Artigo de método

Modelo de Xenoenxerto heterogêneo derivado do paciente do câncer pancreático usando larvas de zebrafish como hospedeiros para avaliação comparativa de fármacos

DOI:

10.3791/59507

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30 de abril de 2019

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1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Key Laboratory of Metabolism and Molecular Medicine, Ministry of Education, School of Basic Medical Sciences, Fudan University, 2National Human Genetic Resources Sharing Service Platform (2005DKA21300), 3Fudan University Shanghai Cancer Center, 4Department of Pancreatic Surgery, Fudan University Shanghai Cancer Center, 5Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, 6Pancreatic Cancer Institute, Fudan University

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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Este protocolo descreve procedimentos da optimização em um modelo fluorescência-etiquetado duplo baseado em vírus do xenograft do tumor usando o zebrafish larval como anfitriões. Este modelo heterogêneo do xenograft imita a composição do tecido do microambiente pancreatic do cancro in vivo e sere como uma ferramenta mais precisa para avaliar respostas da droga em modelos personalizados de zPDX (xenograft paciente-derivado de zebrafish).

Resumo

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O xenograft paciente-derivado do tumor (PDX) e o xenograft pilha-derivado do tumor (CDX) são técnicas importantes para a avaliação pré-clínica, a orientação da medicamentação e as pesquisas básicas do cancro. Gerações de modelos PDX em camundongos hospedeiros tradicionais são demoradas e só trabalham para uma pequena proporção de amostras. Recentemente, zebrafish PDX (zPDX) surgiu como um sistema de acolhimento único, com as características de pequena escala e de alta eficiência. Aqui, nós descrevemos uma metodologia aperfeiçoada para gerar um modelo fluorescência-etiquetado duplo do xenograft do tumor para a avaliação comparativa da quimioterapia em modelos de zPDX. As pilhas e os fibroblasto do tumor foram enriquecidos do tecido pancreatic recentemente-colhido ou congelado do cancro em condições diferentes da cultura. Ambos os grupos celulares foram rotulados por Lentivirus expressando proteínas fluorescentes verde ou vermelha, bem como um gene BCL2L1. As células transfectadas foram pré-misturadas e coinjetadas no zebrafish larval 2 DPF que foram então criados em meio E3 modificado a 32 ° c. Os modelos do xenograft foram tratados por drogas da quimioterapia e/ou pelo inibidor de BCL2L1, e as viabilidades de pilhas e de fibroblastos do tumor foram investigadas simultaneamente. Em resumo, este protocolo permite que os investigadores gerem rapidamente uma grande quantidade de modelos de zPDX com um microambiente heterogêneo do tumor e forneça uma janela mais longa da observação e uma quantitação mais precisa em avaliar a eficiência de candidatos da droga.

Introdução

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A Oncologia de precisão tem como objetivo encontrar as estratégias terapêuticas mais benéficas para o paciente individual1. Atualmente, inúmeros modelos pré-clínicos como a cultura primária in vitro, a cultura organoide in vitro2e os xenoenxertos derivados do paciente (PDX) em camundongos antes ou depois da cultura organoide são propostos para o diagnóstico e para a tela/avaliação do potencial escolhas terapêuticas3. O modelo PDX gerado pela injeção de células cancerosas primárias humanas em camundongos imunocomprometidos é uma das ferramentas mais promissoras para a triagem personalizada de fármacos em oncologia clínica3,4. Diferentemente da linhagem celular cultivada in vitro, os modelos PDX geralmente preservam a integridade e a heterogeneidade do ambiente tumoral in vivo, imitando melhor a diversidade e as características idiossincráticas de diferentes pacientes tumorais e, portanto, podem prever a resultados médicos potenciais dos doentes4. No entanto, a geração de modelos PDX em camundongos requer amostras de pacientes de alta qualidade e meses de tempo para reunir células e modelos suficientes para experimentos em vários grupos, e as composições celulares/genéticas do Xenoenxerto podem derivar das do original biópsiado paciente. A taxa de sucesso para o estabelecimento de camundongos PDX modelo também é baixa, tornando difícil de ser amplamente implementado na prática clínica. Para os pacientes que transportam cânceres rapidamente progredidos como câncer pancreático, eles podem não ser capazes de obter informações valiosas dos experimentos PDX no tempo.

