Waiting
Processando Login

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Developmental Biology
Click here for the English version

Developmental Biology

שיטת In Vivo ללמוד העכבר דם Testis מכשול שלמות

Published: December 2, 2018 doi: 10.3791/58512
Automatic Translation
*1, *1, *2, 1, 1, 1, 1
1State Key Laboratory of Reproductive Medicine, Nanjing Medical University, 2Center for Reproductive Medicine, Department of Obstetrics and Gynecology, The First Affiliated Hospital of USTC, Division of Life Sciences and Medicine, University of Science and Technology of China
* These authors contributed equally

Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להעריך את תקינות מחסום דם-testis על ידי הזרקת אינולין-FITC לתוך האשכים. זוהי שיטה יעילה ויוו ללמוד שלמות מחסום דם testis. זה יכול להיות בסכנה על ידי אלמנטים גנטיים וסביבתיים.

Abstract

יצירת זרע הוא הפיתוח של spermatogonia לתוך spermatozoa בוגרת ב בקוריאנית וכמה של בזרמה. תהליך זה נתמך על ידי צמתי תא סרטולי-מחסום דם-testis (BTB), אשר היא המכשול הכי צפופה רקמות בגוף יונקים segregates האפיתל וכמה לתוך שני תאים, על הבסיס של adluminal. BTB יוצרת microenvironment ייחודי בתאי הנבט, מיוזה אני / II ועל ההתפתחות של postmeiotic spermatids לתוך spermatozoa דרך spermiogenesis. כאן, אנו מתארים וזמינותו אמין כדי לפקח BTB שלמות של העכבר testis ויוו. BTB שלם חוסם פעפוע של FITC מצומדת אינולין מן הבסיס כדי תא הפסגה של בקוריאנית וכמה. טכניקה זו מתאימה ללמוד מועמדים הגן, וירוסים או חשיפה לרעלים סביבתיים שעשויים להשפיע על תפקוד BTB או תקינות, עם הליך קל, דרישה מינימלית של היכולות הכירורגיים לעומת שיטות אלטרנטיביות.

Introduction

בתרבית של יצירת זרע נחשב תהליך מובנה מאוד שמקיף התחדשות עצמית spermatogonial ובידול דרך spermatocytes לתוך spermatozoa הפלואידי באמצעות מיטוזה, מיוזה, spermiogenesis, שבמהלכו דרמטי שינויים ביוכימיים, מורפולוגיים להתרחש. מתפתחות בתאי הנבט מועברים בהדרגה מבסיס של צנורית וכמה לכיוון לומן. תהליך זה מוסדר על ידי תאים תאים הקשר בין בתאי הנבט סרטולי תאים1,2. התאים Sertoli הסמוכים טופס BTB הממוקמת ליד בסיס צנורית וכמה. BTB מחלק פיזית האפיתל של הבסיס, תא של adluminal. בשלבים השמיני - התשיעי של מחזור אפיתל, preleptotene/leptotene spermatocytes מן התאים הבזליים לנדוד בין BTB, להזין את התאים adluminal3. לכן, תפקוד BTB נועד לספק של microenvironment immunoprivileged להשלמת מיוזה, spermiogenesis4,5,6. בניגוד רקמות דם מכשולים אחרים (למשל, מחסום הדם - מוח) רק המורכבות צמתי צר (TJs), BTB נוצרת על ידי ארבעה צמתים שונים (TJs מתמחה רוחות, הפער צמתי, ביניים מבוסס-פילמנט desmosomes) בין סרטולי תאים1,7.

מחקרים רבים השתמשו מהונדס גנטית עכברים הידבקות בווירוסים, חשיפה לרעלים סביבתיים כדי לחקור מנגנונים של BTB שלמות7,8,9. השיבוש BTB מעוררת יצירת זרע לקוי ולא subfertility או אי פוריות. מאז היווצרות BTB ותקינות אושרו להיות מושפעות מגעים בין תאי סרטולי8, במבחנה מודל המבוסס על תרבות העיקרי של תאי סרטולי מבודד שימש למחקר BTB. עם זאת, מודל זה במדויק לא יכול לחקות BTB dynamics vivo בתוך. יתר על כן, אין תרבות משותפת כזו תאי נבט עם תאי סרטולי נוצרה כמו מסוגל המשקף את כל הרכיבים פונקציונלי מבניים הרלוונטיים של ה BTB10,11.

