A hemorragia descontrolada, uma importante causa de mortalidade entre os pacientes com trauma, pode ser modelada utilizando uma laceração hepática padrão em um modelo murino. Este modelo resulta em perda de sangue consistente, sobrevivência e permite o teste de agentes hemostáticos. Este artigo fornece o processo passo a passo para executar este modelo valioso.
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Artigo de método
Choque hemorrágico não controlado modelado via laceração hepática em ratos com monitorização hemodinâmica em tempo real
Neste artigo
Resumo
Resumo
A hemorragia não controlada é uma causa importante de óbitos evitáveis entre pacientes com trauma. Desenvolvemos um modelo murino de hemorragia descontrolada através de uma lacera- ção hepática que resulta em perda sanguínea consistente, alterações hemodinâmicas e sobrevida.
Os ratos sofrem uma ressecção padronizada do lobo médio esquerdo do fígado. Eles são autorizados a sangrar sem intervenção mecânica. Os agentes hemostáticos podem ser administrados como terapia de pré-tratamento ou de resgate, dependendo do interesse do investigador. Durante o tempo de hemorragia, é realizada monitorização hemodinâmica em tempo real através de uma linha arterial femoral esquerda. Os ratinhos são então sacrificados, a perda de sangue é quantificada, o sangue é recolhido para análise posterior e os órgãos são colhidos para análise da lesão. O desenho experimental é descrito para permitir o teste simultâneo de múltiplos animais.
Hemorragia hepática como modelo de hemorragia não controlada existeNa literatura, principalmente em modelos de ratos e suínos. Alguns destes modelos utilizam monitorização hemodinâmica ou quantificam a perda de sangue mas não têm consistência. O presente modelo incorpora a quantificação de perda sangüínea, monitoramento hemodinâmico em tempo real em um modelo murino que oferece a vantagem de usar linhas transgênicas e um mecanismo de alto rendimento para investigar os mecanismos fisiopatológicos em hemorragia não controlada.
Introdução
O trauma é a principal causa de morte e incapacidade entre os jovens em todo o mundo. 1 A hemorragia não controlada continua a ser uma das principais causas de mortalidade entre os pacientes com traumatismos gravemente feridos. 2 O tratamento do paciente com trauma hemorrágico é duplo: controle do sangramento cirúrgico e ressuscitação e reposição do sangue perdido.
Modelos animais de choque hemorrágico têm sido a pedra angular na pesquisa de trauma e podem ser utilizados na avaliação da fisiopatologia e tratamento de choque traumático / hemorrágico. 3 ,
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Protocolo
Os murganhos foram alojados de acordo com as orientações de cuidados com animais da Universidade de Pittsburgh (Pittsburgh, PA, EUA) e National Institutes of Health (NIH, Bethesda, MD, EUA) em condições livres de agentes patogénicos com ciclos claro-escuro de 12 h e livre acesso a Alimentação padrão e água. Todos os experimentos com animais foram aprovados e conduzidos de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Animal Research and Care Committee da Universidade de Pittsburgh.
1. Campo Cirúrgico e Configuração do Instrumento
- Esterilize todos os instrumentos cirúrgicos, sutura, gaze, aplicadores de ponta de algodão, t....
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Resultados
O modelo de laceração hepática resulta em perda de sangue reproduzível e consistente em ratos. A Figura 1A demonstra o peso consistente de fígado lacerado que pode ser obtido com um desvio padrão de apenas 0,02 g. Esta consistência no peso de fígado lacerado permite a capacidade de reproduzir o modelo entre camundongos e em diferentes configurações experimentais, tais como diferentes protocolos de ressuscitação. Além disso, o peso reproduzível do fígado lacerado, com um .......
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Discussão
O modelo de laceração de fígado murino aqui descrito fornece um modelo confiável e consistente de hemorragia não controlada. Este modelo é simples de executar, mas há etapas importantes que exigem consideração meticulosa. A parte mais desafiadora tecnicamente do modelo é a canulação dos vasos femorais para monitorização hemodinâmica e administração de fluido / fármaco. Cuidado deve ser tomado durante a dissecção do nervo e da arteriotomia / venotomia. É importante não tocar o nervo durante a dissecção dos vasos para evi.......
