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Behavior

चूहों में ऑब्जेक्ट लोकेशन टास्क का उपयोग करके एक भीतर-विषय प्रायोगिक डिजाइन

Published: May 6, 2021 doi: 10.3791/62458
Automatic Translation
*1,2, *1,3, 1,4, 1,5
1Danish Research Institute of Translational Neuroscience (DANDRITE), Department of Biomedicine, Aarhus University, 2Universitätsklinikum Würzburg, Institut für Klinische Neurobiologie, 3Translational Neuropsychiatry Unit, Department of Clinical Medicine, Aarhus University, 4Faculty of Science, Radboud University, 5Center for Proteins in Memory - PROMEMO, Danish National Research Foundation, Department of Biomedicine, Aarhus University
* These authors contributed equally

Summary

यह प्रोटोकॉल चूहों की एक ही पलटन का उपयोग करके चार पुनरावृत्ति के साथ एक ऑब्जेक्ट स्थान कार्य के लिए विस्तृत कदम प्रदान करता है। कमजोर और मजबूत एन्कोडिंग लघु और दीर्घकालिक यादों का उत्पादन कर सकते हैं । पुनरावृत्ति के साथ प्रोटोकॉल का लचीलापन समय और श्रम की बचत करके सर्जिकल संचालन से जुड़े अध्ययनों के लिए फायदेमंद हो सकता है।

Abstract

ऑब्जेक्ट प्लेस रिकग्निशन कृंतक में स्थानिक स्मृति की जांच करने के लिए उपयोग की जाने वाली एक प्रमुख विधि है। यह ऑब्जेक्ट प्लेस रिकग्निशन मेमोरी ऑब्जेक्ट लोकेशन टास्क का आधार बनाती है। यह पेपर चूहों की एक ही पलटन का उपयोग करके चार पुनरावृत्ति के विकल्प के साथ ऑब्जेक्ट स्थान कार्य की स्थापना का मार्गदर्शन करने के लिए एक व्यापक प्रोटोकॉल प्रदान करता है। कमजोर और मजबूत एन्कोडिंग प्रोटोकॉल दोनों का उपयोग अलग-अलग ताकत की लघु और दीर्घकालिक स्थानिक यादों का अध्ययन करने और प्रासंगिक स्मृति-बाधा या जोड़तोड़ को बढ़ाने के कार्यान्वयन को सक्षम करने के लिए किया जा सकता है। इसके अलावा, यहां प्रस्तुत प्रतिसंतुलन के साथ परीक्षण की पुनरावृत्ति चूहों के बीच परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए भीतर-विषय तुलना के लिए दो या अधिक परीक्षणों से परिणामों के संयोजन की अनुमति देती है। यह विधि सांख्यिकीय शक्ति को बढ़ाने में मदद करती है और दृढ़ता से अनुशंसित है, खासकर जब प्रयोग चल रहे हैं जो व्यक्तिगत व्यवहार में उच्च भिन्नता पैदा करते हैं। यह सीधे प्रत्येक जानवर से प्राप्त डेटा में वृद्धि और आवश्यक जानवरों की कुल संख्या को कम करने के द्वारा अध्ययन को परिष्कृत करता है । अंत में, दोहराया वस्तु स्थान कार्य के कार्यान्वयन से अध्ययन की दक्षता बढ़ जाती है जिसमें समय और श्रम की बचत करके शल्य चिकित्सा प्रक्रियाएं शामिल होती हैं।

Introduction

कृंतक में स्मृति की जांच में सहज मान्यता कार्य(जैसे, ऑब्जेक्ट रिकग्निशन, ऑब्जेक्ट प्लेस रिकग्निशन) का काफी हद तक उपयोग किया गया है। ये परीक्षण स्मृति का आकलन करने के लिए उपयोग किए जाने वाले परीक्षणों की विविधता के विपरीत हैं जो या तो डर कंडीशनिंग या इनाम प्रेरणा पर आधारित हैं, उस सहज मान्यता कार्यों में पूरी तरह से नई उत्तेजनाओं के प्रति सहज अन्वेषणात्मक व्यवहार पर आधारित हैं। यह व्यवहार, जिसे 'नियोटिक वरीयता' 1 के रूप में जानाजाताहै, कृंतक के साथ-साथ अन्य स्तनधारी प्रजातियों और पक्षियों और मछली2जैसे कुछ गैर-स्तनधारियों में निहित है। ऑब्जेक्ट प्लेस रिकग्निशन, जो स्थानिक मेमोरी पर निर्भर करता है, ऑब्जेक्ट लोकेशन टास्क (जिसे स्थानिक ऑब्जेक्ट रिकग्निशन टास्क भी कहा जाता है) का उपयोग करके देखा जा सकता है3। घाव के अध्ययनों से पता चला है कि ऑब्जेक्ट प्लेस मान्यता के लिए एक अक्षुण्ण हिप्पोकैम्पस4,5 कीआवश्यकता होती है । अपेक्षाकृत सरल प्रशिक्षण प्रोटोकॉल और किसी भी सुदृढीकरण की अनुपस्थिति के कारण, यह कार्य कई अध्ययनों में बेहतर है। सकारात्मक और नकारात्मक सुदृढीकरण दोनों की अनुपस्थिति अतिरिक्त मापदंडों और मस्तिष्क क्षेत्रों को कम करती है जो व्यवहार को ड्राइव कर सकती हैं। इसलिए, यहां व्यवहार तटस्थ है और जिज्ञासा और स्थानिक स्मृति पर आधारित है, जो तंत्र की जांच की अनुमति देता है जो स्थानिक स्मृति के एन्कोडिंग, समेकन और पुनर्प्राप्ति में शामिल हैं।

ऑब्जेक्ट स्थान कार्य के लिए प्रोटोकॉल में आम तौर पर निवास सत्र होते हैं जिसके बाद एन्कोडिंग और परीक्षण परीक्षणों का एक सत्र होता है, जो देरी अवधि से अलग होता है, जो कई मिनट से घंटों तक भिन्न होता है। यह दृढ़ता से सिफारिश की जाती है कि चूहों को जानवरों के तनाव के स्तर को कम करने के लिए पहले से संभाला जाता है, और इसलिए, व्यवहार जो मान्यता स्मृति को प्रभावित कर सकता है, जैसे कि नवीनता के प्रति घृणा। इसी तरह, एक अच्छी तरह से डिजाइन किए गए आदत प्रोटोकॉल तनाव को रोकने में एक आवश्यक भूमिका निभाता है जो कार्य के दौरान चूहे के प्राकृतिक व्यवहार में बाधा डाल सकता है। हालांकि, हैंडलिंग और आदत की सीमा काफी हद तक प्रयोगशालाओं और प्रयोगकर्ताओं के बीच भिन्न होती है, जो कम पुनर्प्रावर्तन6,7,8में योगदान दे सकती है। एन्कोडिंग परीक्षण में, चूहे को दो नामित कोनों में स्थित दो समान वस्तुओं के साथ एक क्षेत्र का पता लगाने का समय दिया जाता है। परीक्षण परीक्षण में, जो एक अवधि से देरी हो रही है, चूहे को वस्तुओं की एक ही जोड़ी के साथ अखाड़ा तलाशने के लिए समय दिया जाता है, लेकिन इस बार उनमें से एक को एक उपन्यास स्थान पर ले जाया गया है। चूहों द्वारा प्रदर्शित सहज वरीयता और इसके परिणामस्वरूप उपन्यास स्थान पर वस्तु की खोज में बिताए गए समय में वृद्धि स्थानिक मान्यता और वस्तु स्थानों की स्मृति का संकेत है3। एन्कोडिंग परीक्षण (पुनरावृत्ति की अवधि और संख्या) का संशोधन स्मृति की ताकत को प्रभावित करता है।

अध्ययन के उद्देश्य के आधार पर, एन्कोडिंग और परीक्षण परीक्षणों के बीच देरी की लंबाई को मॉडल प्रोटीन-संश्लेषण-स्वतंत्र अल्पकालिक स्मृति या प्रोटीन-संश्लेषण-निर्भर दीर्घकालिक स्मृति में संशोधित किया जा सकता है। इसलिए, ऑब्जेक्ट स्थान कार्य का उपयोग आवश्यकतानुसार प्रोटोकॉल को अनुकूल बनाकर विभिन्न प्रकार के अध्ययनों के लिए किया जा सकता है। इसके अलावा, इन परीक्षणों के बीच औषधीय और ऑप्टोजेनेटिक हस्तक्षेप जैसे प्रायोगिक जोड़तोड़ का कार्यान्वयन भी संभव है, जैसा कि वीवो इमेजिंग में है। 9,10 कई अध्ययन हैं जो एक ही चूहे पलटन के भीतर ऑब्जेक्ट स्थान कार्य के पुनरावृत्ति को दोहराते हैं। यह पारंपरिक उपयोग के विपरीत है जिसमें एक जानवर का एक सत्र होता है जिसमें कोई पुनरावृत्ति नहीं होती है। हालांकि, इन प्रतिमानों की प्रभावशीलता की पूरी तरह से जांच नहीं की गई है और न ही इनका वर्णन करने वाले कोई विधि पत्र हैं । हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए, यह एक प्रोटोकॉल का पहला सूचित विवरण है जो एक ही चूहे पलटन का उपयोग करके चार पुनरावृत्तियों के साथ विस्तार से एक ऑब्जेक्ट स्थान कार्य का वर्णन करता है, जो व्यवस्थित रूप से प्रत्येक पुनरावृत्ति से परिणामों की तुलना करता है। परीक्षणों के बीच कम परिवर्तनशीलता के साथ भीतर-विषय तुलना की अनुमति देने के लिए प्रयोगात्मक स्थितियों को संतुलित करने के लिए पुनरावृत्ति का उपयोग किया जा सकता है। कार्य की विश्वसनीय पुनरावृत्ति डेटा को पूल करने की अनुमति देती है, जिसका अर्थ है कि अपेक्षाकृत कम संख्या में चूहों का उपयोग करके पर्याप्त रूप से बड़ी मात्रा में डेटा उत्पन्न किया जा सकता है। अंत में, एक ही चूहे का उपयोग कर पुनरावृत्ति आवश्यक चूहों की संख्या को कम करके सर्जिकल संचालन और प्रत्यारोपण से जुड़े प्रयोगों में फायदेमंद हो सकती है, नतीजतन, समय और श्रम लागत बचाता है।