באופן כללי, אין ויוו מבחני יושרה BTB מבוססים בדרך כלל על מולקולות קטנות, כגון EZ-קישור Sulfo-NHS-LC-ביוטין, אינולין FITC מצומדת (אינולין-FITC). בדרך כלל, פעפוע של ביוטין או אינולין-FITC מן התא הבסיס חסומה על-ידי BTB מבנה. לכן, אנו מסוגלים להשתמש בשיטה זו כדי להעריך את היקף הנזק BTB לעומת קבוצות שליטה. בעוד BTB יכול להיות בסכנה עם סוגים מסוימים של גירויים, כגון טיפול עם קדמיום כלוריד (CdCl2)12, BTB הופך נגיש מולקולות קטנות, אשר בסופו של דבר הזן תא adluminal מחוונים.

מוקדם ויוו BTB שלמות assay המוחלשים ביוטין או אינולין-FITC לתוך ומוחלף על, אשר כרוך הניתוח, היא פולשנית, מסובך, גוזלת זמן. חוץ מזה, כל החומרים כתב מפוזרת באמצעות הגוף כולו דרך מחזור הדם, הריכוז המקומי של ביוטין או אינולין-FITC ב בקוריאנית וכמה הוא מוגבל. יתר על כן, חשיפה מערכתית עלול לגרום לתגובות החיסון. כאן, אנו מציגים פשוטה ויעילה ויוו BTB שלמות assay הפעלת הזרקה ישירה של aliquot קטן של אינולין-FITC לתוך interstitium של מבחן. שימוש של פלורסנט שיטת תיוג, התהליך מכתימים הוא נוח, כמו נוגדנים משניים אינם נדרשים. כאן, התהליך של הפלורסנט הזנת בזרמה הוא מדמיין.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל הניסויים שבוצעו אושרו על ידי ועדת נאנג'ינג הרפואי האוניברסיטאי. זכר C57BL/6 הוחזקו בתנאים מבוקרים photoperiod ועכברים סופקו עם מים ואוכל.

1. תכשירים

  1. נימים microinjection
    1. השתמש microinjection נימים עם הקוטר החיצוני, dimeter הפנימית, אורך של 1.0 מ מ, מ מ 0.8 ס מ 10.0, בהתאמה.
    2. משוך נימים זכוכית עם פולר נימי (איור 1 א'). לבדוק ולהתאים את ההגדרות בהתאם המכונה פולר קפילרי נמצא בשימוש.
    3. לשבור את הטיפים פיפטה עם מלקחיים להשתמש כדי להשיג נימים של קוטר 50-מיקרומטר בקצה.
      הערה: הטיפים עשוי להיות ארוך מדי לחדור בזרמה.
    4. לחדד את הטיפ בזווית של 30 מעלות על-ידי שימוש של beveler micropipette (איור 1C).
  2. ריאגנטים
    1. להכין סודיום פנטוברביטל 1%: להמיס סודיום פנטוברביטל 100 מ ג, 10 מ ל תמיסת באגירה פוספט (PBS) (שלב 2.3.3).
    2. הכינו 10 מ"ג/מ"ל אינולין-FITC: להמיס אינולין-FITC 1 מ ג, 100 μL ל- PBS (שלב 2.1.6).
    3. להכין 4% paraformaldehyde: להמיס paraformaldehyde (PFA) 4 g ב- 100 מ של PBS (שלב 2.3.3).
    4. הכנת 30% סוכרוז: להמיס סוכרוז 3g ב 10 מ"ל ל- PBS (שלב 2.3.4).
    5. הכנת 0.1% כלוריד קדמיום: להמיס קדמיום כלוריד 10 מ ג של 10 מ"ל ל- PBS (שלב 2.1.1).

