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Artigo de método

Avaliando as propriedades angiogenéticas de células-tronco do câncer de ovário usando o Sistema de Cocultura Tridimensional, NICO-1

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DOI:

10.3791/61751

5 de dezembro de 2020

Neste artigo

Resumo

As células-tronco do câncer de ovário (OCSC) são responsáveis pelo início, recorrência, resistência terapêutica e metástase do câncer. Considera-se que o nicho vascular do OCSC promove a auto-renovação dos OCSCs, levando à quimiorresistência. Este protocolo fornece a base para o estabelecimento de um modelo de nicho vascular OCSC reprodutível in vitro.

Resumo

As células-tronco cancerígenas (CSCs) residem em um nicho de suporte, constituindo um microambiente composto por células estromais adjacentes, vasos e matriz extracelular. A capacidade das CSCs de participar do desenvolvimento do endotélio constitui uma característica importante que contribui diretamente para a compreensão geral dos mecanismos de tumorigênese e metástase tumoral. O objetivo deste trabalho é estabelecer uma metodologia reprodutível para investigar a capacidade de iniciação tumoral de células-tronco de câncer de ovário (OCSCs). Neste trabalho, examinamos o mecanismo de neovascularização entre células endoteliais e OCSCs, juntamente com as alterações morfológicas das células endoteliais, usando o modelo de co-cultura in vitro NICO-1. Este protocolo permite a visualização da etapa de neovascularização em torno dos OCSCs de forma temporal. A técnica pode fornecer informações sobre as propriedades angiogenéticas dos OCSCs na metástase tumoral.

Introdução

O câncer de ovário é a oitava neoplasia maligna mais comum em mulheres em todo o mundo, com aproximadamente 300.000 novos diagnósticos e uma estimativa de 180.000 mortes anuais1. No diagnóstico inicial, o câncer de ovário geralmente se apresenta com sintomas graves, com cerca de 75% das pacientes já no estágio III-IV. Assim, a taxa de sobrevida em 5 anos é de <30% e a taxa de mortalidade é a mais alta entre os cânceres ginecológicos2, com a eficiência do tratamento para o câncer de ovário sendo altamente dependente de fatores clínicos, como a realização bem-sucedida da cirurgia de debulking, resistência à quimioterapia e....

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Protocolo

Todos os procedimentos foram realizados sob o protocolo aprovado pelo Comitê de Ética para o bem-estar humano. Todos os pacientes forneceram consentimento informado por escrito para o uso em pesquisa de suas amostras, e a coleta e o uso de tecidos para este estudo foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa em Análise de Genes do Genoma Humano, da Universidade de Teikyo.

1. Isolamento e cultura de células-tronco de câncer de ovário (OCSCs) de pacientes com câncer de ovário e ascite em um gabinete de biossegurança de nível 2

  1. Isole células-tronco cancerígenas da ascite do câncer de ovário humano obtido por paracentese. Colete p....

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Resultados

Foram coletados fluidos de ascite obtidos de pacientes com câncer de ovário avançado durante cirurgia ou paracentese com o objetivo de realizar uma cultura estável a longo prazo para esferoides. Aqui, apresentamos casos de uma cultura esferoide de longo prazo de CSCs ovarianos denominadas CSC1 e CSC2. Ambas as linhagens celulares carregam o mesmo diagnóstico e perfis histológicos. Os papéis mecanicistas dos OCSCs subjacentes à interação com as células endoteliais necessárias para induzir .......

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Discussão

O protocolo apresentado descreve como imitar o microambiente tumoral de OCSCs em um ambiente in vitro. O componente primário do método constitui o modelo de cocultura altamente reprodutível obtido usando o sistema NICO-1, um sistema de co-cultura Transwell indireto. Muitos dos modelos de cocultura atualmente disponíveis examinam os efeitos do contato direto célula-célula em populações celulares cocultivadas 12,13,14,15,16,17,18........

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado por um Grant-in-Aid for Scientific Research C (grant no. 19K09834 to K.N.) do Ministério da Educação, Ciência e Cultura, Japão.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
0,025% de tripsinaThermoR001100
10 mL PipetThermo170356N
1250 µ Ponta de pipeta LQSPT112XLRS-Q
tubo de 15 mLNunc339650
200 µ L Ponta de pipetaQSPT110RS-NEW
2-MercaptoetanolThermo (Gibco)21985023
5 mL PipetThermo170366N
Tubo de 50 mLCorning430290
AccuMAXInnovative Cell TechnologiesAM105
BioCoatTM Colágeno I 60mm PratoCorning356401
CentrífugaKUBOTA2800
Costar 6 Poços Transparente Fundo Plano Ultra Baixa Fixação Placas de Vários Poços Corning3471
Meio de Crescimento de Células Endoteliais 2 PromoCellC-22011 
EtanolWAKO057-00456
FGF-BasicThermo (Gibco)PHG0021
HistodenzSIGMAD2158
HUEhT-1 cellJCRB CellBank JCRB1458
ICCP Filter 0.6 µ mLaboratório Ginrei.2525-06
Insulina,SIGMA humano (Roche)11376497001
LuminômetroPerkinElmerARVO MX-flad
Matriz MatrigelCorning356234
MicroscópioYokogawaCQ-1
NICO-1Ginrei Lab.2501-02
OptiPlate-96PerkinElmer6005290
P1000 PipetGilsonF123602
P200 PipetGilsonF123601
PBSThermo (Gibco)14190-144
StemPro hESC SFMThermo (Gibco)A1000701
Tubulação de TransferênciaFALCON357575
Y-27632WAKO253-00513

Referências

  1. Bray, F., et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA, a Cancer Journal for Clinicians. 68, 394-424 (2018).
  2. Lengyel, E.

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

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