Avaliação rápida da toxicidade de compostos químicos usando embriões de zebrafish

Summary

Embriões de zebrafish são utilizados para avaliar a toxicidade de compostos químicos. Desenvolvem-se externamente e são sensíveis aos produtos químicos, permitindo a deteção de mudanças fenotípicas sutis. O experimento requer apenas uma pequena quantidade de composto, que é diretamente adicionado à placa contendo embriões, tornando o sistema de teste eficiente e rentável.

Abstract

O zebrafish é um organismo modelo vertebrado extensamente usado para a descoberta da doença e do phenotype-baseado da droga. O zebrafish gera muitos descendentes, tem embriões transparentes e desenvolvimento externo rápido. Os embriões de zebrafish podem, conseqüentemente, ser usados igualmente para a avaliação rápida da toxicidade das drogas que são preciosas e disponíveis em quantidades pequenas. No presente artigo, descreve-se um método para a triagem eficiente da toxicidade de compostos químicos utilizando embriões de adubação pós-fertilização de 1-5 dias. Os embriões são monitorados por estereomicroscópio para investigar os defeitos fenotípicos causados pela exposição a diferentes concentrações de compostos. Concentrações letais semimáximas (LC₅₀) dos compostos também são determinadas. O presente estudo exigiu 3-6 mg de um composto inibidor, e todo o experimento leva cerca de 8-10 h para ser completado por um indivíduo em um laboratório com instalações básicas. O protocolo atual é apropriado para testar todo o composto para identificar efeitos tóxicos ou fora-alvo intolerável do composto na fase adiantada da descoberta da droga e para detectar os efeitos tóxicos sutis que podem ser faltado na cultura de pilha ou em outros modelos animais. O método reduz os atrasos processuais e os custos do desenvolvimento de fármacos.

Introduction

O desenvolvimento de drogas é um processo caro. Antes de um único composto químico é aprovado pela Food and Drug Administration (FDA) e Agência Europeia de medicamentos (EMA) vários milhares de compostos são rastreados a um custo de mais de 1.000.000.000 dólares¹. Durante o desenvolvimento pré-clínico, a maior parte deste custo é necessária para o teste de animais². Para limitar os custos, os pesquisadores no campo do desenvolvimento de fármacos necessitam de modelos alternativos para a triagem de segurança de compostos químicos³. Portanto, na fase inicial do desenvolvimento da droga, seria muito ....

Protocol

A unidade principal da zebrafish na Universidade de Tampere tem uma autorização de estabelecimento concedida pelo Conselho Nacional de experimentação animal (ESAVI/7975/04.10.05/2016). Todos os experimentos com embriões de zebrafish foram realizados de acordo com o governo provincial da Finlândia Oriental, departamento social e de saúde do protocolo da unidade de serviço regional de Tampere # LSLH-2007-7254/YM-23.

1. criação de tanques de acasalamento zebrafish overnight

1. Coloque 2-5 zebrafish masculino adulto e 3-5 zebrafish fêmea adulta em tanques de acasalamento durante a noite. (A reprodução é induzida pela manhã por ciclo auto....

Results

A parte crítica da avaliação da toxicidade é testar diferentes concentrações de um ou vários compostos químicos em um único experimento. No início, selecione os compostos para avaliação da toxicidade, o número de concentrações a testar para cada composto e, consequentemente, faça um gráfico (Figura 3). Utilizamos uma cor única para cada composto para organizar as amostras (Figura 3). O uso do marcador e da rotulagem resistentes s.......

Discussion

O teste de toxicidade in vitro utilizando células cultivadas pode detectar a sobrevivência e os estudos morfológicos das células que fornecem informações limitadas sobre a toxicidade induzida pelo composto de teste. A vantagem da seleção da toxicidade de compostos químicos que usam embriões do zebrafish é deteção rápida de mudanças fenotípicas quimicamente induzidas em um animal inteiro durante o desenvolvimento embrionário em um organismo modelo relevante. Aproximadamente 70% dos genes humanos de codificação de.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Placas de 24 poços	Nunc	Thermo Scientific
Balance (Balança	KERN	PLJ3000-2CM
Balance (Balança	Mettler Toledo	AB104-S/PH
CaCl2	JT. Sonda	Baker RS421910024
	Thermo Scientific	17-467-604
DMSO	Sigma Aldrich, Alemanha	D4540
Falcon tubes 15 mL	Greiner bio-one	188271
Metilcelulose de alto peso molecular	Sigma Aldrich, Alemanha	M0262
Incubadora para larvas de peixe-zebra	Termaks	B8000
KCL	Merck	1.04936.0500
Methyl Blue	Sigma Aldrich, Alemanha	28983-56-4
MgSO4	Sigma Aldrich, Alemanha	M7506
Tubos de microcentrífuga	Starlab	S1615-5500
NaCl	VWR Chemicals	27810.295
Parafina Histoplast IM	Thermo Scientific	8331
Pipeta Pasteur	Sarstedt	86.1171
Placa de Petri	Thermo Scientific	101R20
Placas de Petri	Sarstedt	82.1473
Pipeta (1 mL e 200 μ L)	Thermo Scientific	4641230N, 4641210N
Placas de 24 Poços	Thermo Scientific	142485
Steriomicroscópio/Câmera	Zeiss	Stemi 2000-C/Axiocam 105 frascos de cores
(1,5 mL)	Marca Fisher 11569914
Zebrafish AB cepas	ZIRC	ZL1