2. שיטות

  1. הכנה מטופל והרדמה
    1. שוקל 8 בת C57BL/6 עכברים זכרים ולחשב את המינון הנדרש של CdCl2. מתייחסים קבוצה של עכברים (n = 3) עם CdCl2 (5 מ"ג/ק"ג b.w., i.p.) עבור 3 d לפני הניתוח. להתייחס לקבוצה אחרת של עכברים זכר בן שבוע 8 C57BL/6 (n = 3) עם PBS הפקד.
    2. לבצע ניתוח בתנאים aseptic באמצעות מזרק סטרילי, מחט, מספריים, מלקחיים.
    3. להכין את הפתרון עובד הרדמה טרי. המינון הנדרש של הרדמה הוא 70 מ ג של סודיום פנטוברביטל/kg של משקל גוף. בממוצע, העכבר C57BL/6 מבוגרים בגיל 8 שבועות שוקל ~ 25 גרם, המתאים μL 175 של 1% סודיום פנטוברביטל (1.75 מ ג לכל העכבר).
      הערה: סודיום פנטוברביטל הוא מומס סטרילי באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS). הפתרון סוננו לפי 0.22 יחידת מסנן לפני השימוש בו.
    4. לנקות את האזור. למטרת ניתוח עם 75% אתנול ולכסות את האזור עם מגבת נקייה רקמות.
    5. את החימום תרמוסטטי ולהתאים את הטמפרטורה ל- 37 מעלות צלזיוס.
    6. להכין את הפתרון עובד אינולין-FITC (10 mg/mL) ביום של הניתוח.
  2. הליך כירורגי
    1. שוקל 8 בת C57BL/6 עכברים זכרים ולחשב את המינון הנדרש של הרדמה.
    2. לבצע זריקה בקרום הבטן של סודיום פנטוברביטל באמצעות המזרק עקר 1-mL. שמור את העכבר בתוך כלוב נקי.
    3. לבחון את תגובת רפלקס העין ואת דפוס הנשימה של העכבר כדי לוודא שזהו אכן בהרדמה מלאה.
      הערה: בדרך כלל, 10-15 דקות נדרשים עד העכבר עמוקות מרדימים, עם חוסר מוחלט של הבוהן קמצוץ התגובה ותחזוקה של לנשום לאט, יציב.
    4. להזיז את העכבר אל אזור הפעולה ולכסות אזור העין שלו עם נייר טישו לח למנוע יובש במהלך הרדמה (איור 2 א).
    5. לגלח את השיער בבטן שלה עם גילוח ולחטא באזור הניתוח עם 75% אתנול.
    6. עם מספריים חדות, עושים חתך בעור 1 ס"מ מעל בלוטות preputial לחשוף את דופן הבטן. הרם את דופן הבטן עם מלקחיים קטנים, עושים חתך 0.5 ס מ כדי לחשוף את חלל הצפק (איור 2B).
    7. להשתמש מלקחיים כדי לחפש עבור רפידות שומן סביב יותרת האשך testis. משוך בזהירות את רפידות השמן לחשוף בזרמה המצורפת בבירור (איור 2C ו- 2D). בדרך כלל, פועל על testis אחד בכל פעם.
      הערה: להימנע מלגעת את רפידות השמן ואת testis עם הידיים.
    8. מניחים נייר (9 ס מ קוטר) מתחת רפידות השמן ואת testis (איור 2C).
    9. להזריק אינולין-FITC לתוך פיפטה microinjection וחבר אותו ליחידה micromanipulator (איור 1D). בעדינות להוסיף על פיפטה microinjection תחת albuginea tunica, טען סך של 20 μL של אינולין-FITC interstitium של בזרמה (איור 2E ו- 2F).
      הערה: נלחצים היטב על פיפטה microinjection כדי למנוע את העברתו.
    10. לפקח על התנועה של אינולין-FITC ב בזרמה (איור 2G).
    11. מיד לשים בזרמה בחזרה לתוך חלל הבטן לאחר הסיום של הזריקה.
    12. חזור על הפעולות על בזרמה contralateral. Testis זה מוזרק עם μL 20 ל- PBS כפקד.
    13. לסגור את העור עם תפירה, להזיז את העכבר כדי כרית חום של תנור ברים, מערכות אינסטלציה (איור 1B). לנהל מינון של 1 מ ג של שיכוך כאב (הבופרנורפין) לכל 1 ק ג של משקל הגוף באמצעות הזרקה תת עורית.
  3. קציר את האשכים והכנות מקטעים קפוא
    1. 40 דקות לאחר ההזרקה המתת חסד העכבר הנמען מאת נקע בצוואר הרחם על פי טיפול בבעלי חיים ולהשתמש הנחיות.
    2. השתמש זוג מספריים חדות כדי לאסוף את האשכים. למקם את האשכים 1 מ"ל של PBS קר כקרח כדי להסיר כל זיהום בדם.
    3. לתקן האשכים ב 4% paraformaldehyde (PFA) ב 4 מעלות צלזיוס במשך 12-24 ח' להשליך את 4% PFA ושטוף הרקמה 3 x 1.5 מ של 1% PBS בטמפרטורת החדר.
    4. מייבשים את הרקמה ב 30% סוכרוז למשך הלילה. לשים בזרמה במסגרת ההטבעה ולכסות את הרקמה עם טמפרטורה אופטימלית חיתוך המורכב (אוקטובר). לאחר OCT מוקפא, למלא את המסגרת ההטבעה עם OCT כך בזרמה כל יכול להיות מכוסה OCT.
    5. חותכים חתכי רוחב 5-μm-עבה, קפוא של האשכים cryostat ב-20 ° C ולתת להם לדבוק שקופיות מיקרוסקופ.
      הערה: Refreezing רקמות מוטבע בתוך קרח יבש עשוי להגדיל את הנוקשות לחיתוך.
  4. דרישת תמונה
    1. מקם את השקופיות בקופסה humidified. חממו את השקופיות בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות.
    2. לשטוף את הסעיפים 3 x בתמיסת באגירה טריס (TBS) בטמפרטורת החדר.
    3. מילה נהדרת עבור 5 דקות בחושך. . תנגב את כל TBS שיורית בנייר ללא אבק
    4. מכסים את חתכי רוחב עם 4', 6-diamidino-2-phenylindole (דאפי). מניחים את coverslip הפוכה על שקופית מיקרוסקופ.
    5. לרכוש תמונות באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי. סכום כולל של 20 X הגדלה מספיקה בדרך כלל לזיהוי האות פלורסנט במאור פנים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

