Avα β3 integrina é um tipo de proteína de adesão que é altamente expressa em células endoteliais ativadas submetidos a angiogênese. Assim, avaliar a integridade da integrina é de grande interesse em Oncologia. Aqui, apresentamos um método para preparar radiopeptides Ga-rotulado de 68e um método para avaliar sua eficácia biológica.
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Artigo de método
Preparando um 68Ga-rotulado arginina glicina aspartato (RGD)-peptídeo para angiogênese
Neste artigo
Resumo
Resumo
Avα β3 integrina é uma molécula de adesão heterodimérica envolvidos na angiogênese e migração de células do tumor. A integrina é overexpressed em células endoteliais tumor angiogênico, onde normalmente tem uma baixa concentração. Esta expressão específica de αvβ3 torna um biomarcador válido para antiangiogênica e drogas de imagem. Como uma modalidade de imagem funcional, tomografia por emissão de pósitrons (PET) fornece informações sobre bioquímicos e fisiológicos muda na vivo, devido a sua alta sensibilidade única na escala nanomolar. Daí, baseada em radiometal radiofármacos de PET recebeu grande atenção para a quantificação não-invasivo de angiogênese do tumor. Este artigo fornece um protocolo sistêmico para preparar um novo peptídeo radiometal-etiquetados para a avaliação da angiogênese. Este protocolo contém informações sobre confiabilidade radioquímica, Lipofilicidade, absorção celular, estabilidade de soro e propriedades farmacocinéticas. A 68Ga-RGD-peptídeo é um dos ligantes PET representativas em direção αvβ3 integrina. Aqui, apresentamos um protocolo para preparar um 68Ga-RGD-peptídeo e a avaliação da sua eficácia biológica.
Introdução
Angiogênese é um processo biológico que é caracterizado pelo desenvolvimento de novos vasos sanguíneos. Entre muitos fatores angiogenetic, αvβ3 integrina está associada a invasividade, porque a integrina é altamente expressa em vasos de tumor angiogênico mas está ausente no tecido normal1.
Radiolabeled peptídeos de ligação ao receptor, com domínio de aspartato (RGD) glicina de arginina, que tem uma elevada afinidade para os receptores integrinas αvβ3 , são considerados promissores angiogênese agentes2,3 d....
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Protocolo
Todos os experimentos com animais foram conduzidos em conformidade com as orientações para o cuidado e o uso de animais de pesquisa em protocolos aprovados pelo Instituto de Coreia de radiológica e Comitê de estudos médico Ciências Animal. Todos os reagentes e solventes foram comprados e utilizados sem mais purificação. NOTA-RGD-peptídeos foram preparadas de acordo com a literatura métodos15.
Cuidado: 68Ga emite tanto pósitrons e raios gama. Todos os experimentos, incluindo contacto directo ou indirecto com substâncias radioactivas, devem ser efectuados por treinados e autorizados pelo pessoal. Ao manusear....
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Resultados
A quelação de 68GaCl3 com o NOTA-RGD-peptide era simples, sendo o rendimento radiolabeling 99%. Impurezas de reação foram removidas com êxito como mostrado na Figura 2. A pureza radioquímica de 68Ga-RGD-peptídeo era superior a 99%, sendo atividade específica ao final da síntese 90-130 MBq/nmol (Figura 3).
A absorção de célula valores par.......
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Discussão
No presente estudo, apresentamos um protocolo para preparar um radiopeptide visando αvβ3 integrina e sua avaliação biológica. Desenvolvimento de drogas tradicional envolve um procedimento complicado. Requer uma grande quantidade de material de referência e um tempo relativamente longo de avaliação. Embora a metodologia sugerida não pode substituir o processo de avaliação delicado, este sistema pode ser usado para fins de triagem. Esta proposta sistema reduziria consideravelmente o tempo e custo.
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por um programa de desenvolvimento da pesquisa nacional Fundação da Coreia (NRF) subvenção financiada pelo governo coreano (n º 2017M2A2A6A02019904) e pesquisa Nuclear.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 68Ga/68Ge gerador | ITG | Company-10 | mCi |
| Solução de cloreto de hidrogênio | Sigma-aldrich | 84429 | |
| Acetato de sódio | Sigma-aldrich | S2889 | |
| C18 cartucho de fase reversa | Waters | WAT020515 | |
| 0,22-μ m filtro estéril | Milllipore | SLGV033RS | |
| Scanner Radio-TLC | Bioscan | AR2000 | |
| Papel ITLC | Agilent | SGI001 | |
| Ácido cítrico | Sigma-aldrich | 251275 | |
| HPLC | Waters-Waters 1525 sistema contendo bomba binária, matriz de fotodiodos (Waters 2998), detector de radioatividade (Raytest, Gabi) | ||
| Acetonitrila | J.T. Baker | 14-650-359 | |
| Ácido trifluoroacético | Sigma-aldrich | 302031 | |
| Meio Eagle modificado de Dulbecco | Thermo fisher scientific | 11965092 | |
| soro fetal | T175 16000044 | Thermo fisher scientific | |
| Corning | CLS431080 | ||
| Tripsina-EDTA (0,25%) | Thermo fisher scientific | 25200072 | |
| penicilina-estreptomicina | Thermo fisher scientific | 15240112-contador | |
| Perkin | Wizard 3 | ||
| Seringa Insunlin | Becton Dickinson | 326105 | |
| bomba Synringe | Harvard Aparelho | 70-4500 | |
| micro-PET/CT | Siemens Inveon | - |
Referências
- Friedlander, M., et al. Definition of Two Angiogenic Pathways by Distinct alpha v integrins. Science. 270 (5241), 1500-1502 (1995).
- Janssen, M. L., et al. Tumor Targeting with Radiolabeled alpha v beta 3 Integrin Binding Peptides in a Nud....
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Reimpressões e permissões
