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Neuroscience

Vivo में बड़े जानवरों में रेटिना गैंग्लियन सेल और ऑप्टिक तंत्रिका समारोह और संरचना का आकलन करने के तरीके

Published: February 26, 2022 doi: 10.3791/62879
Automatic Translation
*1, *1, *1, 1, 1, 1, 1, 1, 1, 1
1The Eye Hospital, School of Ophthalmology & Optometry, Wenzhou Medical University
* These authors contributed equally

Summary

यहां हम ऑप्टिक तंत्रिका और इसके न्यूरॉन्स की संरचना और कार्य को समझने के लिए बकरी और रीसस मकाक में विवो परीक्षणों (फ्लैश विजुअल इवोक्ड पोटेंशियल, पैटर्न इलेक्ट्रोरेटिनोग्राम और ऑप्टिक सुसंगतता टोमोग्राफी) में कई लोगों को डेमोस्ट्रैट करते हैं।

Abstract

ऑप्टिक तंत्रिका रेटिना गैंग्लियन कोशिकाओं से अक्षतंतु संकेतों को एकत्र करती है और मस्तिष्क को दृश्य संकेत प्रसारित करती है। ऑप्टिक तंत्रिका चोट के बड़े पशु मॉडल आकार और शरीर रचना विज्ञान में मनुष्यों के लिए उनकी करीबी समानताओं के कारण कृंतक मॉडल से नैदानिक अनुप्रयोग के लिए उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों का अनुवाद करने के लिए आवश्यक हैं। यहां हम बड़े जानवरों में रेटिना गैंग्लियन कोशिकाओं (आरजीसी) और ऑप्टिक तंत्रिका (ओएन) के कार्य और संरचना का मूल्यांकन करने के लिए विवो विधियों में कुछ का वर्णन करते हैं, जिसमें दृश्य संभावित (वीईपी), पैटर्न इलेक्ट्रोरेटिनोग्राम (पीईईआरजी) और ऑप्टिकल कोहेरेंस टोमोग्राफी (ओसीटी) शामिल हैं। बकरी और गैर-मानव प्राइमेट दोनों को इस अध्ययन में नियोजित किया गया था। कदम दर कदम विवो विधियों में इन्हें प्रस्तुत करके, हम विभिन्न प्रयोगशालाओं के बीच प्रयोगात्मक पुनरुत्पादन में वृद्धि करने और ऑप्टिक न्यूरोपैथी के बड़े पशु मॉडल के उपयोग की सुविधा प्रदान करने की उम्मीद करते हैं।

Introduction

ऑप्टिक तंत्रिका (ओएन), जिसमें रेटिना गैंग्लियन कोशिकाओं (आरजीसी) से अक्षतंतु होते हैं, रेटिना से मस्तिष्क तक दृश्य संकेत प्रसारित करता है। डॉडरामस, दर्दनाक या इस्केमिक ऑप्टिक न्यूरोपैथी जैसे रोगों पर, अक्सर अपरिवर्तनीय ON / RGC अध: पतन और विनाशकारी दृश्य हानि का कारण बनता है। यद्यपि वर्तमान में कृंतक मॉडल 1,2,3,4,5,6 में ऑन पुनर्जनन और आरजीसी संरक्षण में कई सफलताएं हैं, अधिकांश ऑन बीमारियों के लिए नैदानिक उपचार असंतोषजनक परिणाम के साथ पिछली आधी शताब्दी में अनिवार्य रूप से समान रहे 7,8 . बुनियादी अनुसंधान और नैदानिक अभ्यास के बीच के अंतर को भरने के लिए, ON बीमारियों के बड़े पशु मॉडल का उपयोग करके ट्रांसलेशनल अध्ययन अक्सर आवश्यक और फायदेमंद होते हैं क्योंकि कृंतक मॉडल की तुलना में मनुष्यों के लिए उनकी करीबी शारीरिक समानता होती है।

बकरी और रीसस मकाक दो बड़ी जानवरों की प्रजातियां हैं जिनका उपयोग हमारी प्रयोगशाला में मानव की ऑन बीमारी के मॉडल के लिए किया जाता है। एक बकरी की नेत्रगोलक, ओएन, और आसन्न संरचना (कक्षीय और नाक गुहा, खोपड़ी आधार, आदि) का आकार खोपड़ी सीटी स्कैन 9 पर आधारित मानव के समान है। जैसे, बकरी मॉडल मनुष्यों में उपयोग करने से पहले चिकित्सीय उपकरणों या सर्जिकल प्रक्रियाओं का मूल्यांकन और परिष्कृत करने का अवसर प्रदान करता है। रीसस मकाक, गैर-मानव प्राइमेट (एनएचपी) के रूप में, मानव जैसी अद्वितीय दृश्य प्रणाली है जो अन्य प्रजातियों में मौजूद नहीं है10,11। इसके अलावा, एनएचपी में चोटों और उपचारों के लिए pathophysiological प्रतिक्रियाएं मनुष्यों में बहुत समान हैं।

विवो परीक्षणों में ON और RGC की संरचना का आकलन करने के लिए और अनुदैर्ध्य रूप से कार्य बड़े पशु अध्ययनों में महत्वपूर्ण हैं। पैटर्न इलेक्ट्रोरेटिनोग्राम (PERG) का उपयोग RGC फ़ंक्शन का मूल्यांकन करने के लिए किया गया है। फ़्लैश दृश्य evoked क्षमता (FVEP) दृश्य प्रणाली में रेटिनो-geniculo-cortical मार्ग की अखंडता को दर्शाता है। इस प्रकार, FVEP के साथ संयुक्त PERG ON फ़ंक्शन9,13,14 को प्रतिबिंबित कर सकता है। रेटिना ऑप्टिक सुसंगतता टोमोग्राफी (ओसीटी) इमेजिंग उच्च अस्थायी और स्थानिक संकल्प के साथ रेटिना संरचना को दिखा सकती है, जो रेटिना गैंग्लियन कॉम्प्लेक्स (जीसीसी) 9,15 की मोटाई के माप को सक्षम बनाता है। इस अध्ययन में इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल परीक्षाओं के लिए, परीक्षण से पहले महत्वपूर्ण संकेतों (गर्मी दर, उल्लंघन दर, रक्तचाप) और ऑक्सीजन संतृप्ति (एसपीओ 2) के स्तर की निगरानी करना महत्वपूर्ण है क्योंकि इन मापदंडों का ओकुलर रक्त प्रवाह पर शक्तिशाली प्रभाव पड़ता है और इस प्रकार दृश्य प्रणाली का कार्य होता है। हालांकि, सादगी की खातिर ओसीटी रेटिना इमेजिंग करते समय हमने महत्वपूर्ण संकेतों की निगरानी नहीं की। हमारे पिछले अध्ययन 9 के अनुसार, ओसीटी रेटिना इमेजिंग द्वारा मापा गया जीसीसी मोटाई काफी स्थिर है, जिसमें भिन्नता का अंतर-सत्र गुणांक 3% के करीब है। बकरी और रीसस मकाक में विवो परीक्षणों में ये हमारे पिछले अध्ययन 9 में विस्तार से वर्णित किए गए हैं। यहां हम प्रयोगात्मक पारदर्शिता और पुनरुत्पादन को बढ़ाने में मदद करने के लिए इन तरीकों को प्रस्तुत करते हैं।