הסידור ניסיוני עבור ביצוע וזמינותו שלמות BTB מוצג באיור1. משוך, חידוד נימים microinjection עם נימי פולר, micropipette beveler, בהתאמה (איור 1A וג 1). ברים, מערכות אינסטלציה חימום וציוד microinjection מומחשים איור 1B ו- 1 D.

איור 2 מציג חלק מהשלבים מפתח עבור ההזרקה של אינולין-FITC. להשתמש במספריים לעשות חתך קטן אחרי העכבר עבר הרדמה מלאה (איור 2A ו- 2B). בזרמה העכבר הוא חשוף, הזריקו הפלורסנט באמצעות פיפטה של microinjection (איור 2C - דור 2).

איור 3 מציגה תמונות טיפוסי של מחקר כדי להעריך את תקינות BTB בהתבסס על assay ויוו . העכברים CdCl2-טיפול קבוצה הם הזריקו מנה חריפה של CdCl2 (5 מ"ג/ק"ג b.w., i.p.) למשך 3 ימים. פעפוע של אינולין-FITC מן התא הבזליים חוסמת BTB במבנה קבוצת הביקורת, בזמן הבנייה BTB פגום ומעברים אינולין (זריחה ירוק) לתוך תא הפסגה של האפיתל וכמה ב CdCl2 -טיפול קבוצה. מקטעי קו לבן מציינים את המרחק על ידי אינולין מן קרום המרתף (איור 3 א). היקף הנזק BTB נקבע לפי המרחק. עבור לומן אליפטית, הרדיוס הוא הממוצע של הקצרה ביותר ואת המרחק הארוך תא הבזליים אל מרכז צנורית. אנו משתמשים כזה יחס כמו אינדקס של היקף הנזק BTB:
Equation
כאן, Dאינולין הוא המרחק המאופיינת אינולין בתא הבזליים ו Dהרדיוס הוא הרדיוס של צנורית וכמה אותו (איור 3B). BTB שלם ב- Rictorחליל / + עכברים חוסם פעפוע של אינולין מעבר למכשול להזין תא הפסגה. לעומת זאת, עכברים Rictorcko יש BTB פרוץ המתיר אינולין דיפוזיה (איור 3C).