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Divulgações
Os autores não têm interesses financeiros concorrentes para declarar.
Agradecimentos
O trabalho deste manuscrito foi financiado pelo Dr. Neal pelo Programa Piloto do Instituto de Medicina Vascular em Hemostasia e Biologia Vascular (P3HVB) e pela AAST Research Fellowship. Este trabalho é apoiado por US National Institutes of Health concede 1 R35 GM119526-01 e UM1HL120877-01.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| SS / 45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| tesoura cirúrgica | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| hemostatos | Fine Science Tools | 13009-12 | |
| microtesouras | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| pinça curva de 0,8 mm | Fine Science Tools | 11009-13 | |
| carretel de sutura 6-0 | Ferramentas de Ciência Fina | 18020-60 | |
| sutura 4-0 seda com agulha | Gaze Owens Minor | K188H | |
| 4 x 4 | pode ser comprada através de qualquer fornecedor | ||
| aplicador de ponta de algodão | pode ser comprado através de qualquer fornecedor | ||
| Agulha de 30 G | pode ser comprada através de qualquer fornecedor | ||
| Agulha | de 23 Gpode ser comprado através de qualquer fornecedor | ||
| Seringa de 10 cc | pode ser comprada através de qualquer fornecedor | ||
| Tubo cônico de 50 cc | pode ser comprado através de qualquer fornecedor | ||
| Seringa de 1 cc com agulha 25G | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Tubo de Polietileno 10 100'(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P | |
| Tubo de polietileno 50 100'(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B | |
| torneira de 3 vias | Fisher Scientific | NC9779127 | |
| almofada azul cirúrgica | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Curativos de campo estéreis | Fisher Scientific | NC9517505 | |
| rolos de fita 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| frascos de boca larga de lado reto | VWR | 159000-058 | |
| bandeja de aço inoxidável 8" x 11" | VWR | 62687-049 | |
| fechadura leur macho-macho 3 vias | VWR | 20068-909 | |
| bolsa de esterilização 3" x 8" | VWR | 24008 | |
| bolsa de esterilização 5" x 10" | VWR | 24010 | |
| triângulos de absorção | Fine Science Tools | 18105-03 | |
| Fisher Scientific | E0522687 | ||
| 1.000 clipes de ferida de 7 mm | Fisher Scientific | E0522687 | |
| betadine (4 oz) | pode ser comprado através de qualquer fornecedor | ||
| luvas estéreis | podem ser compradas através de qualquer fornecedor | ||
| eppendorfs | pode ser comprado através de qualquer fornecedor | ||
| Seringa de insulina Lo-Dose de 1/2 cc | Fisher Scientific | 12-826-79 | |
| pequeno barco de pesagem | pode ser comprado através de qualquer fornecedor | ||
| ringers lactato | podem ser comprados através de qualquer fornecedor | ||
| solução salina hepranizada (.1 µL; hep + 9.9 µL; NaCl) | pode ser comprado através de qualquer fornecedor | ||
| de solução salina tamponada com fosfato | pode ser adquirido através de qualquer fornecedor | ||
| pentobarbital | pode ser adquirido através de qualquer fornecedor | ||
| Microscópio Wild M650 com suporte de lança | Analisador Leica | ||
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| TXD-310 (Transdutor Digi-Med) | Micro-Med | TXD-300 | |
| Computador | Dell | ||
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| Oster A5 clippers w. tamanho 40 lâmina | VWR | 10749-020 | |
| almofada de aquecimento circulante 18 x 26 | Harvard | py872-5272 | |
| termômetro retal | Kent Scientific | RET-3 |
Referências
- Chang, R., Cardenas, J. C., Wade, C. E., Holcomb, J. B. Advances in the understanding of trauma-induced coagulopathy. Blood. 128 (8), 1043-1049 (2016).
- Kutcher, M. E., et al. A paradigm shift in trauma resuscitation: evaluation of evolving massive transfusion practices. JAMA surgery. 148 (9), 834-840 (2013).
- Tsukamoto,....
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Reimpressões e permissões