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Protocol

प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए आगमन दिशानिर्देशों और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान गाइड के अनुसार प्रयोगों को सख्ती से आयोजित किया गया था, और वेनझोउ मेडिकल यूनिवर्सिटी (डब्ल्यूएमयू) और जॉइनन लैबोरेटरी (सुझोउ) में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल का पालन करें। नर सानेन बकरियों, जिनकी उम्र 19-23 किलोग्राम के वजन के साथ 4 से 6 महीने तक थी, को डब्ल्यूएमयू पशु सुविधा में रखा गया था। नर रीसस मकाक, 5-7 किलोग्राम वजन के साथ 5 से 6 साल की उम्र के थे, जोइनन पशु सुविधा में रखे गए थे। सभी जानवरों को नियंत्रित तापमान (21 ± 2 डिग्री सेल्सियस) के साथ एक वातानुकूलित कमरे में बनाए रखा गया था, जो भोजन विज्ञापन लिबिटम के साथ 12 घंटे के प्रकाश / 12 घंटे के अंधेरे चक्र के तहत था।

1. फ्लैश दृश्य बकरी में संभावित (FVEP) evoked

  1. सामान्य संवेदनाहारीकरण
    1. एक इलेक्ट्रॉनिक रेजर के साथ हॉक बालों को शेव करें।
    2. त्वचा को साफ करने के लिए तीन बार 70% अल्कोहल के साथ रगड़कर त्वचा को तैयार करें, और फिर चमड़े के नीचे की नस को उजागर करें।
    3. एक परिधीय शिरापरक कैथेटर को अंतःशिरा रूप से (0.9 मिमी x 25 मिमी) डालें, और फिर एट्रोपिन (0.025 मिलीग्राम / किग्रा) और प्रोपोफोल (5 मिलीग्राम / किग्रा) इंजेक्ट करें।
    4. बकरी को 6 मिमी श्वासनली ट्यूब के साथ इंटुबेट करें और इसे एक कृत्रिम श्वसन यंत्र से जोड़ें।
    5. ऑक्सीजन में 3.5% आइसोफ्लुरेन के साथ 2 एल / मिनट की स्थिर प्रवाह दर पर संज्ञाहरण बनाए रखें।
      नोट: बकरी मिनटों के भीतर प्रोपोफोल द्वारा प्रेरित संज्ञाहरण से ठीक हो जाती है, इसलिए बकरी को इंट्यूबेट करने के लिए तेजी से हो।
  2. कार्डियोपल्मोनरी निगरानी
    1. जीभ के नीचे तापमान सेंसर रखें।
    2. नाड़ी ऑक्सीमीटर को कान के समीपस्थ छोर से जोड़ें।
    3. रक्तचाप कफ को जांघ के आधार पर बांधें।
    4. तदनुसार अंगों पर ईसीजी क्लिप क्लैंप.
      नोट: बकरियों की सामान्य हृदय गति 68-150 बीपीएम है। गैस एनेस्थीसिया के इस्तेमाल से बकरियों की हृदय गति बढ़ेगी। इसलिए, निरीक्षण के दौरान हमारी हृदय गति 170 ± 30 बीपीएम है। सामान्य परिस्थितियों में बकरियों का सिस्टोलिक रक्तचाप 110-130 mmHg है, और डायस्टोलिक रक्तचाप 50-60 mmHg है। ऑक्सीजन को साँस लेने की स्थिति में, बकरी के रक्त ऑक्सीजन संतृप्ति को हमेशा 99% पर बनाए रखा जा सकता है। संज्ञाहरण के तहत बकरियों की सांस लेने की दर वेंटिलेटर के साथ सिंक्रनाइज़ की जाती है, जो 10 सांस / मिनट है। चूंकि तापमान बकरी की जीभ के नीचे से मापा गया था, न कि कोर तापमान, बकरी का तापमान आमतौर पर 35 ± 2 डिग्री सेल्सियस होता है।
  3. खोपड़ी शिकंजा आरोपण और इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट
    1. एक क्लिपर के साथ बाल शेव करें। बीटाडीन में भिगोई गई कपास की गेंद और तीन बार 70% अल्कोहल के साथ रगड़कर ललाट हड्डी के केंद्र पर त्वचा को कीटाणुरहित करें।
    2. निष्फल शिकंजा और कैंची का उपयोग करें।
      नोट: नसबंदी के लिए सभी सर्जिकल उपकरणों को आटोक्लेव करें (121 डिग्री सेल्सियस, 20 मिनट)।
    3. एक नेत्र कैंची के साथ ललाट की हड्डी को उजागर करने के लिए एक 5 मिमी त्वचा चीरा बनाएं, और फिर एक पेचकस का उपयोग करके ललाट हड्डी के केंद्र में एक निष्फल पेंच प्रत्यारोपित करें।
    4. बालों को शेव करें और बीटाडीन और 70% अल्कोहल के साथ दो कानों के बीच केंद्रीय पश्चकपाल की हड्डी पर त्वचा को कीटाणुरहित करें, एक के बाद दूसरा, तीन बार।
    5. एक नेत्र कैंची के साथ पश्चकपाल हड्डी को उजागर करने के लिए एक 5 मिमी त्वचा चीरा बनाएं, और फिर ओसीसीपटल हड्डी के केंद्र में एक निष्फल पेंच प्रत्यारोपित करें।
      नोट: जमीन सुई इलेक्ट्रोड ललाट खोपड़ी पेंच के नीचे चमड़े के नीचे डाला जाता है। सक्रिय और संदर्भ इलेक्ट्रोड ओसीसीपटल और ललाट शिकंजा से जुड़े होते हैं, क्रमशः, इलेक्ट्रोड प्रतिबाधा 16 को कम करने के लिए मगरमच्छ क्लिप के साथ।
  4. पशु तैयारी
    1. आंख को कवर करने के लिए लाइटप्रूफ कपड़े का उपयोग करें और एक आंख को पैच करने के लिए आंखों पर पट्टी द्वारा ठीक करें।