Figure 1
איור 1: ציוד microinjection interstitial האשכים העכבר. (A) למשוך זכוכית נימים עם פולר נימי אנכי. (B) לוח זה מראה את החימום תרמוסטטי. (ג) הטיפים הם מחודדים באמצעות את beveler micropipette. (ד) יחידת עבור microinjection כולל משאבה microinjection, מיקרוסקופ סטריאו. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2: להחליפן בתמונות של הליך האשכים microinjection interstitial ויוו ב עכבר. (א) לוח זה מציג הסרת שיער בטן ידי מכונת הגילוח. (B) לוח זה מראה את החתך דופן הבטן 0.5 ס מ כדי לחשוף את חלל הצפק. (ג) למשוך השומן רפידות לחשוף בזרמה המצורפת בבירור. (D) לוח זה מראה את המיקום של יותרת האשך, testis. (E) לוח זה מראה את המיקום של פיפטה microinjection. (F) הוספה פיפטה microinjection לתוך interstitium של בזרמה. (G) לוח זה מציג מבחן עם זריקה מוצלחת לתוך interstitium של בזרמה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3: מחקר כדי להעריך את תקינות BTB בהתבסס על ויוו פונקציונלי assay. עכברים זכרים בוגרים (n = 3 קבוצת הטיפול והן קבוצת הביקורת) שטופלו CdCl2 (5 מ"ג/ק"ג b.w., i.p.) במשך 3 ימים (קבוצת הטיפול) או שטופלו PBS במשך 3 ימים (קבוצת הביקורת). אינולין-FITC (זריחה ירוק) הינו ממוקם ליד בסיס צנורית וכמה בקבוצת הביקורת, בעוד אינולין-FITC יוזם מעבר לרוחב BTB בקבוצה CdCl2-טיפול. (א) בחלונית זו, מקטעי קו לבן מציינים מרחק אינולין-FITC פולש. פסי בקנה מידה הם 20 μm. (B) נתונים מבחני יושרה BTB מוצגים זה היסטוגרמה, שמראים את המרחק מאת אינולין (Dאינולין) לעומת רדיוס צנורית אותו (Dרדיוס). שמונים בקוריאנית נבחרו באופן אקראי. P < 0.001 (הסטודנט t-מבחן). (ג) BTB תקינות בסכנה בתוך האשכים של עכברים Rictorcko . ב- Rictorcko עכבר בקוריאנית, אינולין חודר עמוק בתוך האפיתל וכמה, להגיע צנורית לומן. פסי בקנה מידה הם 50 μm. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

יצירת זרע לוקח מקום האפיתל וכמה, הוא תהליך מאוד מסודר ודינמי נשלטת על ידי בתאי הנבט ותאים סומטיים (למשל, התאים Sertoli)13. המבנה BTB, אשר נבנה על ידי תאי סרטולי, מחלק וכמה האפיתל של הבסיס, תא של הפסגה. הפיתוח של meiotic, הפלואידי בתאי הנבט מתרחשת בתוך התא הפסגה המהווה מכשול אימונולוגי של14.

הפונקציה BTB יכול להתפשר על ידי חשיפה לרעלים או עקב פגמים בגנים המעורבים היווצרות של צמתי תא, המוביל אל פוריות הגבר על מנת לבחון BTB שלמות, של במבחנה סרטולי הקימה מערכת התרבות התאים כי הוא מסוגל להרכיב אפיתל פונקציונלי זה מקרוב מחקה BTB ויוו15. מערכת זו במבחנה מספק מודל פשוט ללמוד את המבנה והתפקוד של צמתי תא סרטולי. עם זאת, התאים Sertoli מבודד testis, בתרבית במבחנה מוגבלים ביחס בעלי חיים גיל ותא צפיפות15,16. בנוסף, הטוהר של התאים Sertoli ואת נוכחותם של ultrastructures היה שווה BTB תכונות חייב להיות פיקוח17. יותר חשוב, BTB מבנה ותקינות גם לדרוש אינטראקציות בין תאי נבט תאי סרטולי, כפי שניתן לראות ממחקרים של עכברים מוטנטים null נבט-תא-ספציפי עם BTB פגמים10,18,19. לפיכך, יצירת תרבות משותפת בתאי הנבט עם סרטולי תאים בתוך חוץ גופית עבור המטרה של recapitulating כל מכריע ויוו תפקוד BTB נותר מאתגר11,20.