यह अध्ययन एक व्यापक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है जिसमें यह ब्यौरा दिया जाता है कि 1-एच और 24-h देरी के साथ परीक्षण परीक्षणों के बाद मजबूत और कमजोर एन्कोडिंग परीक्षणों का उपयोग करके वयस्क चूहों में ऑब्जेक्ट स्थान कार्य कैसे किया जाए। मजबूत एन्कोडिंग प्रोटोकॉल सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण मान्यता स्मृति पैदा करता है जब 1-एच और 24-एच देरी के साथ परीक्षण किया जाता है और इस प्रकार इन यादों को बाधित करने के लिए जोड़तोड़ के कार्यान्वयन पर अल्पकालिक और दीर्घकालिक यादों दोनों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है11। इसके विपरीत, कमजोर एन्कोडिंग प्रोटोकॉल केवल 1-एच देरी के साथ परीक्षण किए जाने पर महत्वपूर्ण अल्पकालिक स्मृति पैदा करता है। 11,12स्मृति की अवधारण बढ़ाने के लिएजोड़तोड़ का अध्ययन करने के लिए दीर्घकालिक स्मृति के अभाव का उपयोग किया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल में विस्तृत हैंडलिंग और आदत सत्र भी शामिल हैं, जिसका उद्देश्य ऑब्जेक्ट स्थान कार्य की पुनर्प्रावर्तन को बढ़ाना है। यह पेपर कमजोर एन्कोडिंग प्रोटोकॉल का उपयोग करके चूहों की एक ही पलटन के साथ चार अलग-अलग संदर्भों में कार्य की पुनरावृत्ति को भी दर्शाता है, जिसकी पुष्टि हर बार प्रतिकृति और लगातार परिणाम देने के लिए की जाती है।

Protocol

यहां वर्णित सभी तरीकों डेनिश राष्ट्रीय अधिकारियों द्वारा अनुमोदित किया गया है (लाइसेंस संख्या: 2018-15-0201-01405) डेनिश और यूरोपीय संघ के पशु कल्याण कानूनों के अनुसार ।

1. प्रायोगिक सेटअप और अलग संदर्भों की तैयारी

  1. संदर्भ के साथ ऑब्जेक्ट स्थान क्षेत्र
    नोट: नीचे सेटअप एक संलग्न साउंडप्रूफ बॉक्स(चित्रा 1B)में छत के किनारों और बॉक्स की छत के केंद्र में स्थित कैमरे के साथ स्थित प्रकाश स्रोत के साथ प्रदर्शित किया जाता है। अखाड़ा, दीवारों के साथ 60 सेमी x 60 सेमी है जो 100-सेमी ऊंचा(चित्रा 1B)है, बॉक्स के अंदर रखा गया है और आसपास के कमरे से पूरी तरह से अलग है। सभी स्थानिक संकेत अखाड़े के अंदर हैं । यह अलग संदर्भों को बनाने की प्रक्रिया को सरल बनाता है। दीवारों के चारों ओर एक समान पर्दे के साथ एक सामान्य खुले मैदान के मैदान को संलग्न करके आसपास के कमरे से अलगाव का एक समान स्तर प्राप्त किया जा सकता है।
    1. न्यूनतम 60-सेमी चौड़ाई और न्यूनतम 50-सेमी ऊंचाई के साथ अपारदर्शी, गैर-असुरक्षित कठोर प्लास्टिक से बना एक वर्ग क्षेत्र प्राप्त करें। स्वचालित सॉफ्टवेयर (यदि लागू हो) द्वारा चूहे आंदोलनों की सफल रिकॉर्डिंग के लिए चूहे के रंग के विपरीत फर्श के लिए एक रंग चुनें। अखाड़ा या तो एक बॉक्स(चित्रा 1B)के अंदर या एक मंच है कि एक पर्दे से घिरा हुआ है पर रखें ।
    2. एक संदर्भ बनाने के लिए, सम्मिलित दीवारों की एक दूसरी परत प्राप्त करें(उदाहरण के लिए, क्षेत्र के रूप में एक ही सामग्री से बनी दीवार, या प्लास्टिक वॉलपेपर जिसे आसानी से साफ किया जा सकता है) विभिन्न रंगों और/या पैटर्न(जैसे, काले, सफेद, धारियों या डॉट्स) में । अखाड़े में दीवारों की दूसरी परत डालें ताकि वे एक-दूसरे से अलग हों।
    3. 10 सेमी x 10 सेमी x 5 सेमी और 20 सेमी x 15 सेमी x 15 सेमी (चौड़ाई एक्स लंबाई x ऊंचाई) के बीच भिन्न आयामों के साथ त्रि-आयामी (3 डी) स्थानिक संकेत (1-2 प्रति संदर्भ) प्राप्त करें और इसमें (i) अलग ज्यामितीय आकार और (ii) रंग हैं जो दीवार के रंग के विपरीत हैं। उन्हें दीवारों पर पर्याप्त ऊंचा लटकाएं ताकि चूहे इन संकेतों तक न पहुंच सकें।
    4. विभिन्न प्रकार की वस्तुओं (संदर्भ संख्या के रूप में कई) प्राप्त करें जो गैर-असुरक्षित, गैर-चबाने योग्य और साफ करने में आसान हैं। प्रत्येक नई वस्तु के लिए अलग ज्यामितीय आकार और बनावट का लक्ष्य रखें। उन वस्तुओं को चुनें जो चौड़ाई और ऊंचाई में 5 से 15 सेमी के बीच हैं (किसी भी उच्च वस्तुओं से बचें)। चार अलग-अलग वस्तुओं (शंकु, फुटबॉल, आयताकार चश्मे और त्रिकोणीय चश्मे) के उदाहरणों के लिए चित्रा 1D देखें।
      नोट: प्रत्येक वस्तु चूहों के समान रुचि होनी चाहिए, ताकि सभी वस्तुओं के लिए कुल अन्वेषण समय तुलनीय हो।
    5. अखाड़े के फर्श पर वस्तुओं को संलग्न करने के लिए सबसे अच्छा समाधान खोजें(उदाहरण के लिए, चिपचिपा मैट, डबल-तरफा टेप का उपयोग करके, वस्तु के नीचे धातु की प्लेट संलग्न करना और क्षेत्र के नीचे एक बांधना चुंबक आदि)।
    6. एक और संदर्भ बनाते समय, दीवारों को फिर से बनाएं कि वे पिछले संदर्भ (एस) से दीवारों के रंग और पैटर्न के वितरण के विपरीत हों। नए 3D स्थानिक संकेतों का उपयोग करें जो पिछले सभी संकेतों से अलग हैं, और विपरीत हैं। चार अलग-अलग संदर्भों के उदाहरणों के लिए चित्रा 1C देखें।
    7. एक प्रकाश स्रोत प्राप्त करें जो क्षेत्र के भीतर एक विसरित और समान रोशनी सुनिश्चित करेगा और इसमें एक मंद विकल्प है। प्रत्येक संदर्भ बनाने के बाद क्षेत्र के कोनों पर लगभग 100-120 लक्स के लिए प्रकाश तीव्रता समायोजित करें। एक कैमरा प्राप्त करें और इसे बॉक्स की छत के केंद्र में रखें।
      नोट: यदि स्वचालित स्कोरिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग नहीं किया जा रहा है तो प्रकाश तीव्रता को निचले स्तर पर समायोजित किया जा सकता है।
  2. ऑब्जेक्ट बकेट
    1. एक बाल्टी (व्यास में >50 सेमी) प्राप्त करें। प्रयोगात्मक क्षेत्र के लिए किसी भी समानता से बचने के लिए एक वर्ग आकार का चयन न करें। इसे बिस्तर सामग्री से भरें।
    2. विभिन्न आकारों और आकारों की 5-10 वस्तुओं को प्राप्त करें (प्रयोग में उपयोग की जाने वाली वस्तुओं से अलग) और बेतरतीब ढंग से उन सभी को बाल्टी में रखें(चित्रा 1A)।

Figure 1
चित्र 1:प्रयोगात्मक सेटअप, चार अलग संदर्भों और वस्तुओं सहित । (क)ऑब्जेक्ट आदत के लिए ऑब्जेक्ट बकेट। (ख)प्रयोग तंत्र (बाएं), वस्तु स्थान क्षेत्र, कैमरा, और प्रकाश स्रोत संलग्न । संदर्भ सेटअप (मध्य) और संदर्भ सेटअप (दाएं) के साथ अखाड़ा से पहले प्रयोगात्मक बॉक्स और अखाड़ा। (ग)अलग दीवार के रंग और पैटर्न के साथ चार संदर्भ (1-4), साथ ही त्रि-आयामी स्थानिक संकेत । (घ)चार वस्तुएं जिनका उपयोग संदर्भों में क्रमशः 1-4 किया जाता है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

