Detecção de vírus de Bioaerossóis usando resina de troca de ânion

Joshua W. Schaeffer; Jeffrey C. Chandler; Margaret Davidson; Sheryl L. Magzamen; Alma Pérez-Méndez; Stephen J. Reynolds; Lawrence D. Goodridge; John Volckens; Alan B. Franklin; Susan A. Shriner; Bledar Bisha

doi:10.3791/58111

É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Detecção de vírus de Bioaerossóis usando resina de troca de ânion

7.9K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/58111

⸱

22 de agosto de 2018

Joshua W. Schaeffer¹ , Jeffrey C. Chandler² , Margaret Davidson¹^,³ , Sheryl L. Magzamen¹ , Alma Pérez-Méndez⁴ , Stephen J. Reynolds¹ , Lawrence D. Goodridge⁵ , John Volckens⁶ , Alan B. Franklin² , Susan A. Shriner² , Bledar Bisha⁷

¹High Plains Intermountain Center for Agricultural Health and Safety, Department of Environmental and Radiological Health Sciences, Colorado State University, ²National Wildlife Research Center, Wildlife Services, Animal and Plant Health Inspection Service, United States Department of Agriculture, ³Western Sydney University, ⁴Leprino Foods, Inc, ⁵Department of Food Science and Agricultural Chemistry, McGill University, ⁶Department of Mechanical Engineering, Colorado State University, ⁷Department of Animal Science, University of Wyoming

Neste artigo

Resumo

Um ânion trocar o método à base de resina, adaptado para amostragem de bioaerosol baseado em choque de vírus é demonstrada o líquido. Quando acoplado com deteção molecular a jusante, o método permite a fácil e sensível de detecção de vírus de Bioaerossóis.

Resumo

Este protocolo demonstra um método de amostragem de bioaerosol personalizado para vírus. Neste sistema, a resina de troca de ânion é acoplada com dispositivos de amostragem líquida baseada no choque do ar para a concentração eficaz de vírus com carga negativa da Bioaerossóis. Assim, a resina serve como um passo adicional de concentração do fluxo de trabalho de amostragem de bioaerosol. Extração de ácidos nucleicos de partículas virais, em seguida, é executada directamente a partir da resina de troca de ânion, com a amostra resultante apropriada para análises moleculares. Além disso, este protocolo descreve uma câmara de bioaerosol custom-built, capaz de gerar Bioaerossóis carregados de vírus sob uma variedade de condições ambientais e permitindo a monitorização contínua das variáveis ambientais tais como temperatura, umidade, velocidade do vento e a concentração em massa de aerossol. A principal vantagem de usar este protocolo é o aumento da sensibilidade de detecção viral, avaliada através da comparação direta para um impinger líquido convencional sem modificações. Outras vantagens incluem o potencial de concentrar diversos vírus de carga negativa, o baixo custo da resina de troca de ânion (~$0.14 por exemplo) e facilidade de uso. As desvantagens incluem a incapacidade do presente protocolo para avaliar a infectividade de resina-adsorvido em partículas virais, e potencialmente a necessidade para a otimização da reserva líquida de amostragem usado dentro do impactor.

Introdução

A finalidade desse método é proporcionar uma plataforma de amostragem de bioaerosol altamente sensível para facilitar a detecção molecular do vírus de carga negativa de Bioaerossóis. Microorganismos, incluindo partículas virais, Bioaerossóis podem sobreviver por longos períodos de tempo de¹. Bioaerossóis podem viajar distâncias relativamente longas e manter a viabilidade e a infectividade, como evidenciado por um surto de doença do legionário que originou-se industrial localizados a uma distância de 6 km dos indivíduos afetados de torres de resfriamento e resultou em 18 mortes². Transmissão indirecta de vírus para os ser....