Nos últimos anos, zebrafish foi relatado para ser anfitriões potenciais para não somente CDX (pilha-derivado xenograft do tumor) modela, mas também PDX modela5,6,7,8,9, 10. como um animal modelo vertebrado, o zebrafish abriga semelhanças suficientes com mamíferos em genética e fisiologia, com duas vantagens significativas: transparência e pequeno tamanho11. O zebrafish também é altamente fecundidade, e centenas de larvas inpuras podem ser obtidas dentro de poucos dias a partir de um único par de adultos12. Vários estudos têm empregado zebrafish para gerar modelos transgênicos e xenoenxertos de doenças cancerosas13,14. Comparado aos xenoenxertos de camundongos, os xenoenxertos de zebrafish permitem o rastreamento em uma resolução de célula única. Uma certa quantidade de tecidos humanos é capaz de gerar centenas de modelos de zebrafish PDX (zpdxs), enquanto só pode ser suficiente para gerar um par de ratos PDX modelos15,16. Além disso, as larvas de zebrafish em 2-5 DPF já desenvolvem sistemas circulatórios completos e órgãos metabólicos, como fígado e rim, mas não o sistema imunológico17, enquanto o saco de gema remanescente é um meio natural 3D, ideal para triagem de drogas, drogas testes de resistência e observações de migração tumoral6,18,19,20,21.

Com uma tentativa final de usar zPDX como uma plataforma de triagem/teste para uso clínico, aqui, descrevemos uma proposta otimizada para o modelo zPDX de câncer pancreático, que permite a avaliação in vivo do candidato a drogas dentro de um curto espaço de tempo usando menos células a custos mais baixos. Comparado com as referências anteriores sobre zpdx6,9,10, introduzimos várias otimizações para tornar o sistema mais viável e confiável para o diagnóstico clínico personalizado: 1) pré-classificação de células diferentes grupos nos tecidos primários do tumor e estabilizando as células primárias por uma semana antes de novas experiências; 2) rotular as células humanas e melhorar a viabilidade celular em Xenoenxerto via modificação genética baseada em Lentivirus; 3) otimizando a condição de cultura zebrafish em ambos os suplementos de nutrição (glicose e glutamina) e temperatura; 4) quantificando as respostas medicamentosas de diferentes tipos de células de forma comparativa. Também fizemos alterações na solução de injeção adicionando vários materiais complementares. Ao todo, essas melhorias proporcionam a possibilidade de gerar rapidamente um Xenoenxerto mais paciente-like em hospedeiros zebrafish que podem ser usados como uma ferramenta confiável para avaliar a resposta dos medicamentos candidatos.

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Protocolo

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Todos os procedimentos animais foram aprovados e seguiram as diretrizes do Comitê de ética animal da Universidade de Fudan e todos os espécimes de câncer pancreático foram obtidos do centro de câncer de Xangai da Universidade de Fudan. A aprovação ética foi obtida do Comitê de ética da FUSCC, e o termo de consentimento livre e esclarecido foi obtido por cada paciente.

1. preparando o equipamento para a microinjeção

  1. Preparando a placa de injeção.
    1. Prepare uma solução de 50 mL de agarose a 1% dissolvida na solução E3 (0,6 g/L de sal de aquário em água destilada dupla + 0, 1 mg/L de azul de metileno). Ferva a solução até dissolver o agarose.
    2. Despeje 50 mL da solução de agarose em um prato de Petri de 10 cm e, em seguida, coloque o molde de fixação do embrião zebrafish na superfície. Retire o molde quando a solução de agarose torna-se solidificada.
    3. Adicione 20 mL de solução E3 à placa de injecção e mantenha-a a 4 ° c para armazenamento a longo prazo.
  2. Preparando as agulhas de injeção.
    1. Puxe um capilar de vidro de 10 cm com uma dimensão interna de 0,9 milímetros em duas agulhas em um extrator da agulha.
    2. Use fórceps para cortar a extremidade da agulha para criar uma abertura o microscópio.