  1. कैमरा और ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर (वैकल्पिक)
    1. सॉफ्टवेयर है कि दूर से कैमरा रिकॉर्डर को नियंत्रित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और है कि चूहे की नाक को ट्रैक कर सकते हैं प्राप्त करें । प्रत्येक प्रयोग से पहले प्रत्येक विशिष्ट संदर्भ और चूहे तनाव के लिए सॉफ्टवेयर समायोजन करें।
  2. ऑब्जेक्ट स्थानों और प्रायोगिक समूहों का प्रतिसंतुलन
    1. एन्कोडिंग और परीक्षण परीक्षणों के लिए ऑब्जेक्ट स्थानों के संभावित संयोजन तैयार करें, और इन्हें काउंटर के रूप में नाम दें। संयोजन ऐसे बनाएं कि वे ऑब्जेक्ट स्थानों के रूप में सभी कोनों को कवर करते हैं, और विकर्ण कोनों के निकट से ऑब्जेक्ट मूवमेंट और इसके विपरीत (चित्रा 2A)।
    2. विशिष्ट प्रयोग के लिए एक कार्यक्रम तैयार करें, प्रत्येक चूहे का मिलान एक काउंटर के साथ एक प्रयोगात्मक समूह में किया जाए। यदि पर्याप्त चूहे हैं, तो एक समूह के भीतर दो युग्मितकाउंटरों (चित्रा 2 ए)की प्रत्येक जोड़ी का उपयोग करें। एक ही एन्कोडिंग/टेस्ट सत्र(चित्रा 2B)में दोनों प्रायोगिक समूहों के लिए काउंटरों के एक ही सेट का उपयोग करें । निम्नलिखित सत्रों(यानी, प्रत्येक नए संदर्भ) के लिए काउंटरों को पुनः असाइन करें।
      नोट: एन्कोडिंग/टेस्ट सत्रों के दौरान एक मिश्रित क्रम में चूहों को चलाएं(उदाहरण के लिए,एक के बाद एक पिंजरे में सभी चूहों को न चलाएं; इसके बजाय, एक से अधिक चूहे के पिंजरे के भीतर एक शांत वातावरण सुनिश्चित करने के लिए पिंजरों को घुमाएं)।
    3. प्रयोगात्मक समूहों(जैसे, 1-एच मेमोरी बनाम 24-एच मेमोरी समूह) को प्रतिसंतुलित करने के लिए दो या अधिक संदर्भों का उपयोग करते समय, प्रत्येक समूह को चूहों को आवंटित करें, और निम्नलिखित संदर्भों(चित्रा 2B)में समूहों को बदलें।

Figure 2
चित्र 2-प्रतिनिधि काउंटरसंतुलन विधियों। (ए)एन्कोडिंग और परीक्षण परीक्षणों में क्षेत्र में वस्तुओं के संभावित झुकाव को काउंटर के रूप में नामित किया गया है। ऑब्जेक्ट 1 हमेशा चलती वस्तु होती है। हर दो काउंटर ों को इस तरह से प्रतिसंतुलित किया जाता है कि चलती वस्तु का स्थान बदल जाता है। प्रत्येक कोने पर दो बार कब्जा कर लिया जाता है, और ऑब्जेक्ट 1 को विकर्ण से आसन्न और इसके विपरीत समान संख्या में बार-बार स्थानांतरित कर दिया जाता है। (ख)दो प्रतिसंतुलित सत्रों(जैसे, संदर्भ1 और 2) के लिए एन्कोडिंग/टेस्ट शेड्यूल का उदाहरण । चूहों को संदर्भ 1 (सत्र एक्स, बाएं) में प्रायोगिक स्थितियों को सौंपा जाता है। काउंटर जोड़े का एक सेट(यानी, 1-2, 3-4, 5-6, और 7-8) का चयन किया जाता है और प्रत्येक चूहे को एक प्रयोगात्मक समूह में सौंपा जाता है। काउंटरों का एक ही सेट दोनों प्रयोगात्मक समूहों में चूहों को सौंपा गया है । संदर्भ 2 (सत्र X +1; दाएं) में निम्नलिखित सत्र में, प्रयोगात्मक समूहों में चूहों को प्रतिसंतुलन के लिए बदल दिया जाता है, और काउंटर जोड़े का एक नया सेट सौंपा जाता है। एन्कोडिंग और परीक्षण परीक्षणों की शुरुआत में समय नोट किया जाना चाहिए। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

नोट: इस प्रोटोकॉल में सभी हैंडलिंग, आदत, और एन्कोडिंग/परीक्षण सत्रों को 12-h प्रकाश/अंधेरे चक्र के प्रकाश चरण के दौरान अनुकूलित किया गया था, और इसलिए, यह सिफारिश की जाती है कि प्रकाश चरण के दौरान प्रयोग किए जाएं ।

2. हैंडलिंग और आदत

  1. चूहों को या तो प्रात: प्रात: से संभालना शुरू करें (यदि चूहों को घर की सुविधा में पैदा किया जाता है) या प्रयोगों की शुरुआत से 2-3 सप्ताह पहले (इस मामले में कि चूहों को बाहरी सुविधा से आदेश दिया जाता है, उन्हें आगमन के बाद एक सप्ताह के लिए स्वीकार करने की अनुमति देने के बाद)।
  2. सप्ताह में 2 या 3 दिनों के लिए 4 चूहों के प्रत्येक पिंजरे पर कम से कम 10-15 मिनट खर्च करें जब तक कि चूहों को प्रयोगकर्ता द्वारा छुआ और उठाया जा रहा है। पिंजरे में चूहों की संख्या के आधार पर प्रति पिंजरे आवंटित समय को समायोजित करें।
    नोट: यह महत्वपूर्ण है कि चूहों के साथ काम करने की उम्मीद करने वाले सभी प्रयोगकर्ता हैंडलिंग के दौरान मौजूद हैं।
  3. ऐसे मामलों में जहां हैंडलिंग प्रात: शुरू होती है, इस स्तर तक पहुंचने के बाद हैंडलिंग को न्यूनतम (वैकल्पिक) तक कम कर दें। यदि प्रयोगों से 2-3 सप्ताह पहले शुरुआत करते हैं, तो आदत सत्रों की शुरुआत तक हैंडलिंग जारी रखें।
  4. चूहों को परिवहन के साथ-साथ प्रयोगात्मक कमरे में रहने के लिए प्रयोग कक्ष में अपने पिंजरों में लाएं। चूहों को शांत और आदत में बदलने के लिए समय देने के लिए चूहों को कम से कम 30 मिनट तक बैठने की अनुमति दें। इस समय के बाद, चूहों/पिंजरों को आवास कक्ष में वापस करें।
    नोट: चरण 2.4 को हैंडलिंग के साथ जोड़ा जा सकता है और आवश्यकतानुसार कई बार दोहराया जा सकता है। यदि प्रोटोकॉल में कोई और जोड़तोड़ शामिल है(उदाहरण के लिए, इंजेक्शन आदि की प्रक्रिया के लिए हैंडलिंग)।
  5. वस्तुओं के साथ बातचीत करने और नए वातावरण के अनुभव से उपजी सामान्य तनाव के स्तर को कम करने के लिए चूहों को आदत बनाने के लिए ऑब्जेक्ट आदत करें।
    1. सत्र 1 के लिए, प्रयोग कक्ष में सभी घर पिंजरों को लाएं, और चूहों को कमरे में आदत डालें और कम से कम 30 मिनट के लिए व्यवस्थित करें। एक ही पिंजरे से चूहों (2-4 चूहों) को बाल्टी में 20 मिनट के लिए एक साथ रखें। चूहों के प्रत्येक समूह के बीच किसी भी मल पदार्थ को हटाकर बाल्टी को साफ करें। सभी पिंजरों के लिए प्रक्रिया दोहराएं। सभी चूहों को उनके घर के पिंजरों में डाल कर आवास कक्ष में वापस लौटें।
    2. सत्र 2 के लिए, एक अलग दिन पर प्रयोग कक्ष में सभी पिंजरों लाने के लिए और कम से 30 मिनट के लिए छोड़ दें । प्रत्येक चूहे को 10 मिनट के लिए बाल्टी में व्यक्तिगत रूप से रखें। चूहे को घर के पिंजरे में वापस रखें और प्रत्येक चूहे के बाद बाल्टी को साफ करें। आवास कक्ष में सभी पिंजरों को वापस करें।
    3. सत्र 3 के लिए, एक अलग दिन पर 2.5.2 दोहराएं।
  6. यदि प्रायोगिक उपकरण एक संलग्न बॉक्स(चित्रा 1B)है, तो चूहों को नए प्रयोगात्मक तंत्र में आदत बनाने के लिए खाली बॉक्स आदत करने का विकल्प चुनें। सत्र 4 में, प्रयोग कक्ष में सभी पिंजरों को लाएं और कम से कम 30 मिनट के लिए छोड़ दें। एक ही पिंजरे से चूहों को एक साथ रखें (2-4 चूहों) खाली क्षेत्र में कोई संदर्भ या स्थानिक संकेतों के साथ(चित्रा 1B,मध्य) 20 मिनट के लिए । सभी चूहों को घर के पिंजरे में वापस रखें, और चूहों के प्रत्येक समूह के बाद 70% इथेनॉल के साथ क्षेत्र को मिटा दें।
    नोट: चरण 2.5 और 2.6 एक ही सप्ताह में किया जाना चाहिए, संदर्भ आदत सप्ताह से पहले (चरण 2.7; चित्रा 3देखें)। इन चरणों के दौरान कुछ दिनों के लिए एक ब्रेक स्वीकार्य है। हालांकि, चरण 2.7 शुरू करने के बाद, प्रत्येक चरण को परीक्षण परीक्षण (चरण 2.9) के अंत तक निर्दिष्ट दिनों पर किया जाना चाहिए।
  7. सामान्य तनाव के स्तर को कम करने और पर्यावरण के स्थानिक सीखने का समर्थन करने के लिए संदर्भ और 3 डी संकेतों के लिए चूहों को आदत बनाने के लिए संदर्भ आदत करें।
    1. धारा 1.1 में वर्णित पहला संदर्भ बनाने के लिए खाली क्षेत्र को संशोधित करें, लेकिन वस्तुओं को अखाड़े में न डालें। रिकॉर्डिंग उपकरण तैयार करें।
    2. सत्र 1 के लिए, प्रयोग कक्ष में सभी पिंजरों को लाएं और कम से कम 30 मिनट के लिए छोड़ दें। यदि यह मैन्युअल रूप से कर रहा है तो रिकॉर्डर शुरू करें। पहले चूहे को अखाड़े के केंद्र में रखें, और चूहे को 10 मिनट के लिए क्षेत्र का पता लगाने की अनुमति दें। फिर, रिकॉर्डर (यदि मैनुअल) बंद करें, और चूहे को घर के पिंजरे में वापस रखें। प्रत्येक चूहे के बाद 70% इथेनॉल के साथ अखाड़े को अच्छी तरह से मिटा दें, और समाप्त होने पर सभी पिंजरों को आवास कक्ष में वापस करें।
    3. सत्र 2 और 3 के लिए, लगातार दो दिनों में प्रत्येक चूहे के लिए चरण 2.7.2 दोहराएं ताकि कुल में प्रति चूहा संदर्भ निवास के 3 सत्र हों।
      नोट: उस क्रम को फेरबदल करने पर विचार करें जिसमें चूहे अखाड़े में जाते हैं, खासकर जब एक बड़े समूह से निपटते हैं। यह दिन के एक ही समय में विशिष्ट चूहों को बार-बार चलाने से बचता है।

Figure 3
चित्र 3:हैंडलिंग, आदत औरऑब्जेक्ट स्थान कार्य प्रोटोकॉल सहित व्यवहार प्रयोग का डिजाइन। चूहों को आदत सप्ताह से पहले कुछ हफ्तों से नियमित रूप से संभाला जाना चाहिए। 0 सप्ताह में, ऑब्जेक्ट और प्रायोगिक बॉक्स आदतों के बीच में कम से कम 24-h अंतराल के साथ 4 सत्रों में किया जाता है। 1 सप्ताह में, संदर्भ आदत के बीच में 24-एच अंतराल के साथ लगातार 3 सत्रों में किया जाता है, इसके बाद एन्कोडिंग और परीक्षण परीक्षण होते हैं। निम्नलिखित सत्र के साथ आगे बढ़ने से पहले न्यूनतम 48 घंटे और 1 सप्ताह के अंतराल तक होना चाहिए(उदाहरण के लिए, सप्ताह 2 या 3 में अगले संदर्भ में आदत शुरू करें)। संक्षिप्त नाम: हब., आदत। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

  1. एन्कोडिंग ट्रायल (सत्र 4)
    नोट: औषधीय जोड़तोड़ के मामले में, एक एजेंट को प्रशासित करने के लिए एक उचित समय या तो पहले या तुरंत एन्कोडिंग परीक्षण (ओं) और/या औषधीय एजेंट की प्रकृति के आधार पर परीक्षण परीक्षण से पहले हो सकता है ।
    1. प्रयोग कक्ष में सभी पिंजरों को लाएं और कम से कम 30 मिनट के लिए छोड़ दें। पहले से तैयार अनुसूची(चित्रा 2B)का उपयोग करके, निर्धारित स्थानों में वस्तुओं की पहली समान जोड़ी (2 कोनों पर और प्रत्येक संबंधित दीवार से >10 सेमी की दूरी पर) रखें; एक एल के आकार का कार्डबोर्ड का उपयोग चिपचिपा मैट या डबल-तरफा टेप का उपयोग करके हर बार एक ही दूरी बनाए रखने के लिए किया जा सकता है।
    2. रिकॉर्डर शुरू (यदि मैनुअल)। एक दीवार या एक कोने है कि किसी भी वस्तु (प्रत्येक वस्तु के लिए समान दूरी) द्वारा कब्जा नहीं है का सामना करना पड़ क्षेत्र में पहला चूहा रखें।
      नोट: कमजोर या मजबूत एन्कोडिंग के लिए नीचे दिए गए चरणों का पालन करें।
    3. कमजोर एन्कोडिंग (1 परीक्षण) के लिए,चूहे को 20 मिनट के लिए क्षेत्र और वस्तुओं का पता लगाने की अनुमति दें। फिर, रिकॉर्डर (यदि मैनुअल) बंद करें, और चूहे को घर के पिंजरे में वापस रखें। वस्तुओं को हटा दें, और 70% इथेनॉल के साथ दोनों वस्तुओं और क्षेत्र को अच्छी तरह से मिटा दें।
    4. सभी चूहों के लिए चरण 2.8.3 दोहराएं ताकि प्रत्येक चूहे को 20 मिनट का 1 एन्कोडिंग परीक्षण प्राप्त हो।
    5. मजबूत एन्कोडिंग (3 परीक्षणों) के लिए,चूहे को 5 मिनट के लिए क्षेत्र और वस्तुओं का पता लगाने की अनुमति दें। फिर, रिकॉर्डर (यदि मैनुअल) बंद करें, और चूहे को घर के पिंजरे में वापस रखें। वस्तुओं को न हटाएं। 70% इथेनॉल के साथ अखाड़ा और वस्तुओं को मिटा दें।
    6. एक ही चूहे के साथ दो बार चरण 2.8.5 दोहराएं ताकि कुल 3 परीक्षण हों। समय आने पर चूहे को घर के पिंजरे में वापस रखें। पूरी तरह से सफाई के लिए वस्तुओं को हटा दें, और 70% इथेनॉल के साथ वस्तुओं और क्षेत्र को मिटा दें।
      नोट: चूहे के लिए अंतर-परीक्षण अंतराल लगभग 1-2 मिनट होना चाहिए।
    7. प्रत्येक चूहे के लिए 2.8.5-2.8.6 कदम दोहराएं।
    8. यदि देरी का समय 24 घंटे से कम है, तो परीक्षण परीक्षण तक पिंजरों को प्रयोग कक्ष में रखें। यदि नहीं, तो पूरा होने पर सभी पिंजरों को आवास कक्ष में वापस कर दें।
  2. टेस्ट ट्रायल (सत्र 4)
    नोट: विलंब अवधि को एन्कोडिंग परीक्षण की शुरुआत से गिना जाना चाहिए।
    1. 24-एच देरी (या किसी भी देरी के मामले में जिसके लिए परीक्षण परीक्षण को अगले दिन करने की आवश्यकता होती है), सभी पिंजरों को प्रयोग कक्ष में लाएं, पहले परीक्षण से पहले पर्याप्त समय छोड़ दें ताकि चूहों को कम से कम 30 मिनट के लिए छोड़ा जा सके। शेड्यूल के अनुसार, वस्तुओं को निर्धारित स्थानों (एक नए स्थान पर वस्तुओं में से एक) में रखें।
    2. जब समय हो, रिकॉर्डर (यदि मैनुअल) शुरू करें। एक दीवार या एक कोने है कि किसी भी वस्तु (प्रत्येक वस्तु के लिए समान दूरी) द्वारा कब्जा नहीं है का सामना करना पड़ क्षेत्र में पहला चूहा रखें।
    3. चूहे को 5 मिनट के लिए अखाड़ा और वस्तुओं का पता लगाने की अनुमति दें। फिर, रिकॉर्डर (यदि मैनुअल) बंद करें। चूहे को घर के पिंजरे में वापस रखें। वस्तुओं को हटा दें, और 70% इथेनॉल के साथ दोनों वस्तुओं और क्षेत्र को अच्छी तरह से मिटा दें।
    4. प्रत्येक चूहे के लिए चरण 2.9.2-2.9.3 दोहराएं। सभी पिंजरों को वापस आवास कक्ष में लौटाएं।
      नोट: प्रत्येक निम्नलिखित एन्कोडिंग/टेस्ट सत्र में, कम से कम 48 घंटे और 1 सप्ताह तक के अंतराल के बाद चरण 2.7 (संदर्भ निवास) से आदत प्रोटोकॉल शुरू करें।

3. डेटा विश्लेषण

  1. प्रत्येक चूहे के लिए, इस उद्देश्य के लिए डिज़ाइन किए गए सॉफ्टवेयर का उपयोग करके या मैनुअल सेटअप का उपयोग करके एन्कोडिंग और परीक्षण परीक्षण दोनों में प्रत्येक वस्तु के लिए अन्वेषण समय स्कोर करें। पूरी अवधि के लिए एन्कोडिंग परीक्षण स्कोर करें। सर्वश्रेष्ठ भेदभाव प्रदर्शन3के लिए 2 मिनट के लिए स्कोर परीक्षण परीक्षण । यदि स्वचालित ऑनलाइन सॉफ्टवेयर स्कोरिंग का उपयोग कर रहे हैं, तो सॉफ्टवेयर से स्कोरिंग डेटा का निर्यात करें।
  2. अन्वेषण समय की गणना करें जब चूहा वस्तु के संपर्क में हो, वस्तु को सूंघना या 2 सेमी से कम दूरी पर वस्तु का सामना करना। चढ़ाई और अन्वेषण के रूप में वस्तु पर बैठे जब तक चूहे का ध्यान वस्तु के अलावा कहीं और प्रतीत होता है शामिल करें(उदाहरण के लिए, वस्तु से दूर देख) ।
  3. प्रत्येक चूहे के लिए दोनों वस्तुओं के लिए कुल अन्वेषण समय की गणना करें। इस परीक्षण से परीक्षण परीक्षण (2 मिनट स्कोरिंग के लिए) में 10 एस से कम की कुल अन्वेषण समय वाले किसी भी चूहे को छोड़कर विचार करें, क्योंकि यह अविश्वसनीय अन्वेषण को प्रतिबिंबित कर सकता है।
  4. प्रत्येक वस्तु (समीकरण 1) या प्रत्येक चूहे (समीकरण 2) के लिए भेदभाव सूचकांक (DI) के लिए अन्वेषण के प्रतिशत की गणना करें, और समूहों के लिए मतलब मूल्यों की गणना करें।
    Equation 1 (1)
    Equation 2
    नोट: यदि% अन्वेषण 50% है या डीआई 0 है, तो इसका मतलब है कि प्रदर्शन मौका स्तर पर है, और चूहे को या तो ऑब्जेक्ट के लिए कोई वरीयता नहीं है। एन्कोडिंग परीक्षणों के दौरान औसत प्रतिशत अन्वेषण और डीआई क्रमशः ~ 50% या 0 होना चाहिए। एन्कोडिंग परीक्षण में या तो वस्तु के लिए [मतलब ± (2 × एसडी)] से अधिक वरीयता दिखाने वाले किसी भी चूहे को संबंधित परीक्षण के विश्लेषण से बाहर रखा जाना चाहिए। यह स्थिर वस्तु स्थान की स्मृति के रूप में परीक्षण परीक्षण में वरीयता की विश्वसनीय व्याख्या के लिए अनुमति देता है। इस मूल्य की गणना व्यक्तिगत परीक्षण के लिए या कई परीक्षणों से संयुक्त एन्कोडिंग डेटा के लिए की जा सकती है।
  5. प्रयोगात्मक सेटअप को सबसे अच्छी तरह से फिटिंग विधि द्वारा डेटा का विश्लेषण करें। मौका स्तर से ऊपर एक महत्वपूर्ण वरीयता का पता लगाने के लिए एक नमूना टी-परीक्षणका उपयोग करें।
  6. काउंटरसंतुलन के साथ एक से अधिक संदर्भों का उपयोग करते समय, संदर्भों में एक ही प्रयोगात्मक स्थिति के परिणामों को जोड़ते हैं।
    नोट: इसके परिणामस्वरूप उन समूहों में परिणाम होगा जिनमें एक ही चूहे शामिल हैं, जो दो समूहों के लिए एक युग्मित टी-परीक्षणका उपयोग करके भीतर-विषय तुलना को सक्षम करते हैं और दो से अधिक समूहों के लिए विचरण (ANOVA) के दोहराया उपायों के विश्लेषण का उपयोग करते हैं।

Representative Results

यहां दिखाया गया है दोनों मजबूत और कमजोर एन्कोडिंग प्रोटोकॉल दोनों पुरुष टायरोसिन हाइड्रोक्सिलेज (वें)-क्रे ट्रांसजेनिक चूहों13 के साथ लंबे समय से इवांस तनाव बैकक्रॉस लिस्टर Hooded तनाव और जंगली प्रकार लिस्टर Hooded चूहों के लिए चार बार वर्णित प्रोटोकॉल के लिए प्रतिनिधि परिणाम हैं । वें-क्रे ट्रांसजेनिक चूहों का उपयोग किया गया था क्योंकि इस चूहे की रेखा का उपयोग भविष्य के अध्ययनों में किया जाएगा जिसमें ऑप्टोजेनेटिक्स शामिल हैं। प्रत्येक प्रोटोकॉल का उपयोग करके, स्मृति का परीक्षण 1 और 24 घंटे की देरी के साथ किया गया था। 1 एच पर परीक्षण अल्पकालिक स्मृति का प्रदर्शन करते हैं, जबकि 24-एच परीक्षण दीर्घकालिक स्मृति का प्रदर्शन करते हैं। एन्कोडिंग वरीयता के लिए अपवर्जन मूल्य की गणना प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में की गई थी, जिसमें पांच परीक्षणों (मजबूत और कमजोर एन्कोडिंग प्रोटोकॉल) से संयुक्त डेटा का उपयोग करके [50.8% ± (2×10.8%)]] के रूप में किया गया था। चूहों कि ऊपर और इन मूल्यों के नीचे एक एन्कोडिंग वरीयता थी संबंधित परीक्षणों के विश्लेषण से बाहर रखा गया ।

मजबूत एन्कोडिंग प्रयोगों के लिए, 16 चूहों का उपयोग किया गया था, और कमजोर एन्कोडिंग प्रयोगों के लिए, 19 चूहों का उपयोग किया गया था। मजबूत एन्कोडिंग परीक्षणों के दौरान (3 × 5 मिनट एन्कोडिंग; चित्रा 4A),या तो वस्तु के लिए कोई महत्वपूर्ण वरीयता थी (५२.० ± १.९%, एन = 16, टी15 = १.१, पी = ०.२९; एक नमूना टी-टेस्टबनाम मौका स्तर) । इस मजबूत एन्कोडिंग प्रोटोकॉल ने उपन्यास स्थान पर वस्तु के लिए वरीयता दी, जैसा कि मतलब प्रतिशत अन्वेषण के संदर्भ में दिखाया गया है, जो 1-एच और 24-एच देरी (1-एच मेमोरी, 77.9 ± 2.4%, एन = 8, टी7 = 11.8, पी < 0.001; 24-h मेमोरी, 24-h मेमोरी, दोनों के साथ परीक्षणों में मौका स्तर (50%) से काफी अधिक था। 65.2 ± 5.3%, एन = 8, टी7 = 2.8, पी = 0.025; एक नमूना टी-परीक्षणबनाम मौका स्तर) । 1-एच और 24-एच मेमोरी (पी = ०.०५६; अपॉयर्ड वेल्च के टी-टेस्ट) के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था ।

कमजोर एन्कोडिंग परीक्षणों के दौरान (20 मिनट एन्कोडिंग; परिणाम चार संदर्भों से जमा किए गए; चित्रा 4B),या तो वस्तु के लिए कोई महत्वपूर्ण वरीयता नहीं थी (५१.१ ± १.०%, एन = ६६, टी६५ = १.२, पी = ०.२४; एक नमूना टी-टेस्टबनाम मौका स्तर) । इस कमजोर एन्कोडिंग प्रोटोकॉल ने 1-एच देरी के साथ परीक्षणों में मौका स्तर की तुलना में उपन्यास स्थान पर वस्तु के लिए वरीयता में उल्लेखनीय वृद्धि का उत्पादन किया, लेकिन 24-एच देरी नहीं (सभी चार संदर्भों से संयुक्त डेटा; 1-एच मेमोरी, 66.7 ± 2.0%, एन = 32, टी31 = 8.2, पी < 0.001; 24-एच मेमोरी, 49.6 ± 2.6%, एन = 34, टी33 = 0.16, पी = 0.87; एक नमूना टी-परीक्षणबनाम मौका स्तर) । वहां 1-एच और 24-एच देरी (1-एच स्मृति: एन = ३२, 24-एच स्मृति: एन = ३४, टी६१.५ = ५.२, पी < ०.००१; unpaired है वेल्च टी परीक्षण) के साथ परीक्षणोंमें प्रदर्शन के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर था ।

समूह स्तर पर स्मृति 24-एच देरी परीक्षण में नहीं देखा गया था के रूप में मौका स्तर के प्रदर्शन द्वारा अनुक्रमित है, लेकिन व्यक्तिगत विविधताओं को दिखाया । कमजोर से नो-मेमोरी स्थितियों(जैसे,24-एच परीक्षण) के लिए यह उच्च भिन्नता आमतौर पर वस्तुओं की अधिक यादृच्छिक खोज के कारण देखी गई थी। इसलिए, चूहों के प्रदर्शन की व्यक्तिगत रूप से व्याख्या नहीं करना महत्वपूर्ण है। इसके बजाय, व्यक्तिगत डेटा अंक के वितरण परीक्षण के विश्वसनीय परिणाम के रूप में समूह औसत के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है । एन्कोडिंग जितना मजबूत होता है, चूहों का व्यवहार उतना ही अधिक समान हो जाता है, और सांख्यिकीय महत्व तक पहुंचने के लिए आवश्यक चूहों की संख्या कम होती है, जैसा कि मजबूत एन्कोडिंग प्रोटोकॉल के लिए चित्रा 4A में देखा जा सकता है। इसके विपरीत, कमजोर स्थितियों(चित्रा 4B)के लिए विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए बड़े समूहों की आवश्यकता होती है।

Figure 4
चित्रा 4:मजबूत और कमजोर एन्कोडिंग के बाद मेमोरी प्रदर्शन। (ए)मजबूत एन्कोडिंग ट्रायल (3 × 5 मिनट एन्कोडिंग) इसके बाद या तो 1-एच या 24-एच टेस्ट ट्रायल । एन्कोडिंग परीक्षणों (एन = 16) के दौरान या तो ऑब्जेक्ट के लिए कोई महत्वपूर्ण वरीयता नहीं थी। मजबूत एन्कोडिंग ने प्रत्येक समूह में 1-एच और 24-एच दोनों देरी के साथ परीक्षणों में उपन्यास स्थान पर वस्तु के लिए काफी वृद्धि की वरीयता का उत्पादन किया (1-एच और 24-एच मेमोरी: एन = 8 प्रत्येक समूह में)। समूहों में कोई खास अंतर नहीं था। (ख)कमजोर एन्कोडिंग ट्रायल (20 मिनट एन्कोडिंग) इसके बाद या तो 1-एच या 24-एच टेस्ट ट्रायल होते हैं । एन्कोडिंग परीक्षणों (एन = 66) के दौरान समूह के रूप में किसी भी वस्तु के लिए कोई महत्वपूर्ण वरीयता नहीं थी। कमजोर एन्कोडिंग ने 1-एच के साथ परीक्षण में उपन्यास स्थान पर वस्तु के लिए काफी वृद्धि की वरीयता का उत्पादन किया, लेकिन 24-एच देरी नहीं, मौका स्तर (1-एच मेमोरी: एन = 32; 24-एच मेमोरी: एन = 34) की तुलना में। 1-एच और 24-एच देरी के साथ परीक्षणों में प्रदर्शन के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर था । परिणाम चार संदर्भों से एकत्र किए गए । अलग-अलग डेटा अंक डॉट्स के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं। सभी बार उपन्यास स्थान पर वस्तु की खोज का प्रतिशत दिखाते हैं जैसा कि एसईएम ± मतलब है। * पी < 0.05, ***p < 0.001; एक नमूना टीपरीक्षण बनाम मौका स्तर (५०%, धराशायी लाइन) । ###पी < ०.००१; एनएस, महत्वपूर्ण नहीं; अकीदतित वेल्च का टी-टेस्ट। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

इस स्थापित प्रोटोकॉल का एक महत्वपूर्ण लाभ यह है कि चूहों की एक ही पलटन के साथ चार अलग-अलग संदर्भों(चित्रा 1C)का उपयोग करके इसे चार बार किया जा सकता है। चित्रा 5 में दिखाए गए परिणाम दो प्रयोगात्मक समूहों (1-एच और 24-एच मेमोरी समूहों) के साथ प्रतिसंतुलन का उपयोग करने का एक संभावित तरीका प्रदर्शित करते हैं। दो समूहों को दो संदर्भों (संदर्भों 1 और 2) पर प्रतिसंतुलित किया गया था, और इसे दो अतिरिक्त संदर्भों (संदर्भों 3 और 4) में दोहराया गया था; चित्रा 5A)। चार संदर्भों से परिणाम चित्रा 5B,डीमें व्यक्तिगत रूप से प्रस्तुत कर रहे हैं, जहां प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह के लिए स्मृति प्रत्येक संदर्भ में मौका स्तर को वरीयता की तुलना करके मूल्यांकन किया गया था (1-एच स्मृति: संदर्भ 1, ६९.९ ± ३.६%, एन = 9, टी8 = ५.५, पी < ०.००१; संदर्भ 2, 65.6 ± 3.9%, एन = 9, टी8 = 4.0, पी = 0.004; संदर्भ 3, 65.2 ± 3.8%, एन = 7, टी6 = 4.0, पी = 0.007; संदर्भ 4, 65.3 ± 5.6%, एन = 7, टी6 = 2.7, पी = 0.035; 24-एच स्मृति: संदर्भ 1, 45.1 ± 6.4%, एन = 9, टी8 = 0.77, पी = 0.46; संदर्भ 2, 49.1 ± 4.9%, एन = 9, टी8 = 0.18, पी = 0.86; संदर्भ 3, 57.2 ± 4.1%, एन = 8, टी7 = 1.7, पी = 0.12; संदर्भ 4, 47.6 ± 4.7%, एन = 8, टी7 = 0.52, पी = 0.62; एक नमूना टी-परीक्षणबनाम मौका स्तर) ।

संदर्भों में 1, 2, और 4, समूहों की विषय तुलना के बीच महत्वपूर्ण अंतर का पता चला 1-एच और 24-एच स्मृति (1-एच स्मृति बनाम 24-एच स्मृति: संदर्भ 1, टी12.7 = 3.4, पी = 0.005; संदर्भ 2, टी15.2 = 2.6, पी = 0.019; संदर्भ 3, टी13.0 = 1.4, पी = 0.17; संदर्भ 4, टी12.2 = 2.4, पी = 0.032; अकीदतित वेल्च का टी-टेस्ट) । बेहतर प्रतिनिधित्व और डेटा की भीतर-विषय तुलना के लिए, दो प्रतिसंतुलित संदर्भों के परिणामों को संयुक्त किया गया(चित्रा 5C,ई)। संयुक्त प्रयोगात्मक समूहों को व्यक्तिगत रूप से फिर से मौका स्तर की तुलना में किया गया (संदर्भ 1 और 2 संयुक्त: 1-एच स्मृति, 67.8 ± 2.6%, एन = 18, टी17 = 6.7, पी < 0.001; 24-एच मेमोरी, 47.1 ± 3.9%, एन = 18, टी17 = 0.74, पी = 0.47; संदर्भ 3 और 4 संयुक्त: 1-एच स्मृति, 65.3 ± 3.3%, एन = 14, टी13 = 4.7, पी < 0.001; 24-एच स्मृति, 52.4 ± 3.2%, एन = 16, टी15 = 0.73, पी = 0.48; एक नमूना टी-परीक्षणबनाम मौका स्तर) । इसके बाद प्रायोगिक समूहों की तुलना एक दूसरे से की गई।

दोनों संदर्भ जोड़े में, समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर थे जैसा कि भीतर-विषय तुलना (1-एच मेमोरी बनाम 24-एच मेमोरी: संदर्भ 1 और 2 संयुक्त, टी16 = 3.5, पी = 0.003; संदर्भ 3 और 4 संयुक्त, टी13 = 2.4, पी = 0.032; जोड़ा टी-टेस्ट)। दो प्रतिसंतुलित सत्रों (डेटा नहीं दिखाए गए) के लिए संदर्भों 1 और 4 का उपयोग करके कमजोर एन्कोडिंग प्रोटोकॉल में जंगली-प्रकार के लिस्टर हुड चूहों के साथ तुलनात्मक परिणाम प्राप्त किए गए थे। परिणामों की पुनर्स्थिरता और विश्वसनीयता को प्रत्येक डेटा सेट की तुलना करके एक-तरफा ANOVA का उपयोग करके मान्य किया गया था। चार संदर्भों (1-एच स्मृति: एफ3,28 = 0.31, पी = 0.81; 24-h स्मृति: एफ3,30 = 0.99, पी = 0.41) के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया था। इसलिए, ऑब्जेक्ट स्थान परीक्षण को पुनरावृत्ति के न्यूनतम प्रभाव के साथ मज़बूती से दोहराया जा सकता है, यह देखते हुए कि इस प्रोटोकॉल में निर्देशों का पालन किया जाता है।

Figure 5
चित्र 5:दो सत्रों में दो प्रयोगात्मक समूहों के साथ कमजोर एन्कोडिंग प्रोटोकॉल के परिणामों को प्रस्तुत करने और विश्लेषण करने के विभिन्न तरीके । (क)दो सत्रों (संदर्भ 1 और 2) पर दो प्रयोगात्मक समूहों (1-एच और 24-एच स्मृति समूहों) के साथ प्रतिसंतुलन के लिए प्रायोगिक डिजाइन । काउंटरसंतुलनिंग को दो अतिरिक्त सत्रों (संदर्भों 3 और 4) में दोहराया गया था। (बी और डी) प्रत्येक संदर्भ और प्रयोगात्मक समूहों से परिणाम व्यक्तिगत रूप से मौका स्तर और एक दूसरे की तुलना में थे । सभी चार संदर्भों में, 1-एच देरी के साथ परीक्षणों में उपन्यास स्थान पर वस्तु के लिए वरीयता में मौका स्तर की तुलना में काफी वृद्धि हुई [संदर्भ 1 और 2: एन = 9 प्रति समूह(बी); संदर्भ 3 और 4: एन = 7 प्रति समूह(डी)]। 24-एच देरी परीक्षणों में, उपन्यास स्थान पर ऑब्जेक्ट के लिए वरीयता मौका से अलग नहीं थी (संदर्भ 1 और 2: एन = 9 प्रति समूह; संदर्भ 3 और 4: एन = 8 प्रति समूह)। संदर्भ 1, 2 और 4 में प्रयोगात्मक समूहों की वरीयताओं के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर था, लेकिन संदर्भ 3 नहीं, जैसा कि बीच-विषय तुलना से पता चला है। * पी < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001; एक नमूना टीपरीक्षण बनाम मौका स्तर (५०%, धराशायी लाइन) । #पी < 0.05; ##पी < ०.०१; एनएस, महत्वपूर्ण नहीं; अकीदतित वेल्च का टी-टेस्ट। (सी और ई) परिणाम दो प्रतिसंतुलित संदर्भों से प्रयोगात्मक समूहों के संयोजन के बाद प्रस्तुत कर रहे हैं [संदर्भ 1 और 2 संयुक्त, एन = 17 प्रति समूह(C); संदर्भ 3 और 4 संयुक्त, एन = 14 प्रति समूह(ई)]। उपन्यास स्थान पर वस्तु के लिए वरीयता काफी एक 1-एच के साथ परीक्षणों में मौका स्तर की तुलना में वृद्धि हुई थी, लेकिन नहीं 24-एच देरी, दोनों संदर्भ जोड़े में । प्रयोगात्मक समूहों की भीतरी विषय तुलना दोनों संदर्भ जोड़े में 1-एच और 24-एच देरी के साथ परीक्षणों में उपन्यास स्थान पर वस्तु के लिए वरीयताओं के बीच महत्वपूर्ण अंतर से पता चला । पी < 0.001; एक नमूना टीपरीक्षण बनाम मौका स्तर (५०%, धराशायी लाइन) । #p < 0.05, ##p < 0.01; जोड़ा टी-टेस्ट। अलग-अलग डेटा अंक डॉट्स के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं। सभी बार उपन्यास स्थान पर वस्तु की खोज का प्रतिशत दिखाते हैं जैसा कि मतलब ± SEM। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Discussion

ऑब्जेक्ट स्थान कार्य का उपयोग विभिन्न प्रकार के अध्ययनों में किया जा सकता है ताकि स्थानिक स्मृति की जांच की जा सके जैसा कि पहले वर्णित है। सेटअप का लचीलापन विभिन्न शक्तियों की अल्पकालिक और दीर्घकालिक स्मृति के मॉडलिंग को सक्षम बनाता है, और इसे कम लागत पर आसानी से लागू किया जा सकता है। हालांकि, चूंकि प्रोटोकॉल में कई पैरामीटर हैं जो परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं, और इन मापदंडों 6 में विभिन्न अध्ययनों में थोड़ा भिन्नता है, किसी को पहली बार कार्य को सफलतापूर्वक लागू करने में कठिनाइयों कासामनाकरना पड़ सकता है। उपरोक्त प्रोटोकॉल का उद्देश्य पाठकों को इस प्रक्रिया के माध्यम से सुचारू रूप से मार्गदर्शन करना है। इसके अलावा महत्वपूर्ण कदम है कि उच्च replicability के साथ कार्य के सफल कार्यान्वयन में महत्वपूर्ण हो सकता है नीचे चर्चा की जाएगी ।

यद्यपि एन्कोडिंग/परीक्षण सत्र अक्सर ऑब्जेक्ट स्थान प्रयोगों को चलाते समय ध्यान केंद्रित करता है, हैंडलिंग और आदत प्रोटोकॉल का इस प्रकार के व्यवहार परीक्षणों के परिणाम पर गहरा प्रभाव पड़ता है जहां परिणाम अविचलित प्राकृतिक चूहा व्यवहार14,15पर निर्भर करता है। जैसे, एन्कोडिंग/परीक्षण सत्र से पहले के चरणों को सावधानी के साथ डिजाइन किया जाना चाहिए, क्योंकि वे चूहे के व्यवहार और स्मृति को प्रभावित कर सकते हैं और नतीजतन, अंतिम परिणामों को प्रभावित करते हैं । हैंडलिंग और आदत का एक अच्छा स्तर जैसे चूहे प्रयोगकर्ता से परिचित हो जाते हैं और यह कार्य तनाव कारकों के प्रभाव को कम करेगा, जबकि प्राकृतिक व्यवहार8को प्रदर्शित करने की संभावना बढ़ जाती है । जैसा कि प्रोटोकॉल में उल्लेख किया गया है, यदि घर की सुविधा में चूहे के तनाव को बनाए रखा जाता है तो पिल्ले के प्रात:यना के रूप में हैंडलिंग शुरू हो सकती है। पिछले अनुभव (डेटा नहीं दिखाया गया) और कई पिछले अध्ययनों से16,17के आधार पर, इस शुरुआती हैंडलिंग के परिणामस्वरूप कम चिंता और पालन करने वाले महीनों में बढ़ी हुई जिज्ञासा है।