פרוטוקול זה מתאר שיטה להעריך BTB שלמות ויוו באמצעות הזרקת אינולין-FITC, אשר היה שונה של הליך על-ידי חן. ואח 21. הפרוטוקול מתאר את ההרדמה של עכברים זכרים, החשיפה של חלל הצפק, את microinjection של צבע לתוך interstitium של בזרמה, לקצור את האשכים, תופסת אותם סעיפים קפוא, ורכישת תמונות. עבור השלמת מוצלח, מספר מדרגות יצויין. ראשית, חשוב להשתמש המינון המתאים של הרדמה, כי הרדמה עמוקה באופן חמור עלול לגרום למוות. בנוסף, האורך של הקצה של הזריקה נימי צריך לא להיות ארוכה מדי; אחרת, פיפטה לא יכול לחדור בזרמה.

יכול להיות מנוצל הפרוצדורה המוצגת כאן לניתוח התפקיד של וירוסים, חשיפה לרעלים כימיים או המועמד החלבונים המעורבים ויסות BTB. Assay הזה הוא רגיש, אמין, ונגישה לפקח BTB שלמות בתוך vivo.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו נתמך על ידי ה-R המפתח הלאומית & D התוכנית של סין (2016YFA0500902), את נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (31471228, 31771653), קרן המדע ג'יאנגסו עבור חוקרים צעירים מכובד (BK20150047), מדעי הטבע קרן של מחוז ג'יאנגסו (BK20140897, 14KJA180005), התוכנית יזמיים וחדשניים של מחוז ג'יאנגסו אל K.Z.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Capillary puller  SUTTER INSTRUMENT (USA) P-97
10x PBS Hyclone (USA) SH30258.01 dilution to 1× in ddH2O
4’,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) Sigma (USA) F6057
Adhesion microscope slides CITOGLAS (China) 80312-3161
Cadmium chloride Sigma (USA) 655198-5G
Confocal microscope Zeiss (Germany) LSM700
Dust-free paper Kimberly-Clark (USA) 34120
Inulin-FITC Sigma (USA) F3272
Microinjection capillaries Zhengtianyi (China) BJ-40 1.0 mm × 0.8 mm  × 100 mm
Micropipette beveler NARISHIGE (JAPAN) EG-400
OCT SAKURA (JAPAN) 4583
Paraformaldehyde Sigma (USA) P6148
Pentobarbital sodium Merck (Germany) P11011
Shaver  Yashen (China)
Stereo microscope Nikon (JAPAN) SMZ1000
Sucrose  Sangon Biotech (China) A610498
Surgical instruments Stronger (China) scissors, forceps, needle holder
Syringe KDL (China) 20163150518 0.45 mm × 0.16 mm RW LB
thermostatic heater KELL (Nanjing, China) KEL-2010
10x TBS, pH 7.6
0.2 M Tris Sangon Biotech (China) A600194
1.37 M Nacl Sangon Biotech (China) A610476