    2. दोनों आंखों पर सामयिक संवेदनाहारी आईड्रॉप्स (प्रोपैराकेन हाइड्रोक्लोराइड आईड्रॉप्स) लागू करें। द्विपक्षीय विद्यार्थियों को ट्रॉपिकमाइड (5%) और फेनिलेफ्रिन (5%) के साथ माइड्रियाटिक आईड्रॉप्स के सामयिक प्रशासन द्वारा फैलाया जाता है।
    3. गैंज़फेल्ड उत्तेजक में बकरी के सिर को रखें और परिवेश प्रकाश को मंद करें।
      नोट: यह पाया गया कि बकरियां संज्ञाहरण के तहत अच्छे नेत्रगोलक निर्धारण को बनाए रख सकती हैं, इसलिए कोई अतिरिक्त नेत्रगोलक निर्धारण ऑपरेशन हस्तक्षेप की आवश्यकता नहीं है।
    4. उत्तेजक और बकरी के सिर को अनुकूलन के लिए 5 मिनट के लिए एक काले कंबल के साथ कवर करें।
    5. bulbar conjunctiva को उजागर करने के लिए पलक speculum का उपयोग करें। ऊपरी अंगूठी को मोड़ें, ऊपरी पलक को ऊपर खींचें, और ऊपरी अंगूठी को पहले ऊपरी पलक के कंजंक्टिवल थैली में डालें और फिर इसी तरह से निचली पलक में डालें।
    6. इलेक्ट्रोड-ऊतक संपर्क प्रतिबाधा की जांच करने के लिए प्रतिबाधा बटन दबाएं और प्रतिबाधा के मूल्यों को प्रत्येक चैनल में दिखाया जाएगा।
    7. सुनिश्चित करें कि प्रतिबाधा एक ही कमरे में अन्य विद्युत उपकरणों से विद्युत चुम्बकीय हस्तक्षेप से बचने के लिए प्रत्येक इलेक्ट्रोड के लिए 10 kΩ से नीचे है।
      नोट: यदि यह 10 kΩ से ऊपर है, तो इलेक्ट्रोड को फिर से कनेक्ट करें या बदलें। प्रतिबाधा असामान्य रूप से उच्च दिखाई दे सकती है यदि विद्युत धातु सर्जिकल बिस्तर, जहां बकरी झूठ बोलती है, प्लग की जाती है। प्रतिबाधा को विद्युत हस्तक्षेप को कम करने के लिए सक्रिय और संदर्भ इलेक्ट्रोड के बीच 1 kΩ से कम से भिन्न होना चाहिए।
    8. प्रकाश उत्तेजना के बिना आधार रेखा शोर की जांच करने के लिए Oscillograph बटन दबाएँ।
      नोट:: यदि कोई बड़ा आधार रेखा शोर है, तो एक ही कमरे में अन्य सभी विद्युत उपकरणों को अनप्लग करें और सेल फोन बंद कर दें। यदि आधार रेखा समस्या बनी रहती है, तो चरण 1.3.10 पर जाएँ। जांच करने के लिए कि क्या एक ठेठ FVEP तरंग प्राप्त किया जा सकता है। यदि नहीं, तो किसी अन्य समय में FVEP परीक्षण को पुनर्निर्धारित करें।
    9. ऊपरी-दाएं कोने में सफेद पृष्ठभूमि बॉक्स में क्रमशः 0.025, 0.5, और 3.0 cd·s/m2 की प्रकाश तीव्रता का चयन करके FVEP रिकॉर्डिंग प्रारंभ करें। उसके बाद, परीक्षा बटन दबाएँ। ध्यान दें कि प्रत्येक प्रकाश तीव्रता पर FVEP रिकॉर्डिंग दो बार किया जाता है।
      नोट: यदि दो waveforms स्पष्ट रूप से अलग दिखाई देते हैं, तो एक और दोहराने की आवश्यकता है।
    10. कृत्रिम आंसू eyedrops के साथ कॉर्निया नम, अगर यह अवरक्त कैमरे पर सूखी दिखाई देता है.
      नोट: यह सुनिश्चित करने के लिए कि दृश्य टकटकी सही है और पुतली पूरी तरह से उजागर है (ताकि एक फ्लैश उत्तेजना का क्षेत्र आकार 90 डिग्री है) रिकॉर्डिंग से पहले शामिल अवरक्त कैमरे से आंख की स्थिति की निगरानी करें। एक anesthetized बकरी की आंख की स्थिति तदनुसार अपने सिर को मोड़कर समायोजित किया जा सकता है। हमारे अवलोकन के आधार पर, टकटकी भटकना शायद ही कभी सामान्य संज्ञाहरण 9 के तहत बकरी में FVEP रिकॉर्डिंग (~ 10 मिनट) के दौरान होता है। इसलिए रिकॉर्डिंग करते समय टकटकी को रोकने और फिर से समायोजित करने की कोई आवश्यकता नहीं है।
    11. contralateral आंख के लिए उपरोक्त चरणों को दोहराएं।
    12. Isoflurane आपूर्ति बंद करो और बकरी सामान्य संज्ञाहरण से ठीक होने में मदद करने के लिए वेंटिलेटर पर ज्वारीय मात्रा में थोड़ा वृद्धि।
    13. सामान्य संज्ञाहरण के बाद, संक्रमण को रोकने के लिए जेंटामाइसिन (4 मिलीग्राम / किग्रा, आईएम) और सेफ्टिओफर सोडियम (एक सेफलोस्पोरिन, 2 मिलीग्राम / किग्रा, आईएम) के साथ बकरी का इलाज करें।
  5. FVEP माप और मात्रात्मक विश्लेषण
    नोट: जैसा कि चित्र 1A में दिखाया गया है, FVEP तरंग में पहली सकारात्मक और नकारात्मक चोटियों को P1 और N1 के रूप में नामित किया गया है, और P2 के रूप में दूसरी सकारात्मक चोटी। P1, N1, और P2 का विशिष्ट अंतर्निहित समय क्रमशः लगभग 40, 60 और 120 ms है। P1 और P2 amplitudes को N1 तरंग के गर्त से क्रमशः P1 और P2 waveforms की चोटियों तक मापा जाता है।
    1. मोनोकुलर चोट के मामले में, आयाम और अंतर्निहित समय की इंटरओकुलर तुलना का उपयोग करें ताकि इंटरसेशन भिन्नता को कम करने और संवेदनशीलता को बढ़ाने में मदद मिल सके।

