Hipertensão ocular crônica é induzida pela aplicação de uma sutura de circumlimbal em ratos e camundongos, levando à deterioração funcional e estrutural das células ganglionares da retina consistentes com glaucoma.
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Artigo de método
Um modelo de Glaucoma induzido por sutura Circumlimbal em ratos e camundongos
Neste artigo
Resumo
Resumo
A sutura de circumlimbal é uma técnica para induzir o glaucoma experimental em roedores por cronicamente elevar a pressão intra-ocular (Pio), um conhecido fator de risco para o glaucoma. Este protocolo demonstra um guia passo a passo sobre essa técnica no longo Evans ratos e camundongos C57BL/6. Sob anestesia geral, uma "" sutura em bolsa é aplicada na conjuntiva, ao redor do Equador e para trás ao limbo do olho. O olho companheiro serve como um controle não tratado. Ao longo da duração do nosso estudo, que foi um período de 8 semanas para ratos e 12 semanas para ratos, IOP manteve-se elevado, medida regularmente pelo tonometria de rebote em animais conscientes sem anestesia tópica. Em ambas as espécies, os olhos suturados mostraram electroretinogram características consistentes com disfunção da retina interna preferencial. Tomografia de coerência óptica mostrou desbaste seletivo da camada retinal da fibra do nervo. Histologia da retina rato na secção encontrada reduzida densidade de células na camada de células ganglionares, mas nenhuma mudança nas outras camadas celulares. Coloração de retinae rato apartamento montado com um marcador específico de células ganglionares (RBPMS) confirmou a perda de células ganglionares. A sutura de circumlimbal é um simples, minimamente invasiva e econômica maneira de induzir hipertensão ocular que leva à lesão de células ganglionares em ratos e camundongos.
Introdução
Modelos animais fornecem que uma plataforma importante para a investigação do laboratório de celular processos subjacentes patogênese de glaucoma, bem como avaliar possíveis intervenções terapêuticas. Foram desenvolvidos vários modelos inducible para produzir elevação sustentada da pressão intra-ocular (Pio), o mais importante fator de risco para o glaucoma. Métodos que foram aplicados para elevar o IOP incluem: injeção salina hipertônica no episcleral veias1, fotocoagulação laser da malha trabecular2 ou do estroma veias3e injeção intracameral de substâncias tais como fantasma vermelho glóbulos
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Protocolo
Todos os procedimentos experimentais foram realizados de acordo com o Australian código de práticas para o cuidado e o uso de animais para fins científicos, definida pelo Conselho de pesquisa médica e nacional de saúde na Austrália. Aprovação ética foi obtida do Comitê de ética Howard Florey Institute Animal (aprovação número 13-044-hum e 13-068-hum para ratos e ratos, respectivamente).
1. medição de pressão intra-ocular em ratos conscientes
- Ajuste o tonometer de rebote de laboratório para o rato. Swaddle o rato acordado em um pedaço de pano macio para acalmar o animal. Expor a cabeça e o pescoço. Pressione cuidadosamente o tronco....
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Resultados
Os seguintes resultados em ratos18 e ratos16 foram anteriormente relatados e são resumidos aqui. A sutura circumlimbal produziu um padrão semelhante de elevação IOP em ratos e camundongos (Figura 2). Um breve spike IOP, até 58,1 ± 2,7 mmHg em ratos e 38,7 ± 2,2 mmHg em camundongos, verificou-se imediatamente após o procedimento de sutura. Em ratos, magnitude IOP gradualmente reduzida ao longo do tempo a ser 44 ±.......
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Discussão
A sutura de circumlimbal é um novo modelo de hipertensão ocular crônica. Além dos estudos, do qual os resultados representativos são oriundos de16,18, este modelo animal tem sido utilizado em uma série de recentes estudos15,23,24,25 ,26. Comparação entre estes relatórios anteriores mostra que o método.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho é financiado pela National Health e Conselho de pesquisa médica da Austrália projeto grant (1046203), bolsa de futuro de Conselho de pesquisa australiano (FT130100338).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| solução salina normal | Baxter International Inc | AHB1323 Manter a | hidratação da córnea durante a cirurgia |
| Clorhexadina 0,5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | Desinfecção do instrumento cirúrgico |
| Isoflurano 99,9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Nome Proprietário: Anestésico por inalação Isoflo(TM). Anestésico inalatório de grau farmacêutico misturado com gás oxigênio para procedimento de sutura |
| lubrificante ocular | Alcon Laboratories | 1618611 | Nome Proprietário: Genteal, lubrificante ocular para manter o outro olho úmido |
| Suporte de agulha (microcirurgia) | World Precision Instruments | 555419NT | Para segurar a agulha durante a cirurgia ocular |
| Proxymetacaína 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 5875-06-9 | Analgesia ocular tópica |
| Tesoura (microcirurgia) | Instrumentos de precisão mundiais | 501232 | Para cortar o coto de sutura excessivo durante a ligadura |
| Cortina cirúrgica | Suprimentos médicos vitais | GM29-612EE | Garantir ambiente estéril durante |
| a cirurgia Agulha de sutura para ratos (microcirurgia) Agulhas | médicas Ninbo | 151109 | 8-0 sutura de nylon fixada com agulha redonda, ponta 3/8, agulha dupla, comprimento da sutura 30cm |
| Agulha de sutura para camundongos (microcirurgia) | Agulhas médicas Ninbo | 160905 | 10-0 sutura de nylon presa com agulha redonda, ponta 3/8, agulha dupla, comprimento da sutura 30cm |
| Pinças (microcirurgia) | World Precision Instruments | 500342 | Manipular tecidos durante a cirurgia ocular |
| tonômetro | de reboteTONOLAB, iCare, Helsínquia, Finlândia | TV02 | para monitorização da pressão intraocular |
Referências
- Morrison, J. C., et al. A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage. Experimental Eye Research. 64 (1), 85-96 (1997).
- Feng, L., Chen, H., Suyeoka, G., Liu, X. A laser-induced mouse model of chronic ocular hypertension to characterize visual defects. Journal of Visualized Experiments. (78), (2013).
- Chiu, K.,....
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Reimpressões e permissões
