Descrevemos uma plataforma baseada em chip para o cultivo tridimensional de células em micro-biorreatores. Um chip pode abrigar até 10 milhões. células que podem ser cultivadas sob condições estritamente definidas em relação ao fluxo de fluidos, etc tensão de oxigênio em um circuito de circulação estéril, fechado.
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Artigo de método
Chip baseado em Cultura de Células tridimensional em perfundidos Micro-biorreatores
Neste artigo
Resumo
Resumo
Nós desenvolvemos um chip baseado em sistema de cultura de células para o cultivo tridimensional de células. O chip é normalmente fabricados a partir de polímeros não-biodegradáveis, por exemplo, policarbonato ou polimetilmetacrilato por moldagem por injeção micro, estampagem a quente micro ou micro termoformagem. Mas, ele também pode ser fabricado a partir de polímeros bio-degradáveis. Suas dimensões são 0,7 1 x 20 x 20 x 0,7 1 mm (AxLxP). As principais características dos chips usados são ou uma grade de até 1.156 cúbicos micro-recipientes (cf-chip) cada um do tamanho de 120-300 x 300 x 300 μ (AxLxP) ou recessos redonda com diâmetro de 300 μ e uma profundidade de 300 μ (r-chip). O andaime pode abrigar 10 milhões. células em uma configuração tridimensional. Para um nutriente ideal e fornecimento de gás, o chip é inserido em uma carcaça biorreator. O biorreator é parte de um circuito fechado de circulação estéril que, na configuração mais simples, é adicionalmente constituído por uma bomba de roletes e um reservatório com uma média de fornecimento de gás. O biorreator pode ser executado em perfusão, superfusão, ou mesmo um modo de operação mista. Temos cultivou com sucesso linhagens de células, bem como células primárias ao longo de períodos de várias semanas. Para as células do fígado de ratos primária que poderia mostrar uma preservação das funções organotípicas por mais de duas semanas. Para as linhas de células de carcinoma hepatocelular pudéssemos mostrar a indução de genes específica do fígado ou não apenas um pouco expressa em cultura em monocamada padrão. O sistema também pode ser útil como um sistema de cultivo de células-tronco desde experimentos primeira diferenciação com linhas de células-tronco foram promissores.
Protocolo
Este artigo descreve a utilização de uma plataforma baseada em chip (fig. 1) para o cultivo tridimensional de linhagens celulares, bem como células primárias. Uma vez que muitas células não expressam funções organotípicas somente em um ambiente 3D, temos desenvolvido um chip de polímero que fornece uma plataforma para que as células podem aderir em todas as direções espaciais, e que pode ser montado em uma carcaça de biorreatores para o controle de fluxo de fluido , etc tensão de oxigênio Dependendo do projeto experimental, a superfície do polímero pode ser modificado por várias técnicas, por exemplo, radiação UV, PECVD, γ-enxertia ou química úmida convencional.
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Discussão
Nós desenvolvemos uma plataforma baseada em chip para o cultivo tridimensional de células em biorreatores ativamente perfundidos micro. Os chips podem ser fabricados a partir de não-biodegradáveis, bem como polímeros biodegradáveis por moldagem por injeção micro, estampagem a quente e micro técnicas de termoformagem 3. Dependendo do projeto experimental, a superfície do polímero pode ser modificado por irradiação UV-4. Linhagens de células de hepatócitos, bem como hepatócitos primários de rato pode ser cultivada com .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a declarar.
Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer Mechthild Herschbach e Anke Dech de assistência técnica excelente.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Células | Outro | ATCC | HB-8065 | |
| Colágeno I de cauda de rato | Reagente | Roche Group | 11 179 179 001 | |
| Kit PARIS | Reagente | Ambion | AM1921 | |
| Syto16 | Reagente | Invitrogen | S7578 | |
| anticitoceratina 18 | Anticorpo | Abcam | ab668 | Anticorpo primário, monoclonal de camundongo, utilizado em diluição 1/100 em PBS |
| Anti E-caderina | Anticorpo | Abcam | ab1416 | Anticorpo primário, monoclonal de camundongo, utilizado em diluição 1/50 em PBS. |
| Antialbumina de cabra | Reagente | Bethyl Laboratories | E80-129 | Anticorpo primário, anticorpo de cabra anti-albumina humana, utilizado em diluição 1/200 em PBS |
| Anticorpo IgG1 de coelho anti-murino | Anticorpo | Invitrogen | A11059 | Anticorpo secundário, conjugado com Alexa Fluor 488, utilizado em diluição 1/100 em PBS + 0,5% BSA |
| Cy3 anti-IgG de cabra | Reagente | Jackson ImmunoResearch | 705-165-003 | Anticorpo Cy3 AffiniPure de jumento anti-IgG de cabra, utilizado em diluição 1/700 em PBS + 0,5% BSA |
Referências
- Berry, M. N., Friend, D. S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: A biochemical and fine structural study. J. Cell Biol. 53, 506-520 (1969).
- Seglen, P. O. Preparation of rat liver cells. 3. Enzymatic requir....
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Reimpressões e permissões