चूंकि ऑब्जेक्ट स्थान कार्य पूरी तरह से चूहों के आंतरिक अन्वेषणात्मक अभियान पर निर्भर करता है, इसलिए अपेक्षित व्यवहार को आसानी से बाधित किया जा सकता है यदि चूहे नवीनता का पता लगाने या अनिच्छुक होने के लिए उत्सुक नहीं हैं, जिसे 'नियोफोबिक व्यवहार'1के रूप में संदर्भित किया जाता है। इस प्रकार, अध्ययन की विशिष्ट आवश्यकताओं के अनुसार पूरी तरह से हैंडलिंग और आदत प्रोटोकॉल को शामिल करने की अत्यधिक सिफारिश की जाती है। इस प्रोटोकॉल का उपयोग न्यूनतम आवश्यकता गाइड के रूप में किया जा सकता है, और आगे के कदम लागू किए जा सकते हैं(उदाहरण के लिए,यदि अध्ययन बाद के चरण में इंजेक्शन शामिल करना है, इंजेक्शन प्रक्रियाओं और विशिष्ट होल्डिंग स्थिति के लिए आदत की आवश्यकता है)। तनाव और प्रयोगात्मक चूहों की उम्र दो अन्य प्रभावशाली कारक हैं और उप-प्रभावशाली परिणामों से बचने के लिए एक प्रयोग की योजना बनाने से पहले विचार किया जाना चाहिए। विभिन्न चूहे के उपभेदों में विभिन्न व्यवहार और बेसलाइन चिंता का स्तर18,19,20 हो सकता है और इसलिए, उपयोग किए गए तनाव के आधार पर प्रोटोकॉल में विशिष्ट समायोजन की आवश्यकता हो सकती है।

इस प्रोटोकॉल के लिए लंबे समय से इवांस तनाव लिस्टर Hooded तनाव और जंगली प्रकार लिस्टर Hooded चूहों को चार बार बैकक्रॉस के साथ वें-क्रे ट्रांसजेनिक चूहों के साथ अच्छी तरह से काम करने की पुष्टि की है । व्यवहार प्रयोगों में चूहों के लिए एक तार्किक रूप से आदर्श प्रारंभिक आयु लगभग 12 सप्ताह20है, लेकिन अंतर-तनाव परिवर्तनशीलता और कार्य की विशिष्ट आवश्यकताओं का हिसाब होना चाहिए। यह भी विकासशील चूहों का उपयोग करने के लिए संभव हो सकता है अगर यह अध्ययन के लिए ब्याज की है, हालांकि प्रोटोकॉल के लिए समायोजन की आवश्यकता हो सकती है और यहां कवर नहीं कर रहे हैं । हालांकि, यह विचार करना महत्वपूर्ण है कि क्या किसी दिए गए युग में चूहे ने इस कार्य को सफलतापूर्वक करने के लिए आवश्यक संज्ञानात्मक कार्यों को विकसित किया है। इसकी जांच कर रहे एक अध्ययनमें बताया गया है कि केवल किशोर चूहों को प्रसवोत्तर दिन 38 में और पहले नहीं, उपन्यास स्थानक स्थान पर वस्तु के लिए वरीयता में परिलक्षित होने वाली एलोसेंट्रिक स्थानिक स्मृति दिखाई गई, जैसा कि वयस्क चूहों में देखा गया है। यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल चूहों का उपयोग करके सफल रहा जो पहले एन्कोडिंग/टेस्ट सत्र की शुरुआत में 15-16 सप्ताह पुराने थे । पहले, एक ही मजबूत एन्कोडिंग प्रोटोकॉल ने 23 सप्ताह पुराने चूहों का उपयोग करते समय नकारात्मक परिणामों के लिए उप-इष्टतम का उत्पादन किया जो पर्याप्त उम्र में हैंडलिंग और आदत की कमी के कारण आदत के इष्टतम स्तर तक नहीं पहुंचे थे। ये चूहे या तो मौका स्तर से अलग प्रदर्शन करने में विफल रहे या वास्तव में, विस्थापित वस्तुओं (डेटा नहीं दिखाए गए) के बजाय स्थिर वस्तुओं के लिए वरीयता के संदर्भ में मनाया गया नवीनता के प्रति घृणा प्रदर्शित किया। ये परिणाम इस बात का सबूत प्रदान करते हैं कि हैंडलिंग आदत की उम्र और समय का आदत की प्रभावशीलता पर प्रभाव पड़ सकता है और परिणामस्वरूप, परीक्षणों में उत्सुक और नियोफोबिक व्यवहार के अवलोकन में योगदान देते हैं।

यहां, ऑब्जेक्ट स्थान कार्य में मजबूत या कमजोर एन्कोडिंग सुनिश्चित करते हुए दो अलग-अलग प्रोटोकॉल रेखांकित किए गए हैं। इन प्रोटोकॉलों की स्थापना के दौरान, यह देखा गया कि एकल लंबे परीक्षणों(जैसे, 20 मिनट एन्कोडिंग) के दौरान 5-10 मिनट की खोज के बाद वस्तुओं में रुचि में गिरावट आई, और चूहों ने अंततः खोजना बंद कर दिया। इसके परिणामस्वरूप ऑब्जेक्ट स्थानों की कमजोर स्मृति होती है। एक एन्कोडिंग प्रोटोकॉल जो कम आराम अवधि(उदाहरण के लिए, 3 x 5 मिनट एन्कोडिंग) के साथ एन्कोडिंग परीक्षणों को इंटरलीव करता है, इस पर काबू पा जाता है और पूरे परीक्षणों में उच्च अन्वेषण की ओर जाता है। इस प्रकार, सक्रिय अन्वेषण समय और इन दोनों एन्कोडिंग प्रोटोकॉल का अलग-अलग लेआउट स्मृति की ताकत को प्रभावित करता है, जो 20-मिनट एन्कोडिंग प्रोटोकॉल की तुलना में 3 x 5 मिनट एन्कोडिंग के बाद मजबूत होता है। इसी तरह के परिणाम भी एकल परीक्षण बनाम interleaved परीक्षण प्रोटोकॉल के साथ थोड़ा अलग अवधि का उपयोग कर प्राप्त किया जा सकता है, और समायोजन अध्ययन और चूहे तनाव की जरूरतों के अनुरूप किया जा सकता है ।

कमरे में केवल बाहरी संकेतों के साथ एक सादे सफेद खुले मैदान का उपयोग करके प्रोटोकॉल का विरोध किया जाता है, यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल अलग संदर्भों और अंतर-भूलभुलैया संकेतों के साथ एक क्षेत्र का उपयोग करता है जिसे सीखने के लिए अधिक समय की आवश्यकता होती है। इसलिए, एन्कोडिंग परीक्षण से पहले प्रोटोकॉल में एक संदर्भ आदत कदम के अलावा की सिफारिश की जाती है। यह चूहों को आदत के दौरान प्रत्येक संदर्भ का एक स्थानिक नक्शा बनाने और निम्नलिखित एन्कोडिंग परीक्षण की अवधि को कम करने की अनुमति देगा, क्योंकि चूहों को केवल इस नक्शे के संबंध में वस्तुओं के स्थानों को एन्कोड करने की आवश्यकता होगी। इसके अलावा, संदर्भ आदत चूहों को प्रत्येक संदर्भ के भीतर किसी भी संभावित व्याकुलता की आदत बनाने की अनुमति देगा, जैसे कि 3 डी स्थानिक संकेत, एन्कोडिंग/परीक्षण सत्र में ऑब्जेक्ट एक्सप्लोरेशन के अलावा अन्य व्यवहारों को कम करने का पालन करें । कई स्तरों(यानी, ऑब्जेक्ट लोकेशन कॉम्बिनेशन (काउंटर्स) और ऑब्जेक्ट विस्थापन की दिशा से मिलकर एक पूरी तरह से प्रतिसंतुलन विधि के कार्यान्वयन के साथ, अवांछित प्राथमिकताएं जो प्रकाश तीव्रता में भिन्नता और अखाड़े के कोनों पर दीवार के रंग/पैटर्न में भिन्नता के कारण बढ़ सकती हैं, को कम किया जाता है।

एन्कोडिंग/टेस्ट सत्रों के बीच प्रतिशोध बढ़ाने और पुनरावृत्ति के प्रभाव को कम करने के लिए कार्य को दोहराते समय कई कारकों पर विचार किया जाना चाहिए । सबसे पहले, अलग संदर्भों (एन्कोडिंग/परीक्षण सत्रों की पुनरावृत्ति की संख्या के रूप में कई) को स्थानिक स्मृति के संचय से बचने के लिए डिज़ाइन किया जाना चाहिए जो एक ही संदर्भ का उपयोग करके दोहराए गए सत्रों को निष्पादित करने के कारण हो सकता है । इस लक्ष्य को हासिल करने के लिए, विभिन्न रंगों और पैटर्न की बदली दीवारों के साथ एक उपकरण का उपयोग किया गया था(चित्रा 1B,सी)। अलग दीवारों और 3 डी वस्तुओं (जैसे खिलौने या अलग रंग और आकार के छोटे रोजमर्रा की वस्तुओं के रूप में, प्रोटोकॉल और चित्रा 1Cदेखें) दीवारों पर लटका स्थानिक संकेतों और स्थलों कि चूहों संभावित अपने संदर्भों के संबंध में वस्तु स्थानों को जानने के लिए उपयोग कर रहे हैं । इस मामले में कि एक परीक्षण स्थानांतरित वस्तु के लिए वरीयता का उत्पादन करने में विफल रहता है, संदर्भ (दीवार डिजाइन और स्थानिक संकेतों) के इन मापदंडों को बदलने पर विचार किया जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, इस प्रोटोकॉल के रूप में एक वर्ग क्षेत्र के बजाय वस्तु स्थान कार्यों के लिए एक आयताकार या परिपत्र के आकार का क्षेत्र का उपयोग किया जा सकता है। परिपत्र एरेनास को कोने वरीयताओं को खत्म करने के लिए सूचित किया जाता है22 जो अक्सर कोनों के साथ एरेनास में मनाया जाता है, और इसलिए, विशेष रूप से उच्च चिंता वाले चूहे या माउस तनाव से निपटने के दौरान यह फायदेमंद हो सकता है। जबकि इस प्रोटोकॉल में चार अलग-अलग संदर्भ बनाने की आवश्यकताएं चतुष्कोणीय आकार के साथ सबसे बेहतर काम करती हैं, कुछ समायोजनों के बाद एक परिपत्र क्षेत्र को भी कार्यात्मक बनाया जा सकता है।

