Pré-quiasmática, injeção única de sangue autólogo para induzir hemorragia subaracnóidea experimental em modelo de rato

Resumo

A hemorragia subaracnóidea continua a carregar uma alta carga de mortalidade e morbidade no homem. Para facilitar novas pesquisas sobre a condição e sua fisiopatologia, um modelo pré-quiasmático de injeção única é apresentado.

Resumo

Apesar dos avanços no tratamento nas últimas décadas, a hemorragia subaracnóidea (HAS) continua a carregar uma alta carga de morbidade e mortalidade, acometendo em grande parte uma população bastante jovem. Vários modelos animais de HAS têm sido desenvolvidos para investigar os mecanismos fisiopatológicos por trás da HAS e testar intervenções farmacológicas. O modelo pré-quiasmático de injeção única no rato apresentado neste artigo é um modelo experimental de HAS com volume sanguíneo pré-determinado. Resumidamente, o animal é anestesiado, intubado e mantido em ventilação mecânica. A temperatura é regulada com uma almofada de aquecimento. Um cateter é colocado na artéria caudal, permitindo a medição contínua da pressão arterial, bem como a coleta de sangue. A membrana atlantooccipital é incisada e um cateter para registro de pressão é colocado na cisterna magna para permitir a medição da pressão intracerebral. Esse cateter também pode ser utilizado para intervenções terapêuticas intratecais. O rato é colocado em uma estrutura estereotáxica, um orifício de rebarba é perfurado anteriormente ao bregma, e um cateter é inserido através do orifício da broca e colocado logo anterior ao quiasma óptico. O sangue autólogo (0,3 mL) é retirado do cateter de cauda e injetado manualmente. Isso resulta em um aumento da pressão intracerebral e uma diminuição do fluxo sanguíneo cerebral. O animal é mantido sedado por 30 min e recebe soro fisiológico e analgésicos por via subcutânea. O animal é extubado e devolvido à gaiola. O modelo pré-quiasmático apresenta alta taxa de reprodutibilidade e variação limitada entre os animais devido à volemia pré-determinada. Ele mimetiza a HAS em humanos, tornando-se um modelo relevante para a pesquisa da HAS.

Introdução

A hemorragia subaracnóidea (HSA) não traumática é uma forma de acidente vascular cerebral, representando cerca de 5% de todos os casos. A causa mais comum de HAS não traumática é a ruptura súbita de um aneurisma (HAAS), que corresponde a 85% das HAS. Outras causas incluem a ruptura de malformação arteriovenosa, coagulopatias e ruptura de veias na hemorragia perimesencefálica¹. A taxa de incidência é de 9 por 100.000 pessoas-ano, com mortalidade em torno de um em cada três e outro terço necessitando do suporte da vida diária após a HAS ^2,3.

Após a estabilizaçã....

Protocolo

Este procedimento é feito de acordo com a Diretiva 2010/63/UE da União Europeia relativa à proteção de animais utilizados para fins científicos e aprovada pela Inspeção Dinamarquesa de Experiências Animais (licença n.º 2016-15-0201-00940). A cirurgia é realizada usando técnica asséptica na medida do possível, incluindo instrumentos estéreis, luvas, cateteres e suturas. Foram utilizados ratos machos e fêmeas da linhagem Sprague-Dawley, pesando entre 230 e 350 g, grupo alojados em ciclo claro/escuro de 12 horas, com temperatura constante de 22 °C (± 2 °C) e umidade de 55% (± 10%). Os animais recebem ração padrão e água ad libitum. Os animais são alojados em gaiolas indi....

Resultados

As mulheres têm um risco aumentado de HSA em comparação com os homens. Apesar disso, roedores machos são usados principalmente em experimentos devido ao possível viés da heterogeneidade do ciclo estral em fêmeas. Os resultados representativos aqui apresentados são de uma publicação recente comparando ratos fêmeas e machos, confirmando que o modelo produz resultados semelhantes em fêmeas em comparação com^{machos 21}. Participaram do estudo 34 ratas da raça Sprague-Dawley (18 HSAs e 16 shams). Shams n.......