2. preparação de embriões para transplante

  1. Coloque 1 a 2 pares de zebrafish adulto em um tanque de acasalamento em 7-9 pm e recolher os ovos fertilizados em cerca de 8 am da manhã seguinte.
  2. Transfira os ovos fertilizados do tanque de acoplamento para um prato de Petri contendo 40 mL de solução E3 fresca e incubar a 28,5 ° c.
  3. Após 8 h de incubação na solução de E3, adicione 0, 3% 1-phenyl-2-thiourea (PTU) na solução E3 para inibir a pigmentação. Incubar os embriões na solução E3 com 0, 3% PTU a 28,5 ° c até 48 HPF. Esta etapa pode ser omitida se usando o zebrafish in-bred do mutante de Casper.

3. isolação e cultura de pilhas humanas preliminares do espécime pancreatic cirúrgico fresco do cancro ou do tecido congelado

  1. Obter espécimes de tecido de cancro pancreático humano do tamanho em torno de 1 cm3 durante uma cirurgia abdominal, e transferir imediatamente o tecido para o meio de crescimento (DMEM com soro bovino fetal a 10% (FBS), 10 μm Y-27632, 100 μg/ml de primoicina, 10 μg/ml de putrescina dihydrochloride, nicotinamida de 10 mM e 1% de estreptomicina da penicilina).
  2. Transfira a amostra de cancro pancreático para uma placa de Petri e retire o tecido necrótico circundante, tecido adiposo e tecido conjuntivo.
  3. Enxague o tecido oncológico por 5-6 vezes com tampão fosfato (PBS) e corte o tecido em 1 mm3 peças usando bipéis.
  4. Transfira os tecidos desfiado em 5 ml de HBSS em um tubo de 50 ml e adicione o tipo IV do colagenase, o hialuronidase e o DNase mim em concentrações finais de 200 unidades/ml, de 100 mg/l e de 20 mg/l, respectivamente. Pipeta a mistura para cima e para baixo para misturar bem.
  5. Incubar a mistura a 37 ° c em uma incubadora de dióxido de carbono de 5% por 15-20 min. pipeta a mistura para cima e para baixo algumas vezes a cada 5 min.
  6. Adicionar 7 mL de DMEM ao tubo e centrifugar a 110 x g durante 5 min a 4 ° c quando a digestão estiver concluída.
  7. Decantar o sobrenadante e re-suspender a mistura tumoral em DMEM.
  8. Placa da mistura em um prato de Petri de 6 cm em 3 mL de meio de crescimento total (DMEM com 10% FBS, 20 μg/mL de insulina, 100 ng/mL bFGF, 10 ng/mL EGF, 10 μM Y-27632, 100 μg/mL primocin, 10 μg/mL de putrescina dihydrochloride, 10 mM nicotinamida , 1% de estreptomicina da penicilina). Separe as células em dois grupos.
  9. No grupo I, adicionar 100x inibidor de fibroblastos de câncer pancreático no meio após 48 h para remover os fibroblastos sobrecrescidos, deixando as células cancerosas como os principais tipos de células;. No grupo II, os fibroblastos irão superar as células cancerosas dentro de uma semana.
  10. Cultura ambos os grupos de células para 1-2 semana, dependendo das densidades de células/puridades e mudar a mídia a cada três dias. Os tipos de células esperados em ambos os grupos I & II podem ocupar mais de 98% na proporção em uma experiência bem sucedida.