2. रीसस मकाक में PVEP

नोट: पैटर्न VEPs रीसस macaques9 में प्राप्त किया जा सकता है और आयाम और निहित time17 में फ्लैश VEP की तुलना में अधिक स्थिर हैं। इसलिए, पीवीईपी का उपयोग गैर-मानव प्राइमेट्स में रेटिनो-जेनिकुलो-कॉर्टिकल मार्ग की अखंडता का पता लगाने के लिए किया गया था।

  1. पशु तैयारी
    1. Zoletil50 (4-8 मिलीग्राम / किग्रा IM, tiletamine / zolazepam) के साथ प्रेरण के बाद isoflurane (1.5% -2%) के साथ बंदर को एनेस्थेटिक करें।
    2. earlobe पर निष्फल जमीन इलेक्ट्रोड की स्थिति. ललाट और पश्चकपाल हड्डी पर मध्य रेखा के साथ चमड़े के नीचे स्टरलाइज्ड सक्रिय और संदर्भ इलेक्ट्रोड डालें, क्रमशः।
    3. bulbar conjunctiva को उजागर करने के लिए पलक speculum लागू होते हैं।
    4. contralateral आँख पैच करने के लिए चिपकने वाला अपारदर्शी काले टेप का उपयोग करें।
  2. PVEP रिकॉर्डिंग
    1. इलेक्ट्रोड-ऊतक संपर्क प्रतिबाधा की जांच करने के लिए प्रतिबाधा बटन दबाएं और प्रतिबाधा के मूल्यों को प्रत्येक चैनल में दिखाया जाएगा; सुनिश्चित करें कि यह 10k Ω से नीचे है। यदि नहीं, तो इलेक्ट्रोड को फिर से कनेक्ट करें या बदलें।
    2. प्रतिबाधा परीक्षण विंडो में प्रतिबाधा के मूल्यों की जाँच करें और सुनिश्चित करें कि प्रतिबाधा विद्युत हस्तक्षेप को कम करने के लिए सक्रिय और संदर्भ इलेक्ट्रोड के बीच 1 kΩ से कम से भिन्न होती है।
    3. उत्तेजना के बिना बेसलाइन शोर की जांच करने के लिए Oscillograph बटन दबाएँ।
      नोट:: यदि कोई बड़ा आधार रेखा शोर है, तो एक ही कमरे में अन्य सभी विद्युत उपकरणों को अनप्लग करें और सेल फोन बंद कर दें। यदि आधार रेखा समस्या बनी रहती है, तो किसी अन्य दिन PVEP परीक्षण को फिर से करें।
    4. ऊपरी-दाएं कोने में सफेद पृष्ठभूमि बॉक्स में क्रमशः 0.5 और 1.0 चक्र / डिग्री की प्रकाश तीव्रता का चयन करके अप्रकाशित आंखों की PVEP प्रतिक्रियाओं को रिकॉर्ड करें, और फिर परीक्षा बटन दबाएं।
      नोट: प्रत्येक रिकॉर्डिंग के लिए, 64 निशान एक तरंग उपज करने के लिए औसत कर रहे हैं। प्रत्येक आवृत्ति के लिए, PVEP संकेतों की पुनरुत्पादकता को सत्यापित करने के लिए न्यूनतम दो रिकॉर्डिंग प्राप्त की जाती हैं।
    5. contralateral आंख के लिए प्रक्रिया को दोहराएं।
    6. एक बार हो जाने के बाद, बंदर को जगाने के लिए आइसोफ्लुरेन की आपूर्ति बंद कर दें।
    7. सामान्य संज्ञाहरण के बाद, संक्रमण को रोकने के लिए gentamicin (4 मिलीग्राम / किग्रा आईएम) और ceftiofur सोडियम (2 मिलीग्राम / किग्रा आईएम) के साथ बंदर का इलाज करें।
  3. PVEP माप और मात्रात्मक विश्लेषण
    1. जैसा कि चित्रा 1 बी में दिखाया गया है, पीवीईपी तरंग में पहली नकारात्मक और सकारात्मक चोटियों को एन 1 और पी 1 के रूप में नामित किया गया था, जो आमतौर पर लगभग 50 और 90 एमएस पर होते हैं। P1 आयाम को N1 के गर्त से P1 के शिखर तक मापा जाता है।
    2. मोनोकुलर चोट के मामले में, आयाम और अंतर्निहित समय की इंटरओकुलर तुलना का उपयोग करें ताकि इंटरसेशन भिन्नता को कम करने और संवेदनशीलता को बढ़ाने में मदद मिल सके।

3. पैटर्न ERG (PERG) बकरी में

नोट: पिछले अध्ययन में, बकरियों में PERG सिग्नल का कोई इंटरओकुलर क्रॉसस्टॉक नहीं देखा गया था, इसलिए PERG प्रतिक्रियाओं को दोनों आंखों से एक साथ रिकॉर्ड किया जा सकता है।

  1. परीक्षा की तैयारी
    1. Xylazine (3 मिलीग्राम / किग्रा, आईएम) का उपयोग करके बकरी को एनेस्थेटिक करें, और एक परीक्षा की मेज पर रखें।
    2. बकरी की जीभ के नीचे एक तापमान सेंसर रखें।
    3. नाड़ी ऑक्सीमीटर को बकरी के कान के समीपस्थ छोर से जोड़ें।
    4. ब्लड प्रेशर कफ को जांघ से बांध लें।
    5. तदनुसार अंगों पर ईसीजी क्लिप क्लैंप.
    6. इलेक्ट्रोड प्रतिबाधा को कम करने के लिए, ललाट हड्डी पर एक निष्फल खोपड़ी पेंच रखें और एक मगरमच्छ क्लिप के साथ जमीन इलेक्ट्रोड से कनेक्ट करें।
    7. दोनों तरफ पार्श्व कैंथी के पीछे दो निष्फल सुई संदर्भ इलेक्ट्रोड को चमड़े के नीचे 1 सेमी रखें।
    8. bulbar conjunctiva को उजागर करने के लिए पलक speculum का उपयोग करें।
    9. कृत्रिम आंसू के सामयिक अनुप्रयोग के बाद द्विपक्षीय कॉर्निया के केंद्र में दो कीटाणुरहित ERG-Jet रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड रखें।
    10. 50 सेमी की देखने की दूरी के साथ दोनों आंखों के सामने दो 47.6 सेमी x 26.8 सेमी एलईडी मॉनिटर रखें।
    11. प्रत्येक मॉनिटर को एक ही तरफ पुतली विमान के समानांतर होने के लिए समायोजित करें और मॉनिटर के केंद्र को पुतली विमान में संरेखित करें।
    12. सुनिश्चित करें कि कंट्रास्ट-रिवर्सिंग चेकरबोर्ड (टेम्पोरल फ्रीक्वेंसी, 2.4 हर्ट्ज) दोनों मॉनिटर पर प्रदर्शित होता है और इसमें 4: 3 का अधिकतम पहलू अनुपात होता है, जो उपकरण सेटिंग्स द्वारा सेट किया जाता है।
    13. सुनिश्चित करें कि सफेद और काले चेकर्स के बीच कंट्रास्ट 96% रहता है, और औसत चमक 200 सीडी / एम 2 (कैंडेला प्रति वर्ग मीटर) है, जिसे ल्यूमिनेंस मीटर द्वारा जांचा जाता है।
      नोट: ISCEV के अनुसार, 40-60 cd/m2 की एक औसत फोटोपिक luminance की आवश्यकता होती है। चूहों के मॉडल का उपयोग करके एक अन्य अध्ययन में, पैटर्न 800 सीडी / एम 2, 18 के औसत चमक पर बना रहा। अपने सबसे संकीर्ण आयाम में कम से कम 15 डिग्री के क्षेत्र के आकार को मनुष्यों में एक मानक PERG परीक्षण के लिए आवश्यक है17। कॉर्नियल इलेक्ट्रोड की स्थिति को समायोजित करें यदि यह कॉर्नियल सतह के केंद्र में नहीं है।
  2. PERG रिकॉर्डिंग
    1. परिवेश प्रकाश मंद और इलेक्ट्रोड ऊतक संपर्क प्रतिबाधा की जांच करने के लिए प्रतिबाधा बटन दबाएँ. प्रतिबाधा के मूल्यों को प्रत्येक चैनल में दिखाया जाएगा।
    2. प्रतिबाधा परीक्षण विंडो में प्रतिबाधा के मानों की जाँच करें और सुनिश्चित करें कि प्रतिबाधा 10 kΩ से नीचे है। यदि नहीं, तो इलेक्ट्रोड को फिर से कनेक्ट करें या बदलें।
    3. प्रकाश उत्तेजना के बिना आधार रेखा शोर की जांच करने के लिए Oscillograph बटन दबाएँ।
      नोट: नाजुक ERG-Jet रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड की रक्षा करने के लिए ध्यान दें। PERG में बेसलाइन शोर आमतौर पर बकरी में FVEP की तुलना में छोटा होता है।
    4. 0.1, 0.3, 1.0, 3.0, और 12.6 चक्रों / डिग्री की स्थानिक आवृत्तियों पर एक साथ दोनों आंखों से PERG रिकॉर्डिंग शुरू करें। प्रत्येक स्थानिक आवृत्ति के लिए, एक रीडआउट उत्पन्न करने के लिए 64 निशान औसत किए जाते हैं।
    5. अंत में, एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में दृश्य उत्तेजना के बिना PERG रिकॉर्ड करने के लिए मॉनिटर बंद करें।
      नोट: PERG संकेत आमतौर पर स्थिर होते हैं और दोहराने की आवश्यकता नहीं होती है।
    6. सामने खोपड़ी पेंच निकालें और Idzoxan (1.5 मिलीग्राम / किग्रा) इंजेक्शन द्वारा बकरी जाग, जो एक xylazine विरोधी है.
    7. सामान्य संज्ञाहरण के बाद, संक्रमण को रोकने के लिए जेंटामाइसिन (4 मिलीग्राम / किग्रा आईएम) और सेफ्टिओफर सोडियम (2 मिलीग्राम / किलोग्राम आईएम) के साथ बकरी का इलाज करें।
  3. PERG माप और मात्रात्मक विश्लेषण
    1. बैंडपास फ़िल्टर को 1 से 75 हर्ट्ज तक सेट करें। 3.0 cpd PERG के लिए, बैंडपास फ़िल्टर को इसके आयाम को प्रभावित किए बिना ट्रेस को चिकना करने के लिए 1 से 50 हर्ट्ज तक सेट किया गया है।
    2. जैसा कि चित्रा 1 C में दिखाया गया है, तरंग में पहली सकारात्मक और नकारात्मक चोटियों को P1 (आमतौर पर लगभग 25 ms) और N1 (आमतौर पर लगभग 55 ms) के रूप में नामित किया जाता है। PERG आयाम N1 से P1 तक मापा जाता है।
    3. मोनोकुलर चोट के मामले में, हम आयाम और अंतर्निहित समय की इंटरओकुलर तुलना का उपयोग करते हैं ताकि इंटरसेशन भिन्नता को कम करने और संवेदनशीलता को कम करने में मदद मिल सके।

4. रीसस मकाक में PERG

नोट: यह स्पष्ट नहीं है कि रीसस मकाक में पीईजी सिग्नल का इंटरओकुलर क्रॉसस्टॉक है, इसलिए दोनों आंखों से पीईजी प्रतिक्रियाओं को अलग-अलग दर्ज किया जाता है।

  1. परीक्षा की तैयारी
    1. Zoletil50 (4-8 मिलीग्राम / किग्रा IM, tiletamine / zolazepam) और श्वासनली इंटुबैषेण के इंजेक्शन के बाद isoflurane (1.5% -2%) के साथ बंदर को एनेस्थेटिक करें।
    2. ललाट की हड्डी पर चमड़े के नीचे एक निष्फल जमीन इलेक्ट्रोड रखें। एक ही तरफ पार्श्व canthus के पीछे 1 सेमी चमड़े के नीचे एक निष्फल सुई संदर्भ इलेक्ट्रोड डालें।
    3. कृत्रिम आंसू के सामयिक आवेदन के बाद केंद्रीय कॉर्निया पर एक कीटाणुरहित ERG-Jet रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड रखें।
      नोट: कॉर्नियल इलेक्ट्रोड की स्थिति को समायोजित करें, यदि यह कॉर्नियल सतह के केंद्र में नहीं है।
    4. एक आंख को पैच करने के लिए चिपकने वाला अपारदर्शी काले टेप का उपयोग करें।
    5. 50 सेमी की देखने की दूरी पर एक मॉनिटर (47.6 x 26.8 सेमी) रखें।
    6. सुनिश्चित करें कि मॉनिटर को पुतली विमान के समानांतर होने के लिए समायोजित किया गया है। मॉनिटर के केंद्र को पुतली विमान में संरेखित करें।
    7. सुनिश्चित करें कि काले और सफेद चेकरबोर्ड 2.4 हर्ट्ज की आवृत्ति पर उलट रहा है, और पहलू अनुपात 4: 3 है, जो उपकरण सेटिंग्स द्वारा सेट किया गया है।
    8. सुनिश्चित करें कि सफेद और काले चेकर्स के बीच कंट्रास्ट 96% है, और औसत ल्यूमिनेंस 200 सीडी / एम 2 रहता है, जिसे ल्यूमिनेंस मीटर द्वारा जांचा जाता है।
  2. PERG रिकॉर्डिंग
    1. परिवेश प्रकाश मंद और इलेक्ट्रोड ऊतक संपर्क प्रतिबाधा की जाँच करें.
    2. सुनिश्चित करें कि प्रतिबाधा 10 kΩ से नीचे है। यदि नहीं, तो इलेक्ट्रोड को फिर से कनेक्ट करें या बदलें।
    3. प्रकाश उत्तेजना के बिना आधार रेखा शोर की जाँच करें।
    4. पैच एक आंख और 0.1, 0.3, 1.0, 3.0, और 12.6 चक्र / डिग्री की स्थानिक आवृत्तियों पर दूसरी आंख से PERG रिकॉर्डिंग शुरू लगातार.
    5. contralateral आंख के लिए चरण 4.2.1-4.2.4 दोहराएँ।
    6. बंदर को जगाने के लिए isoflurane आपूर्ति बंद करो.
    7. सामान्य संज्ञाहरण के बाद, संक्रमण को रोकने के लिए gentamicin (4mg / kg IM) और ceftiofur सोडियम (2 मिलीग्राम / किग्रा आईएम) के साथ बंदर का इलाज करें।
  3. PERG माप और मात्रात्मक विश्लेषण
    1. जैसा कि चित्रा 1 डी में दिखाया गया है, तरंग में पहली सकारात्मक और नकारात्मक चोटियों को पी 1 (आमतौर पर लगभग 40 एम) और एन 1 (आमतौर पर लगभग 85 एमएस) के रूप में नामित किया जाता है। PERG आयाम N1 से P1 तक मापा जाता है।
    2. मोनोकुलर चोट के मामले में, हम आयाम और अंतर्निहित समय की इंटरओकुलर तुलना का उपयोग करते हैं ताकि इंटरसेशन भिन्नता को कम करने और संवेदनशीलता को बढ़ाने में मदद मिल सके।

5. बकरी में OCT

  1. पशु तैयारी
    1. Xylazine (3mg / kg, IM) का उपयोग करके बकरी को एनेस्थेटिक करें, और फिर इंटुबेट करें।
    2. ट्रॉपिकमाइड (5%) और फेनिलेफ्रिन (5%) के साथ माइड्रियाटिक आईड्रॉप्स के सामयिक प्रशासन द्वारा पुतली को फैलाएं।
    3. पुतली को पूरी तरह से उजागर करने के लिए पलक स्पेकुलम का उपयोग करें।
    4. बकरी के सिर को ठोड़ी के आराम पर रखें।
      नोट: हालांकि गैस anesthetization प्रदर्शन नहीं किया जाता है, बकरी को नियमित रूप से ठोड़ी आराम से संकुचित होने से वायुमार्ग की रक्षा करने के लिए intubate।
  2. OCT इमेजिंग
    नोट: रेटिना OCT इमेजिंग इस अध्ययन में 870 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर OCT प्रणाली का उपयोग करके किया जाता है। OCT स्कैनर का ऑप्टिकल अक्षीय रिज़ॉल्यूशन 12 μm है। परिपत्र स्कैन मोड का उपयोग ऑप्टिक तंत्रिका सिर (ओएनएच) को उच्च-रिज़ॉल्यूशन मोड के साथ स्कैन करने के लिए किया जाता है। छवि की गुणवत्ता को अनुकूलित करने के लिए 100 फ्रेम औसत हैं। विस्तृत प्रशिक्षण मार्गदर्शिका ऑनलाइन उपलब्ध है ( सामग्री की तालिका देखें)।
    1. प्रारंभिक OCT स्कैनिंग (बेसलाइन परीक्षा)
      1. डिटेक्शन इंटरफ़ेस दर्ज करने के लिए प्रारंभ बटन पर क्लिक करें। लोड िंग समाप्त करने के लिए मशीन के लिए प्रतीक्षा करें, और उसके बाद इमेजिंग प्रारंभ करने के लिए पीला प्रारंभ बटन दबाएँ।
      2. अपने सिर की स्थिति को संशोधित करके confocal स्कैनिंग लेजर Ophthalmoscopy (cSLO) छवि में ONH केंद्र के लिए अवरक्त कैमरे के साथ बकरी को संरेखित करें।
      3. छवि की गुणवत्ता में सुधार करने के लिए पूरे अवरक्त छवि को समान रूप से रोशन करने के लिए जॉयस्टिक को समायोजित करें।
      4. जॉयस्टिक को तब तक आगे बढ़ाएं जब तक कि एक ईमानदार रेटिना ओसीटी छवि को सीधे स्क्रीन पर नहीं दिखाया जाता है।
      5. एक समान रूप से घने और क्षैतिज रूप से रखा रेटिना OCT छवि है जॉयस्टिक को संशोधित करें।
      6. छवि को स्वचालित रूप से पकड़ने के लिए जॉयस्टिक पर बटन दबाएं और छवि अधिग्रहण पूरा होने तक लाइव छवि स्क्रीन पर छवि की गुणवत्ता बनाए रखने के लिए जॉयस्टिक को पकड़ें। उसके बाद, दबाएँ प्राप्त करें.
      7. Idzoxan (1.5 मिलीग्राम / किग्रा) इंजेक्ट करके बकरी को जगाएं, जो एक xylazine विरोधी है।
        नोट:: आधार रेखा परीक्षा में ONH को केंद्रित करने से हमारे अनुभव के अनुसार बेसलाइन स्कैन और अनुवर्ती स्कैन को संरेखित करने में मदद मिलती है।
    2. अनुवर्ती OCT स्कैनिंग
      1. एक उच्च गुणवत्ता वाली प्रारंभिक OCT छवि का चयन करें; राइट-क्लिक करें और संदर्भ सेट करें का चयन करें।
      2. ऊपर उल्लिखित के रूप में OCT इमेजिंग शुरू करें।
      3. संदर्भ स्कैन के लिए वर्तमान स्कैन के स्वचालित मिलान की अनुमति देने के लिए फ़ॉलो-अप बटन दबाएँ.
      4. एक बार मिलान करने के बाद (परिपत्र स्कैन की अंगूठी हरी हो जाती है), स्वचालित रीयल-टाइम ट्रैकिंग को सक्रिय करने के लिए जॉयस्टिक पर बटन दबाएं।
      5. Idzoxan (1.5 मिलीग्राम / किग्रा) इंजेक्ट करके बकरी को जगाएं, जो एक xylazine विरोधी है।
        नोट:: मिलान की प्रक्रिया को सुविधाजनक बनाने के लिए, (1) ONH को तदनुसार सिर को घुमाकर लाइव विंडो में ले जाएँ या (2) वर्तमान cSLO छवि को आधार रेखा छवि के समान दिखाने के लिए सिर को झुकाकर लाइव विंडो में ONH घुमाएं। यह vestibulo-ओकुलर पलटा xylazine संज्ञाहरण 19 के तहत अच्छी तरह से काम करता है।
  3. OCT मापन
    1. माप विंडो दर्ज करने के लिए माप बटन पर क्लिक करें।
    2. इरेज़र टूल चुनें और RNFL लाइन को पोंछें, जो स्वचालित रूप से प्रोग्राम द्वारा लेबल किया जाता है।
    3. मैन्युअल रूप से आईपीएल और INL (चित्रा 2) के बीच की सीमा को रेखांकित करने के लिए लाइन आरेखण उपकरण चुनें।
      नोट: छह पेरिपैपिलरी क्षेत्रों (टी, टीएस, टीआई, एन, एनएस, एनआई) में जीसीसी मोटाई और ओएनएच (जी) के चारों ओर औसत जीसीसी मोटाई को स्क्रीन पर पढ़ा जा सकता है (चित्रा 2)। छात्र परीक्षण, एक तरफा एनोवा या दो-तरफ़ा एनोवा का उपयोग सामान्य वितरण के मामले में OCT डेटा को मापने के लिए किया जा सकता है।

