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Artigo de método

Um modelo murino de lesão isquêmica da retina induzida pela oclusão da artéria da carótida comum bilateral transitória

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DOI:

10.3791/61865

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12 de novembro de 2020

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Aqui, descrevemos um modelo de camundongo de isquemia de retina por oclusão da artéria carótida comum bilateral transitória usando suturas simples e um grampo. Este modelo pode ser útil para entender os mecanismos patológicos da isquemia da retina causada por anormalidades cardiovasculares.

Resumo

Diversas doenças vasculares, como retinopatia diabética, oclusão de veias da retina ou artérias e síndrome isquêmica ocular podem levar à isquemia da retina. Para investigar mecanismos patológicos da isquemia da retina, são necessários desenvolver modelos experimentais relevantes. Anatomicamente, um dos principais vasos de abastecimento sanguíneo da retina é a artéria oftalmômica (OpA) e a OpA é originária da artéria carótida interna da artéria carótida comum (CCA). Assim, a interrupção da CCA poderia efetivamente causar isquemia retinista. Aqui, estabelecemos um modelo de camundongo de isquemia de retina por oclusão da artéria carótida comum transitória (tBCCAO) para amarrar a CCA direita com suturas de seda 6-0 e ocluir a CCA esquerda transitoriamente por 2 segundos através de um grampo, e mostrou que o tBCCAO poderia induzir isquemia aguda de retina levando à disfunção da retina. O método atual reduz a dependência de instrumentos cirúrgicos usando apenas agulhas cirúrgicas e um grampo, encurta o tempo de oclusão para minimizar a morte inesperada de animais, o que é frequentemente visto em modelos de camundongos de oclusão da artéria cerebral média, e mantém a reprodutibilidade de achados isquêmicos comuns da retina. O modelo pode ser utilizado para investigar a fisiopatologia de retinopatias isquêmicas em camundongos e ainda pode ser usado para triagem in vivo de medicamentos.

Introdução

A retina é um tecido neurossensorial para função visual. Uma vez que uma quantidade substancial de oxigênio é necessária para a função visual, a retina é conhecida como um dos tecidos mais exigentes de oxigênio no corpo1. A retina é suscetível a doenças vasculares, pois o oxigênio é entregue através dos vasos sanguíneos. Vários tipos de doenças vasculares, como a retinopatia diabética e a oclusão dos vasos sanguíneos da retina (veias ou artérias), podem induzir isquemia da retina. Para investigar mecanismos patológicos de isquemia da retina, são considerados necessários modelos experimentais reprodutíveis e clinicamente relevantes de isquemia d....

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Protocolo

Todos os métodos aqui descritos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Escola de Medicina da Universidade keio.

1. Preparação de instrumentos cirúrgicos e animais

  1. Autoclave instrumentos cirúrgicos e mantê-los em 70% de álcool etílico. Antes de cada novo procedimento cirúrgico, limpe os instrumentos cirúrgicos cuidadosamente utilizando 70% de álcool etílico.
  2. Prepare camundongos BALB/cAJc1 machos (6 semanas de idade, 26-28 kg) em uma sala específica-livre de patógenos (SPF) para manter condições estéreis antes, durante e depois da cirurgia.

2. Oclus....

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Resultados

Após a circulação sistêmica do FITC-dextran por 2 minutos, foram examinadas vasculaturas de retina das retinas esquerda e direita nos camundongos operados por sham e camundongos operados por tBCCAO(Figura Suplementar 1). FITC-dextran era totalmente visível nas duas retinas nos camundongos operados por farsa e na retina esquerda nos camundongos operados por tBCCAO, enquanto era parcialmente detectável na retina direita nos camundongos operados por tBCCAO.

Após tBCCAO, foi exami.......

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Discussão

No estudo, mostramos que o tBCCAO, utilizando suturas simples e um grampo, poderia induzir isquemia de retina e disfunção retinista. Além disso, demonstramos que nosso protocolo atual para o desenvolvimento de um modelo de camundongo de isquemia de retina é mais fácil e rápido em comparação com outros protocolos anteriores para o desenvolvimento de modelos de lesão isquêmica de retina2,3,7.

Anatomicam.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado por Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (18K09424 para Toshihide Kurihara e 20K18393 para Yukihiro Miwa) do Ministério da Educação, Cultura, Esportes, Ciência e Tecnologia (MEXT).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Cloridrato de atipamezolZenoaqAntisedanPara anti-anestesia
Applied Biosystems 7500 FastApplied Biosystems-ParaqPCR
Tartarato de butorfanolMeiji Seika PharmaVetorphalePara anestesia
BZ-II AnalyzerKEYENCE-Parauma fusão de imagens
BALB/cAJc1CLEA-Mouse Cepa
β-Actina (8H10D10) Mouse mAbCST3700Para Western blot
Braçadeira FórcepsWorld Precision InstrumentsWPI 500451Para cirurgia
Pinça Dumont #Fine Science Tools11251-10Para
cirurgia Solução DAPIDojindo340-07971Para
IHC Envisu SD-OCT sistemaLeicaR4310Para os PTU
FITC-dextranMerkFD2000Spara perfusão sanguínea retiniana
microscópio de fluorescênciaKEYENCEBZ-9000Para detecção de fluorescência
Hidrato de gatifloxacinaSenju PharmaceuticalGachifuroPara infecção antibacteriana
GFAP Anticorpo monoclonal (2.2B10)Thermo13-0300Para
IHC Almofada de aquecimentoMarukanRH-200Para cirurgia
HIF-1α (D1S7W) XP Rabbit mAbCST36169Para western blot
ImageQuant LAS 4000 miniGEHealthcare-Paraquimioluminescência
MidazolamSandoz K.KSANDOZPara anestesia
Micrótomo Tissue-Tek TEC 6Sakura-Paraseccionamento
MedetomidinaOrion CorporationDomitorPara anestesia
Agulha suporteHandayaHS-2307Para cirurgia
PuRECMAYOCorporation-ParaERG
ScissorFine Science Tools91460-11Para cirurgia
Hialuronato de sódioSanten PharmaceuticalHyaleinPara lubrificação ocular
Cloridrato de tropicamida / penilefrinaSanten PharmaceuticalMydrin-PPara midríase
6-0 sutura de sedaNatsumeE12-60N2Para cirurgia
5

Referências

  1. Anderson, B. Ocular effects of changes in oxygen and carbon dioxide tension. Transactions of the American Ophthalmological Society. 66, 423-474 (1968).
  2. Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O.

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Modelo de Isquemia RetinianaOclusão Bilateral da ACCOclusão Transitória da ACCIsquemia Retiniana em CamundongosEstabilização do HIF-1 AlfaGliose Reativa RetinianaAnálise de EletrorretinografiaTomografia de Coerência Óptica