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mruk, D. D., Cheng, C. Y. Sertoli-Sertoli and Sertoli-germ cell interactions and their significance in germ cell movement in the seminiferous epithelium during spermatogenesis. Endocrine Reviews. 25 (5), 747-806 (2004).
  2. Wen, Q., et al. Transport of germ cells across the seminiferous epithelium during spermatogenesis-the involvement of both actin- and microtubule-based cytoskeletons. Tissue Barriers. 4 (4), e1265042 (2016).
  3. Wang, C. Q., Cheng, C. Y. A seamless trespass: germ cell migration across the seminiferous epithelium during spermatogenesis. Journal of Cell Biology. 178 (4), 549-556 (2007).
  4. Fijak, M., Meinhardt, A. The testis in immune privilege. Immunological Reviews. 213, 66-81 (2006).
  5. O'Bryan, M. K., Hedger, M. P. Inflammatory Networks in the Control of Spermatogenesis Chronic Inflammation in an Immunologically Privileged Tissue? Molecular Mechanisms In Spermatogenesis. 636, 92-114 (2008).
  6. Li, N., Wang, T., Han, D. Structural cellular and molecular aspects of immune privilege in the testis. Frontiers in Immunology. 3, 152 (2012).
  7. Mruk, D. D., Cheng, C. Y. The Mammalian Blood-Testis Barrier: Its Biology and Regulation. Endocrine Review. 36 (5), 564-591 (2015).
  8. Govero, J., et al. Zika virus infection damages the testes in mice. Nature. 540 (7633), 438-442 (2016).
  9. Jenabian, M. A., et al. Immune tolerance properties of the testicular tissue as a viral sanctuary site in ART-treated HIV-infected adults. AIDS. 30 (18), 2777-2786 (2016).
  10. Holembowski, L., et al. TAp73 is essential for germ cell adhesion and maturation in testis. Journal Of Cell Biology. 204 (7), 1173-1190 (2014).
  11. Legendre, A., et al. An engineered 3D blood-testis barrier model for the assessment of reproductive toxicity potential. Biomaterials. 31 (16), 4492-4505 (2010).
  12. Setchell, B. P., Waites, G. M. Changes in the permeability of the testicular capillaries and of the 'blood-testis barrier' after injection of cadmium chloride in the rat. Journal of Endocrinology. 47 (1), 81-86 (1970).
  13. Griswold, M. D. The central role of Sertoli cells in spermatogenesis. Seminars in Cell & Developmental Biology. 9 (4), 411-416 (1998).
  14. Cheng, C. Y., Mruk, D. D. The blood-testis barrier and its implications for male contraception. Pharmacological Reviews. 64 (1), 16-64 (2012).
  15. Mruk, D. D., Cheng, C. Y. An in vitro system to study Sertoli cell blood-testis barrier dynamics. Methods Molecular Biology. 763, 237-252 (2011).
  16. Orth, J. M. Proliferation of Sertoli cells in fetal and postnatal rats: a quantitative autoradiographic study. Anatomical Record. 203 (4), 485-492 (1982).
  17. Lee, N. P. Y., Mruk, D., Lee, W. M., Cheng, C. Y. Is the cadherin/catenin complex a functional unit of cell-cell actin-based adherens junctions in the rat testis? Biology of Reproduction. 68 (2), 489-508 (2003).
  18. Bai, S., et al. A Germline-Specific Role for the mTORC2 Component Rictor in Maintaining Spermatogonial Differentiation and Intercellular Adhesion in Mouse Testis. Molecular Human Reproduction. 24 (5), 244-259 (2018).
  19. Korhonen, H. M., et al. DICER Regulates the Formation and Maintenance of Cell-Cell Junctions in the Mouse Seminiferous Epithelium. Biology of Reproduction. 93 (6), 139 (2015).
  20. Loir, M. Trout Sertoli cells and germ cells in primary culture: I. Morphological and ultrastructural study. Gamete Research. 24 (2), 151-169 (1989).
  21. Chen, H., et al. Monitoring the Integrity of the Blood-Testis Barrier (BTB): An In Vivo Assay. Methods in Molecular Biology. 1748, 245-252 (2018).

Tags

ביולוגיה התפתחותית גיליון 142 Testis מחסום דם-testis תאי סרטולי אינולין-FITC העכבר וזמינותו ויוו
שיטת <em>In Vivo</em> ללמוד העכבר דם Testis מכשול שלמות
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Liu, M., Zhu, C., Bai, S., Li, X.,… More

Liu, M., Zhu, C., Bai, S., Li, X., Fu, K., Ye, L., Zheng, K. An In Vivo Method to Study Mouse Blood-Testis Barrier Integrity. J. Vis. Exp. (142), e58512, doi:10.3791/58512 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter