eficiência de transdução de humanos e células NK primárias de rato. Esta metodologia de transdução altamente reprodutível fornece uma ferramenta competente para transducing humana primária as células NK, que podem melhorar muito clínico gene entrega aplicativos e, portanto, NK baseada em célula imunoterapia.

Introdução

Assassino naturais (NK) células são a população linfocitária principal do sistema imune inato¹. Células NK funcionam como os defensores da primeira linha da resposta imune do hospedeiro contra infecções e tumores de³^,²^,⁴. Células NK também desempenham um papel central no desenvolvimento da tolerância através da secreção de potentes citocinas e quimiocinas⁵. Devido à sua potente capacidade para atacar e eliminar as células do tumor, vários ensaios clínicos estão sendo realizados para avaliar derivados de doador humanas células NK....