4. rotulando as células com Lentivirus expressando anti-apoptose gene BCL2L1 (BCL-XL) e diferentes proteínas fluorescentes separadamente

  1. Produção de Lentivirus
    1. Placa 3 x 106 células HEK 293T com meio DMEM completo (DMEM fornecido com 10% FBS) em 10 cm pratos e cultura durante a noite a 37 ° c em uma incubadora de dióxido de carbono 5%. Substitua o meio por 6 mL de meios livres de soro antes da transfecção.
    2. Prepare A solução A: 8 μg de BCL2L1-contendo vetores lentivirais (Pcdh-EF1α-MKATE2-E2A-BCL2L1-wpre ou Pcdh-EF1α-EGFP-E2A-BCL2L1-wpre), 2,4 μg de pvsvg, 4 μg pmdl (gag/pol), 1,6 ΜG de DMEM anterior e sem soro num volume total de 500 ΜL. gentilmente Pipet a mistura várias vezes, e colocá-lo em temperatura ambiente por 5 min.
    3. Prepare a solução B: 40 μL de PEI (polyethyleneimine) em 460 μL DMEM soro-livre. Coloque-o à temperatura ambiente por 5 min.
    4. Adicione lentamente a solução B na solução A e deixe o tubo à temperatura ambiente durante 30 min.
    5. Adicione a mistura final no prato de cultura de células HEK 293T preparado na etapa 4.1.1 e incubar a 37 ° c em uma incubadora de dióxido de carbono de 5%. Após 12 h, adicione um adicional de 5 mL do meio DMEM completo. Após 48 h, colher o meio contendo o Lentivirus.
    6. Filtre o sobrenadante utilizando um filtro estéril de 0,45 μm, adicione o sobrenadante a uma coluna de concentração, centrifugador a 6.000 x g por 25-30 min a 4 ° c. As alíquotas de Lentivirus de 100 μL por tubo são feitas e armazenadas a-80 ° c.
  2. Infecção das células primárias
    1. Semente das células (grupo I & II) para ser infectado em uma placa de 12 poços com 30-40% de densidade e cultura as células durante a noite a 37 ° c em uma incubadora de dióxido de carbono 5%.
    2. Substitua o meio por 500 μL de meio livre de soro contendo 8 μg/mL de polibreno durante 4 h. Em seguida, adicione um adicional de 100 μL do lentivirus no meio (eGFP-E2A-BCL2L1 para o grupo I ou mKate2-E2A-BCL2L1 para o grupo II). Após 12 h, substitua o meio por 1 mL de meio completo.
    3. Verifique os marcadores de fluorescência após 48 h.
    4. Colher as células infectadas e misturá-los em 1:1 relação com uma concentração final de 106/ml.
    5. Centrifugue as células a 110 x g durante 5 min e Resuspenda a mistura de células em 50 μL de solução injetável (1640 média com 10% de fbs, 0, 5% de ácido hialurônico sal de sódio, 0, 5% metilcelulose).

5. injetando a suspensão da pilha misturada no zebrafish

  1. Adicionar 10x solução de tricaína em água E3 para anestesiar larvas de zebrafish e transferir as larvas (da etapa 2,3) para a placa de injeção preenchida por E3 modificada (E3 com 1 g/L de glicose e 5 mmol/L L-glutamina).
  2. Encha 25 μL de suspensão de células mistas na agulha de micro capilares e insira a agulha no manipulador de microinjecção.
  3. Ajuste a pressão e o tempo da injeção. Injete 50-80 células (~ 8 NL) no saco gema de 48 HPF zebrafish.

6. cultura do zebrafish Xenografted (modelo de zPDX)

  1. Transfira as larvas de zebrafish pós-xenografadas para 40 mL de solução de mistura (solução E3 com 1 g/L de glicose e 5 mmol/L L-glutamina) a 32 ° c.

