Análise do filme lacrimal citocinas ajuda no estudo de várias doenças oculares. Grânulo baseado multiplex ensaios são simples e sensível e permitem o teste de alvos múltiplos em amostras com volumes pequenos. Aqui descrevemos um protocolo para lágrima filme cytokine perfis usando o um grânulo baseado multiplex do ensaio.
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Artigo de método
Grânulo baseado Multiplex ensaio para análise de perfis de citocinas lágrima
Neste artigo
Resumo
Resumo
Filme lacrimal é uma mistura complexa de lipídeos, proteínas e minerais que cobre a superfície externa do olho, proporcionando assim a lubrificação, nutrição e proteção para as células subjacentes. Análise de lágrimas é uma área emergente para a identificação de biomarcadores para a predição, diagnóstico e prognóstico de diversas doenças oculares. As lágrimas são facilmente acessíveis e sua coleção é não-invasivo. Portanto, avanço de tecnologias estão ganhando destaque para identificação dos vários analitos em lágrimas para estudar alterações na composição da proteína ou metabólito e sua associação com condições patológicas. Lágrima de citocinas são biomarcadores ideais para estudar a saúde da superfície ocular e também ajudam na compreensão dos mecanismos de diferentes transtornos de superfície ocular como doença de olho seco e conjuntivite vernal. Ensaios de multiplex do grânulo com base têm a capacidade de detectar analitos múltiplos em uma pequena quantidade da amostra com uma maior sensibilidade. Aqui descrevemos um protocolo padronizado de coleta de amostra de lágrima, extração e análise de citocinas perfil usando uma conta com base em ensaio multiplex.
Introdução
As lágrimas são produzidas pela glândula lacrimal e glândulas acessórias e revestir a superfície externa do olho. Filme lacrimal é composto por uma camada lipídica externa e uma camada interna aquosa que inclui proteínas solúveis, mucins e membrana limite mucins. Lágrimas impedem invasão microbiana, fornecem nutrientes e fornecem a lubrificação da superfície ocular. Lágrimas agir como interface entre o ar e o tecido para o transporte de oxigênio para a córnea. 1 filme lacrimal é composto por proteínas, carboidratos, lipídios e eletrólitos. A associação entre proteínas da lágrima com doenças sistêmicas e oculares como glaucoma, doença de olho se....
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Protocolo
os protocolos utilizados neste estudo foram aprovados pelo Conselho de revisão institucional do Tan Tock Seng Hospital, Singapore.
1. análise de Cytokine rasgar
- coleção de lágrimas:
- pedir o assunto para sentar-se confortavelmente em uma cadeira de exame e coloque sua cabeça contra o encosto de cabeça.
- Pedir o assunto para olhar para cima, com cuidado abra as tiras de Schirmer (feitas de papel de filtro Whatman n. 41) e coloque a extremidade arredondada da tira sobre o fórnice inferior do olho e instruir o sujeito a fechar os olhos por 5 min. Ao coletar as lágrimas tomar muito cuidado para mini....
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Resultados
Rasgo as amostras foram coletadas de 8 olhos de 4 indivíduos saudáveis usando tiras de fluxo de lágrima e níveis de citocinas foram analisados usando o protocolo acima mencionado. Todos os indivíduos eram do sexo masculinos e a idade dos quatro temas foi 36, 42, 44 e 52 anos respectivamente. Saúde de superfície ocular e olho seco doença foi avaliada por meio de ensaios clínicos (lágrima filme acabar tempo, Schirmer teste, coloração da córnea, a coloração da conjuntiva, exame de glândula m.......
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Discussão
Citocinas são pequenas proteínas secretadas celulares e potentes imunes moduladores regulando respostas imunes. 32 os perfis de expressão de diversas citocinas em lágrima amostras estão relacionadas a diversas condições patológicas do olho e estudos sobre cytokine perfis ajudam a compreender os mecanismos da patogênese da doença, determinar o estado de saúde ocular, severidade da doença, diagnóstico e progressão. 2 , 5 concentrações de pro.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar. Sem interesse financeiro ou conflito de interesses.
Agradecimentos
O trabalho de pesquisa foi apoiado pela subvenção centro de Tan Tock Seng Hospital personalizado semente financiamento programa 2015; Singapore Eye Research Institute piloto Grant e Tan Tock Seng Hospital passo fundo para concedem.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Painel de contas magnéticas de citocinas / quimiocinas humanas Milliplex MAP -1 kit | Merck, USA | HCYTOMAG-60K-41 | |
| Flexmap 3D luminex instrument | Luminex Corp, Austin, TX, EUA | ||
| xPonent software | Luminex Corp, Austin, TX, EUA | ||
| RBXGenerator software | BIO-RAD, França | ||
| Bio-Plex Manager 6.1 | BIO-RAD, França | ||
| Agitador de placas | Corning, EUA | ||
| TECAN Microplate Washer | Tecan, Suíça | HydroSpeed | |
| Vortex Genie 2 | Scientific Industries inc, EUA | G560E | |
| Pipetas | Mettler Toledo, CA, EUA | ||
| Tubo de microcentrífuga de 1,5 ml | Axygen, EUA | MCT-150-C | |
| Tira de teste de fluxo lacrimal Schirmer | Eye Care and Cure, EUA | 101657 | |
| calibração 3D Flexmap | Luminex Corp, Austin, TX, EUA | 40-028 | |
| Kit de verificação 3D Flexmap | Luminex Corp, Austin, TX, EUA | 40-029 | |
| de exame ocular |
Referências
- Conrady, C. D., Joos, Z. P., Patel, B. C. Review: The Lacrimal Gland and Its Role in Dry Eye. J Ophthalmol. 7542929, (2016).
- von Thun Und Hohenstein-Blaul, N., Funke, S., Grus, F. H. Tears as a source of biomarkers for ocular and systemic diseases. Exp Eye Res. , 126-137 (2013).
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Reimpressões e permissões