6. रीसस मकाक में OCT

  1. रीसस मकाक में रेटिना ओसीटी इमेजिंग उसी उपकरण और प्रक्रिया का उपयोग करके करें जैसा कि बकरी के मामले में किया गया है।

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Representative Results

चित्रा 1A बकरी में FVEP के प्रतिनिधि परिणाम दिखाता है। यद्यपि एक ही फ्लैश तीव्रता में waveforms सापेक्ष समानता है, हम अभी भी दो बार waveforms की जांच करने की सलाह देते हैं। इलेक्ट्रॉनिक उपकरणों द्वारा उत्पन्न विद्युत चुम्बकीय तरंगें एकत्र किए गए विद्युत संकेतों में हस्तक्षेप करेंगी, जिसके परिणामस्वरूप उच्च आधार रेखा शोर और तरंग की खराब पुनरावृत्ति होगी। इसलिए, यह सुनिश्चित करने की सिफारिश की जाती है कि इस तरह के हस्तक्षेप से बचने के लिए इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल परीक्षा के दौरान आसपास के वातावरण में प्लग किए गए कोई अनावश्यक इलेक्ट्रॉनिक उपकरण नहीं हैं, और प्रयोगात्मक परिणामों की स्थिरता और पुनरावृत्ति को निर्धारित करने के लिए कम से कम दो मापों को दोहराने की सिफारिश की जाती है। जब दोनों आंखों को पैच करते हैं, तो तरंग दोनों आंखों पर पूरी तरह से सपाट होते हैं, जो दिखाता है कि तरंगें निश्चित रूप से हमारे फ्लैश उत्तेजना से उत्पन्न हो रही हैं। चित्रा 1B बकरी में PERG के प्रतिनिधि परिणामों को दर्शाता है। इसकी स्थिरता और उच्च संकेत के कारण, हम प्रत्येक स्थानिक आवृत्ति पर केवल एक बार माप द्वारा विश्वसनीय तरंग प्राप्त करते हैं। जैसे-जैसे स्थानिक आवृत्ति बढ़ती है, चेकरबोर्ड का आकार धीरे-धीरे बकरी की आंखों की पहचान से अधिक हो जाएगा। तो हम देख सकते हैं कि 12.7 सीपीडी पर, PVEP तरंग एक बहुत गिरा दिया है. FVEP के अनुरूप, तरंग गायब हो जाता है जब हम स्क्रीन बंद करते हैं। चित्रा 1C रीसस मकाक में PVEP के प्रतिनिधि परिणामों को दर्शाता है। हम प्रत्येक स्थानिक आवृत्ति पर दो बार माप को दोहराते हैं। जैसे-जैसे स्थानिक आवृत्ति बढ़ती है, आयाम कम हो जाएगा। यह इस तथ्य के कारण है कि स्थानिक आवृत्ति आंख की धारणा से अधिक है। चित्रा 1D रीसस मकाक में PERG के प्रतिनिधि परिणामों को दर्शाता है। स्थानिक आवृत्ति के साथ आयाम क्यों घटता है इसका कारण ऊपर वर्णित समान है। इन आंकड़ों का विश्लेषण करते समय, आप चोटियों और गर्तों के बीच आयाम या आंकड़ों के रूप में चोटियों या गर्तों के विलंबता समय का विश्लेषण करना चुन सकते हैं।

चित्र 2 बकरी में OCT के प्रतिनिधि परिणामों को दर्शाता है। सबसे बाईं ओर की छवि अवरक्त कैमरे द्वारा ली गई एक फंडस तस्वीर दिखाती है। दाईं ओर कसकर रेटिना का एक टोमोग्राम है, जो ओएनएच के चारों ओर रेटिना की समग्र मोटाई और प्रत्येक परत की मोटाई दिखाता है। जैसा कि चित्र में दिखाया गया है, हम स्पष्ट रूप से देख सकते हैं कि बकरियों में बंदरों की तुलना में बड़े रेटिना रक्त वाहिकाएं होती हैं। दूर दाईं ओर हरे रंग की डिस्क ओएनएच के चारों ओर जीसीसी की मोटाई का एक मात्रात्मक विश्लेषण है। G सामान्य के लिए खड़ा है, T अस्थायी पक्ष के लिए खड़ा है, N नाक पक्ष के लिए खड़ा है, S बेहतर के लिए खड़ा है, और मैं अवर के लिए खड़ा है। काला फ़ॉन्ट माइक्रोमीटर में जीसीसी मोटाई माप मूल्य का प्रतिनिधित्व करता है, और हरा मानव के लिए नैदानिक संदर्भ माप मूल्य है, इस प्रयोग के लिए संदर्भ के रूप में नहीं।