दूसरा, प्रत्येक एन्कोडिंग/परीक्षण सत्र के बीच अंतराल इस तरह निर्धारित किया जाना चाहिए कि चूहों हर बार ब्याज के एक ही स्तर को बनाए रखने, जबकि पुनरावृत्ति की एक घने अनुसूची के परिणामस्वरूप संचयी सीखने के जोखिम से परहेज । आमतौर पर, एन्कोडिंग और परीक्षण परीक्षणों के बीच देरी के समय की लंबाई कम से कम दोगुनी का अंतराल पर्याप्त होता है, जिसमें लंबे अंतराल दो से अधिक पुनरावृत्ति के लिए अधिक अनुकूल होते हैं। इसका मतलब यह है, जबकि 24-एच परीक्षण के बाद न्यूनतम 48-एच अंतराल एक या दो पुनरावृत्ति के लिए पर्याप्त है, 1-सप्ताह के अंतराल का उपयोग करके चार पुनरावृत्ति के लिए अनुशंसित है। चित्रा 5 में परिणाम और ANOVA शो का उपयोग कर तुलना के रूप में, कार्य सफलतापूर्वक चार बार दोहराया जा सकता है । इसके आधार पर स्थापित प्रोटोकॉल का इस्तेमाल चार प्रायोगिक स्थितियों तक प्रतिसंतुलित करने के लिए किया जा सकता है । प्रायोगिक समूहों की संख्या अलग-अलग संदर्भों में एन्कोडिंग/परीक्षण सत्रों की पुनरावृत्ति की संख्या निर्धारित करती है। चित्रा 5 में परिणाम दो प्रयोगात्मक समूहों के साथ प्रोटोकॉल का उपयोग करने के एक संभावित तरीके का प्रतिनिधित्व करते हैं । समूहों को दो सत्रों में प्रतिसंतुलित किया गया था, और दो अतिरिक्त सत्रों (सत्यापन उद्देश्यों के लिए) में एक ही शर्तों को दोहराया गया था। प्रतिसंतुलित सत्रों के दूसरे सेट का उपयोग नई स्थितियों को प्रतिसंतुलित करने के लिए भी किया जा सकता है । इसी प्रकार, तीन या चार प्रायोगिक स्थितियों की तुलना क्रमशः तीन या चार प्रतिसंतुलित सत्रों का उपयोग करके की जा सकती है ।

इन मामलों में, संदर्भों को प्रोटोकॉल में वर्णित विषम विशेषताओं को समायोजित करने के लिए डिज़ाइन किया जाना चाहिए। यह उल्लेखनीय है कि प्रतिसंतुलित डिजाइन उन प्रयोगों के लिए उपयुक्त नहीं हो सकता है जिनमें अतिरिक्त जोड़तोड़, जैसे कि एक औषधीय हस्तक्षेप जो लंबे समय तक चलने वाले प्रभाव या क्षति को छोड़ सकता है, का उपयोग किया जाना चाहिए। परीक्षणों की प्रभावशीलता और पुनर्प्रावर्तन को बनाए रखने के लिए, प्रयोग को तदनुसार डिजाइन किया जाना चाहिए। बार-बार परीक्षणों से डेटा को कई तरीकों से प्रस्तुत और विश्लेषण किया जा सकता है,जैसा कि चित्र 5 में दिखाया गया है। प्रारंभिक विश्लेषण के लिए, प्रत्येक संदर्भ में प्रयोगात्मक समूहों को किसी भी महत्वपूर्ण वरीयता(चित्रा 5B,D)निर्धारित करने के लिए एक-नमूना टी-टेस्टका उपयोग करके मौका स्तर की तुलना व्यक्तिगत रूप से की जा सकती है। यह डेटा की त्वरित समझ प्राप्त करने के लिए उपयोगी हो सकता है, लेकिन यह समूहों की केवल अप्रत्यक्ष तुलना सुनिश्चित करता है। इसलिए, दो या दो से अधिक समूहों की तुलना करने के लिए, डेटा का विश्लेषण क्रमशः दो-नमूना टी-परीक्षणों (युग्मित या अकर्मित) या ANOVA का उपयोग करके किया जाना चाहिए। यह एक ही एन्कोडिंग/टेस्ट सत्र(चित्रा 4A और चित्रा 5B,D) या दो (या अधिक) प्रतिसंतुलित संदर्भों(चित्रा 5C,ई)से समूहों की भीतर-विषय तुलना के भीतर समूहों की बीच-विषय तुलना के रूप में हो सकता है । उत्तरार्द्ध विधि की दृढ़ता से सिफारिश की जाती है, खासकर कमजोर स्मृति स्थितियों से निपटते समय, जैसा कि पहले समझाया गया है, व्यवहार में यादृच्छिकता के कारण उच्च भिन्नता होती है।

प्रतिसंतुलित संदर्भों के संयोजन से बड़े समूह होते हैं जो समूह के व्यवहार को न्यूनतम भिन्नता के साथ विश्वसनीय रूप से कल्पना करने के लिए आवश्यक होते हैं। प्रतिसंतुलित सत्रों में पुनरावृत्ति के साथ एक प्रोटोकॉल का उपयोग करना, कोई भी चूहों की संख्या में लगभग एक तिहाई संख्या में कमी की उम्मीद कर सकता है जो एक ही सांख्यिकीय शक्ति के साथ एक परीक्षण का उपयोग करके आवश्यक होगा। आमतौर पर, प्रतिसंतुलित सत्रों के लिए 7 से 15 चूहों (कुल) की सीमा में नमूना आकार और एक प्रभाव आकार के साथ एक सत्र के लिए 20 से 50 चूहों (10 से 25 प्रति समूह) की सीमा में और 0.8 से बड़ा दोनों शक्ति पर्याप्त हैं। आवश्यक जानवरों की संख्या में कमी और जानकारी हम इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर प्रत्येक जानवर से प्राप्त में वृद्धि दोनों अध्ययन को परिष्कृत और अनुसंधान में जानवरों के नैतिक उपयोगों के 3R सिद्धांतों में कार्य करता है । इस कदम पर यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि यादृच्छिक चूहा व्यवहार, जो एक मजबूत स्मृति के साथ नहीं है, नीचे और ऊपर दोनों मौका के साथ व्यक्तिगत मजबूत वरीयताओं में परिणाम हो सकता है, लेकिन समूह औसत एक वरीयता मौका से काफी अलग नहीं उपज चाहिए । व्यक्तिगत डेटा की सावधानीपूर्वक व्याख्या की जानी चाहिए। एक समूह के भीतर व्यक्तिगत डेटा अंक का वितरण भी परिणामों की व्याख्या के लिए जानकारीपूर्ण हो सकता है । जैसा कि चित्र 4 और चित्रा 5 में देखा गया है,स्मृति की ताकत के आधार पर वितरण बदलता है। कुल मिलाकर, यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल का पालन आसानी से किया जा सकता है ताकि अल्पकालिक और/या दीर्घकालिक स्थानिक स्मृति को मॉडल करने के लिए पुनरावृत्ति के साथ ऑब्जेक्ट लोकेशन टास्क को लागू किया जा सके । सरल और लचीला प्रशिक्षण प्रोटोकॉल और आगे जोड़तोड़ को लागू करने की संभावना इस कार्य को एक लोकप्रिय विकल्प बनाती है। प्रोटोकॉल में ये संशोधन स्मृति अधिग्रहण, समेकन और रिकॉल जैसे विशेष चरणों की जांच को सक्षम करते हैं।

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

हम व्यावहारिक टिप्पणियों और सुझावों के लिए एंटोनियोस असीमिनास, डोरोथी त्से, किइची ओ हारा और डेविड बेट का शुक्रिया अदा करना चाहेंगे। इस अध्ययन को इरासमस + (जी.B और एलएन) द्वारा समर्थित किया गया था; ग्रेजुएट स्कूल ऑफ हेल्थ, आरोहस विश्वविद्यालय (केएच) के लिए); नोवो नॉर्डडिस्क फाउंडेशन यंग अन्वेषक पुरस्कार 2017 (NNF17OC0026774), लुंडबेकफोडेन (DANDRITE-R248-2016-2518) और PROMEMO - स्मृति में प्रोटीन के लिए केंद्र, डेनिश नेशनल रिसर्च फाउंडेशन (DNRF133) (T.T.) द्वारा वित्त पोषित उत्कृष्टता का केंद्र।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Open-field/experimental box O'Hara & Co (Japan) OF-3001 Open-field box for the object location task
Object 1: cones O'Hara & Co (Japan) ORO-RR
Object 2: footballs O'Hara & Co (Japan) ORO-RB
Object 3: rectangular blocks O'Hara & Co (Japan) ORO-RC Rectangular blocks were modified after purchase
Object location task apparatus O'Hara & Co (Japan) SPP-4501 Sound attenuating box that contains the open-field box for the object location task
Tracking software O'Hara & Co (Japan) TimeSSI For movement tracking and automated camera functions
Wild-type Lister Hooded rats Charles River 603

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References

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व्यवहार अंक 171 ऑब्जेक्ट स्थान कार्य स्थानिक स्मृति मान्यता स्मृति चूहा भीतर-विषय डिजाइन
चूहों में ऑब्जेक्ट लोकेशन टास्क का उपयोग करके एक भीतर-विषय प्रायोगिक डिजाइन
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Bayraktar, G., Højgaard, K.,… More

Bayraktar, G., Højgaard, K., Nijssen, L., Takeuchi, T. A Within-Subject Experimental Design using an Object Location Task in Rats. J. Vis. Exp. (171), e62458, doi:10.3791/62458 (2021).

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