7. administração de medicamentos sobre o zebrafish Xenografado e a avaliação de células tumorais/fibroblastos viabilidades

  1. Determinando a concentração óptima de gemcitabine/navitoclax.
    1. Coloc 10 embriões do zebrafish do tipo selvagem em 48 HPF em cada poço de uma placa de 12 poços.
    2. Adicione diferentes concentrações de gemcitabina ou navitoclax em cada poço e incubar a 32 ° c durante dois dias.
    3. Após 2 dias, calcule a dosagem de tolerância máxima (MTD) de gemcitabina e navitoclax em que as larvas de zebrafish não mostraram malformação significativa e comportamento anormal, e as concentrações de trabalho são definidas abaixo do MTD.
  2. Tratamento de modelos de zPDX com gemcitabine/navitoclax.
    1. Coloc 10 larvas xenografados em cada poço de uma placa de 12 poços.
    2. Divida as larvas em quatro grupos, trate o grupo controle na E3 contendo 0,1% DMSO, e trate os outros grupos com 5 μg/mL de gemcitabina e/ou 50 μM de navitoclax, e incubar a 32 ° c por dois dias.
  3. Avaliação das viabilidades celulares e composição celular em modelos zPDX.
    1. Anestesiar as larvas xenografadas após o tratamento e colocá-las em metilcelulose a 3%.
    2. Imagem as larvas da vista lateral usando um microscópio da fluorescência ou um microscópio confocal.
    3. Quantifique a intensidade dos sinais de fluorescência vermelho e verde usando o software ImageJ e GraphPad.

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Resultados

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Um esboço esquematizado do procedimento é representado na Figura 1. No short, as pilhas preliminares do tecido do cancro foram semeadas no meio completo após a digestão com ou sem a adição de inibidores pancreatic do fibroblasto do cancro. As células cancerosas e os fibroblastos foram enriquecidos como duas populações distintas que os fibroblastos dominaram sem inibidores, e o crescimento das células cancerosas prevaleceu após a adição de inibidores (

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Discussão

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Ambos os modelos PDX e CDX são plataformas vitais no campo da biologia tumoral22, e o passo crítico de um transplante de sucesso entre espécies é melhorar a sobrevida do Xenoenxerto.  Recentemente, alguns estudos mostraram que a expressão transitória de BCL2L1 (BCL-XL) ou BCL2 pode melhorar significativamente a viabilidade de células-tronco embrionárias humanas em hospedeiros de camundongos sem afetar as identidades celulares e destinos23 ,

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Divulgações

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Não foram divulgados potenciais conflitos de interesse.

Agradecimentos

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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de ciências naturais da China 81402582, Fundação de ciência natural de Xangai 12DZ2295100, 14YF1400600 e 18ZR1404500

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
DMEMGIBCOC11995500BT
FBSHyclonesv30087.03
Y-27632CliniscienceY0503Inibidor de Rho quinase
Primocininvivogenant-pm-1um antibiótico para culturas de células primárias
Cloridrato de putrescinaSigmaP5780
NicotinamidaSigmaN3376
Penicilina estreptomicinaGIBCO15140122.00
Tampão fosfato (PBS)GIBCOC10010500CP
HBSSGIBCO14170112.00
Colagenase tipo IVGIBCO17104019.00
HialuronidaseSigmaH3884
Dnase ISigmaD5025
InsulinaSigmaI9278
b-FGFGIBCOPHG0264
EGFGIBCOPHG0314
inibidor de fibroblastos de câncer de pâncreasCHI ScientificFibrOUT
0,45 μ m filtro estérilMilliporeSLHV033RB
Coluna de concentraçãoMilliporeMillipore UFC910008Concentre o vírus
PolybreneSigmaH9268
Ácido Hialurônico Sal de SódioSigmaH7630
L-glutaminaGIBCO21051024.00
GemcitabinaGemzan
MetilceluloseSigmaM0262
Navitoclax (ABT-263)SelleckS1001Inibidor de Bcl-xL
Equipamento
MicroinjetorNARISHIGE
EstereomicroscópioOLYMPUSMVX10
Microscópio ConfocalLEICASP80,00

