Infecção crônica por Salmonella induzida por fibrose intestinal

Resumo

Este protocolo descreve um modelo do rato da fibrose intestinal conduzida salmonela que se assemelha a características patológicas chaves de Crohn ' doença de s que inclui a inflamação e a fibrose transmural. Este método pode ser usado para avaliar os fatores hospedeiros que alteram os desfechos fibróticos usando camundongos mutantes mantidos em um fundo genético C57Bl/6.

Resumo

A fibrose tecidual caracterizada pelo acúmulo patológico de matriz extracelular, como o colágeno, é o desfecho de inflamação persistente e reparo disregulado. Na doença inflamatória intestinal (DII), a fibrose leva a formações críticas recorrentes para as quais não há nenhuma terapia eficaz além da ressecção cirúrgica. Devido ao seu início tardio, os processos que impulsionam a fibrose são menos estudados e em grande parte desconhecidos. Conseqüentemente, as complicações fibrótica representam um desafio principal no IBD. Neste protocolo, um modelo in vivo robusto de fibrose intestinal é descrito em que o pré-tratamento com estreptomicina de camundongos C57Bl/6 seguidos por gavagem oral com o mutante de Salmonella typhimurium ΔAroA de grau vacinal leva à colonização persistente do patógeno e fibrose do cálio. Metodologias para a preparação de S. O δaroa de typhimurium para a inoculação, quantificando cargas do micróbio patogénico no ceco e no spleen, e avaliando a deposição do colagénio em tecidos intestinais é explicado. Este modelo de doença experimental é útil para examinar os fatores hospedeiros que aumentam ou exacerbam a fibrose intestinal semelhante a um CD.

Introdução

A colite ulcerosa (UC) e a doença de Crohn (DC) são as duas principais formas de DII e são caracterizadas como distúrbios inflamatórios crônicos e recidivantes do trato gastrointestinal ^1,2. Estes distúrbios têm um grande impacto na qualidade de vida dos pacientes. Os sintomas de DII incluem dor abdominal, diarreia, náuseas, perda de peso, febre e fadiga³. Estudos recentes identificaram fatores genéticos e ambientais que contribuem para a patogênese da doença; Pensa-se que tais fatores de risco contribuem para a ruptura da barreira epitelial, resultando na translocação ou Superamostrage....

Protocolo

Todos os protocolos de animais foram aprovados pelo Comitê de cuidados com animais da Universidade da Colúmbia Britânica.

1. preparação de culturas de Salmonella typhimurium ΔAroA para gavagem oral de camundongos

1. De um estoque congelado de glicerol de S. Typhimurium ΔAroA, prepare uma placa de raia usando o agar LB contendo 100 μg/mL de estreptomicina com um laço de inocular estéril. Incubar durante a noite a 37 ° c. As placas de raia podem ser armazenadas até uma semana a 4 ° c.
2. Um dia antes da infecção, prepare antibiótico dissolvendo 0,5 g de estreptomicina em 2,5 mL de água. Após o filtro que esteri....

Resultados

Tratamento com estreptomicina seguido de infecção oral por S. O δaroa de typhimurium conduz à inflamação e à fibrose intestinais robustas especialmente no ceco (Figura 1). Os fardos patogénicos típicos de 10⁸ a 10⁹ UFC por 1 g de ceco e 10⁴ CFU por 1 g de baço podem ser recuperados de animais infectados (Figura 2). A avaliação da fibrose em secções cecais coradas de picrosirius indica fibrose de pico 21 dias após a infec.......

Discussão

Nossa compreensão da patogénese de IBD foi aumentada extremamente por modelos do rato da inflamação intestinal. Embora tais modelos individuais não Recapitulem todas as características da doença humana complexa e multifatorial, têm sido úteis na identificação de características-chave da progressão da doença. As estenoses fibrotic associadas com o IBD remanesce uma necessidade clínica não atendidas principal porque os tratamentos atuais são ineficazes em inverter o desenvolvimento da doença. Além disso, a fibrose intestin.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubos de trava de segurança de fundo redondo de 2 ml	Eppendorf	22363344
Contas de aço inoxidável	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Pontas de pipeta de orifício grande	Fisher	2707134
placas megablock de 2 mL	Sarstedt	82.1972.002
Agulhas de gavagem	FST	18061-22
Sulfato de estreptomicina	Sigma	S9137
Moinho misturador	Retsch	MM