Discussão

O modelo pré-quiasmático de injeção única de HAS mimetiza vários elementos importantes da HAS humana, incluindo a espícula da PIC, redução do FSC, isquemia global transitória, suprarregulação de marcadores neuroinflamatórios e SCV 14,15,16,18,19,20. A sonda ICP também foi utilizada como porta para administração intratecal (

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Cateter de veia periférica 16 G	BD Venflon	393229	Agulha encurtada, distal 1 cm curvada. Asas removidas
Campânula/câmara	de anestesia Desconhecido
Analisador de gases sanguíneos	Radiômetro	ABL80
Monitor de pressão arterial (PA)	Adinstruments	ML117	Conecta-se a
Powerlab Pinça curva, 12 cm x 3	F.S.T	11001-12	Para anestesia
Almofada cilíndrica, 28 cm x 4 cm	Caseiro		Feito de toalhas cirúrgicas
Hardware de aquisição de dados	Adinstruments	ML870 Powerlab
Software de aquisição de dados	Adinstruments	LabChart 6.0
Broca	KMD	1189
Controlador de broca	Silfradent	300 IN
Luz flexível	Schott	KL200
Almofada de aquecimento	Minco	1135
Agulha hipodérmica, 20 G	KD Medical	301300	Conecta-se ao monitor ICP de quadro estereotáxico
	Adinstruments	ML117	Conecta-se ao
vaporizador de isoflurano	Powerlab Ohmeda	TEC3
Laptop	Lenovo	T410
Monitor doppler a laser	Adinstruments	ML191
Sonda doppler a laser	Oxford Optronics	MSF100XP	Conecta-se ao monitor doppler a laser
Porta-agulhas, 13 cm	F.S.T	12001-13	Para anestesia
Seringa de precisão, 0,025 mL	Hamilton	547407
Quadro estereotáxico	Kopf Instruments	M900
Microscópio cirúrgico	Carl Zeiss	F170
Sutura agulha	Allgaier	1245	para
anestesia Controlador de temperatura	CWE,INC.	Transdutor TC-1000
x 2	Adinstruments	MLT0699	Conecta-se ao monitor BP e ICP
Ventilador	Ugo Basile	7025
Clipper veterinário	Aesculap	GT421
Afastador Blair de 3 pontas, 13,5 cm	Agnthos	17022--13
Afastador de Alm sem corte	FST	17008-07
Pinça curva, 12 cm x 2	F.S.T	11001-12
Porta-agulhas, 13 cm	F.S.T	12001-13
Pinça reta Dumont, 11 cm	F.S.T	11252-00
Hemostático Halsted-Mosquito reto x 2	F.S.T	13008-12
Tesoura de íris reta, 9 cm	F.S.T	14090-09
Tesoura reta Vannas, 10,5 cm	F.S.T	15018-10
Cotonetes absorvíveis	Kettenbach	31603
Linha de seda preta, 4-0, 5 x 15 cm	Vö mel	14757
Cera óssea	Aesculap	1029754
Gel para os olhos de carbômero 2 mg/g	Cotonete Paranova
	Heinz Herenz	WA-1
Aplicador com ponta de algodão x 4	Selefa	120788
Agulha hipodérmica, 23 G x2	KD Medical	900284	Conecta-se à torneira. Remova a extremidade distal
Agulha hipodérmica, 23 G x3	KD Medical	900284	Remova a extremidade distal. 2 conecta-se à torneira, 1 à seringa
Sonda ICP:	Caseiro		Feito do seguinte:
Tubo de polietileno, 20 mm	Smiths medical	800/100/200	Diâmetro interno (ID): 0,58 mm, Diâmetro externo (OD): 0,96 mm.
Tubo de silicone, 10 mm	ID do 15202710 Fisher		: 0,76 mm, OD: 2,4 mm.
Tubo de silicone, 2 mm	Fisher	11716513	ID: 1,0 mm, OD: 3,0 mm.
Tubos de micro hematócrito	Marca	7493 11
OP-toalha, 45 cm x75 cm	Mö lnlycke	800430
Adaptador PinPort, 22 G	Instech	PNP3F22
Injetor PinPort	Instech	PNP3M
Tubo de polietileno, 2 x 20 cm	Smiths medical	800/100/200	Conecta-se à seringa. ID: 0,58 mm, OD: 0,96 mm.
Elástico	Bisturi Desconhecido
, 10 lâminas	Kiato	23110
Agulha espinhal, 25 G x 3,5''	Braun	5405905-01
Sistema de torneira, Discofix x 2	Braun	16494C	Conecta-se ao transdutor
Sutura, 4-0, monofil, não reabsorvível x 3 Seringa	EH7145H		Ethicon
, 1 mL	BD Plastipak	1710023
Seringa, luer-lock, 10 mL x 4	BD Plastipak	305959	Conecta-se ao transdutor
Cola adesiva tecidual	3M	1469SB
0,5% Chlorhexidine spirit	Faaborg Pharma	210918
Carprofeno 50 mg/mL	ScanVet	43715	Isoflurano diluído 1:10
	Baxter
Solução salina isotônica	Amgros	16404
Lidocaína-Adrenalina 10 mg/5 µ g / mL	Amgros	16318