Referências

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  1. Collins, D. C., Sundar, R., Lim, J. S. J., Yap, T. A. Towards Precision Medicine in the Clinic: From Biomarker Discovery to Novel Therapeutics. Trends in Pharmacological Sciences. 38 (1), 25-40 (2017).
  2. Huang, L., et al. Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell- and patient-derived tumor organoids. Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).
  3. Pauli, C., et al. Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine. Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).
  4. Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
  5. Jung, J., Seol, H. S., Chang, S. The Generation and Application of Patient-Derived Xenograft Model for Cancer Research. Cancer Research and Treatment. 50 (1), 1-10 (2018).
  6. Fior, R., et al. Single-cell functional and chemosensitive profiling of combinatorial colorectal therapy in zebrafish xenografts. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (39), E8234-E8243 (2017).
  7. Chen, L., et al. A zebrafish xenograft model for studying human cancer stem cells in distant metastasis and therapy response. Methods in Cell Biology. 138, 471-496 (2017).
  8. Gaudenzi, G., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in neuroendocrine tumors. Endocrine. 57 (2), 214-219 (2017).
  9. Lee, J. Y., Mazumder, A., Diederich, M. Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts. Journal of Visualized Experiment. (136), (2018).
  10. Zhang, M., et al. Adipocyte-Derived Lipids Mediate Melanoma Progression via FATP Proteins. Cancer Discovery. 8 (8), 1006-1025 (2018).
  11. Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
  12. Lieschke, G. J., Currie, P. D. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nature Reviews: Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).
  13. Guo, M., et al. U0126 inhibits pancreatic cancer progression via the KRAS signaling pathway in a zebrafish xenotransplantation model. Oncology Reports. 34 (2), 699-706 (2015).
  14. Yao, Y., et al. Canonical Wnt Signaling Remodels Lipid Metabolism in Zebrafish Hepatocytes following Ras Oncogenic Insult. Cancer Research. 78 (19), 5548-5560 (2018).
  15. Veinotte, C. J., Dellaire, G., Berman, J. N. Hooking the big one: the potential of zebrafish xenotransplantation to reform cancer drug screening in the genomic era. Disease Models & Mechanisms. 7 (7), 745-754 (2014).
  16. Zon, L. I., Peterson, R. The new age of chemical screening in zebrafish. Zebrafish. 7 (1), 1(2010).
  17. Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study. Developmental & Comparative Immunology. 28 (1), 9-28 (2004).
  18. Mercatali, L., et al. Development of a Patient-Derived Xenograft (PDX) of Breast Cancer Bone Metastasis in a Zebrafish Model. International Journal of Molecular Sciences. 17 (8), (2016).
  19. Wu, J. Q., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 36 (1), 160(2017).
  20. Tulotta, C., et al. Imaging Cancer Angiogenesis and Metastasis in a Zebrafish Embryo Model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 916, 239-263 (2016).
  21. Yao, Y., et al. Screening in larval zebrafish reveals tissue-specific distributions of fifteen fluorescent compounds. Disease Model& Mechanisms. , 028811(2017).
  22. Tentler, J. J., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews: Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).
  23. Charo, J., et al. Bcl-2 overexpression enhances tumor-specific T-cell survival. Cancer Research. 65 (5), 2001-2008 (2005).
  24. Wang, X., et al. Human embryonic stem cells contribute to embryonic and extraembryonic lineages in mouse embryos upon inhibition of apoptosis. Cell Research. 28 (1), 126-129 (2018).
  25. Boise, L. H., et al. bcl-x, a bcl-2-related gene that functions as a dominant regulator of apoptotic cell death. Cell. 74 (4), 597-608 (1993).
  26. Moore, J. C., et al. Single-cell imaging of normal and malignant cell engraftment into optically clear prkdc-null SCID zebrafish. Journal of Experimental Medicine. 213 (12), 2575-2589 (2016).

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