Figure 1
चित्रा 1: बकरी और रीसस मकाक में प्रतिनिधि इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल तरंग रूप। (ए) प्रतिनिधि एफवीईपी एक ही संवेदनाहारी सत्र के भीतर एक व्यक्तिगत बकरी से अलग-अलग प्रकाश तीव्रता पर तरंगों को दर्शाता है। (B,D) प्रतिनिधि PERG एक ही संवेदनाहारी सत्र के भीतर एक व्यक्तिगत बकरी (बी) या रीसस मकाक (डी) से विभिन्न स्थानिक आवृत्तियों पर waveforms. (सी) प्रतिनिधि PVEP एक ही संवेदनाहारी सत्र के भीतर एक व्यक्तिगत रीसस मकाक से विभिन्न स्थानिक आवृत्तियों पर waveforms. प्रोटोकॉल अनुभाग में प्रत्येक तरंग का विशिष्ट अंतर्निहित समय उल्लिखित है। प्रत्येक परीक्षण के लिए n = 1 विषय। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: OCT परिणाम. ऑप्टिक तंत्रिका सिर (बाएं पैनल) के चारों ओर प्रतिनिधि रेटिना ओसीटी छवियां और बकरी (ए) और रीसस मकाक (बी) में विभिन्न पेरिपैपिलरी क्षेत्रों (दाएं पैनल) में जीसीसी की मोटाई। प्रत्येक परीक्षण के लिए n = 1 विषय। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

इस अध्ययन में, हम बकरी और रीसस मकाक में VEP, PERG, और OCT का एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। विवो विधियों में ये विभिन्न ऑप्टिक न्यूरोपैथी के बड़े पशु मॉडल में लागू किए जा सकते हैं, जैसे कि ग्लूकोमा, इस्केमिक, या दर्दनाक ऑप्टिक न्यूरोपैथी और ऑप्टिक न्यूरिटिस 9।

PVEP FVEP17 की तुलना में अधिक स्थिर और संवेदनशील है; हालांकि, यह goat9 में प्राप्त नहीं किया जा सकता है। इस प्रकार, FVEP बकरी में किया जाता है और PVEP रेटिनो-जेनिकुलो-कॉर्टिकल मार्ग की अखंडता का मूल्यांकन करने के लिए हमारी प्रयोगशाला में रीसस मकाक में किया जाता है। अवलोकन के अंतर्निहित तंत्र कि PERG, लेकिन PVEP नहीं, बकरी में प्रेरित किया जा सकता है, अभी भी हमारे ज्ञान के अनुसार अस्पष्ट है। यह संभव है कि बकरी से ऑप्टिक तंत्रिका समारोह और संरचना मानव से अलग हो सकती है।

चूंकि FVEP का आयाम प्यूपिलरी आकार और परिवेश प्रकाश से प्रभावित हो सकता है, इसलिए हम पुतली को फैलाते हैं और FVEP रिकॉर्डिंग के दौरान बकरी के सिर पर एक काला कंबल रखते हैं। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि क्लिनिक 17 में एफवीईपी के लिए पुतली फैलाव की आवश्यकता नहीं है। इसी तरह, हालांकि क्लिनिकों में FVEP रिकॉर्डिंग के लिए अंधेरे अनुकूलन आवश्यक नहीं है, हमने पाया कि FVEP रिकॉर्डिंग से पहले परिवेश प्रकाश के लिए 5 मिनट का अनुकूलन आयाम में intrasession repeatability में वृद्धि कर सकता है।

PERG संकेत RGCs से उत्पन्न माना जाता है और इस प्रकार इसके आयाम का उपयोग RGCs13,20 के कार्य का अनुमान लगाने के लिए किया जा सकता है। कुछ विशेष फ्लैश ERG घटकों की तुलना में, जैसे कि स्कोटोपिक थ्रेशोल्ड रिस्पांस (एसटीआर) और फोटोपिक नकारात्मक प्रतिक्रिया (पीएचएनआर), PERG RGC dysfunction13 के प्रति अधिक संवेदनशील है। इस अध्ययन में PERG परीक्षण की संभावित सीमाएं इस प्रकार हैं। सबसे पहले, ISCEV मतलब luminance स्थिर रखने के लिए PERG रिकॉर्डिंग के लिए क्लासिक CRT (कैथोड रे ट्यूब) उत्तेजक का उपयोग करने की सिफारिश करता है। हालांकि, क्लासिक सीआरटी उत्तेजक तरल क्रिस्टल डिस्प्ले (एलसीडी) की तुलना में कम उपलब्ध है। यद्यपि एलसीडी की स्क्रीन आमतौर पर पैटर्न रिवर्सल के दौरान क्षणिक चमक परिवर्तन प्रस्तुत करती है, संभावित रूप से ल्यूमिनेंस आर्टिफैक्ट 17 का कारण बनती है, यह हमारी पिछली खोज के अनुसार बकरी में PERG के आयाम में योगदान नहीं करती थी: 12.6 सीपीडी की स्थानिक आवृत्ति पर PERG का आयाम आमतौर पर कम स्थानिक आवृत्तियों पर उन लोगों की तुलना में उपेक्षित होता है9 . एक और सीमा यह है कि हमने सादगी की खातिर PERG परीक्षण से पहले अपवर्तक त्रुटि को सही नहीं किया। इस सीमा को पूरा करने के लिए, बेसलाइन PERG आयाम को संदर्भ के रूप में दर्ज किया जाना चाहिए।

हमारे पिछले अध्ययन ने VEP और PERG9 के इंट्रा- और इंटर-सेशन भिन्नता का आकलन और अनुकूलन किया था। हमने पाया कि xylazine के साथ तुलना में, isoflurane अधिक repeatable FVEP लेकिन बकरियों में अधिक चर PERG waveforms में परिणामस्वरूप. इसलिए, हमने FVEP परीक्षण में isoflurane और PERG में xylazine और बकरियों में OCT परीक्षण का उपयोग किया। इसके अतिरिक्त, PERG के साथ तुलना में, VEP रिकॉर्डिंग संभावित रूप से अधिक चर है। इस प्रकार, हम नियमित रूप से प्रत्येक प्रकाश तीव्रता या स्थानिक आवृत्ति पर VEP रिकॉर्डिंग दोहराते हैं ताकि इंट्रासेशन भिन्नता की जांच की जा सके। इसके विपरीत, PERG waveforms बहुत अधिक स्थिर हैं। इसलिए, हम आम तौर पर PERG रिकॉर्डिंग को दोहराते नहीं हैं। यद्यपि एक ही विषय पर एक अलग दिन पर बार-बार रिकॉर्डिंग की सिफारिश की जाती है, हम नियमित रूप से सादगी और पशु नैतिकता के लिए एक अलग दिन पर एक ही विषय पर वीईपी या पीईजी रिकॉर्डिंग को दोहराते नहीं हैं। फिर भी, अंतर-सत्र दोहराव के बिना एफवीईपी और पीईजी रिकॉर्डिंग हमारे पिछले अध्ययन 9 के अनुसार ऑप्टिक तंत्रिका चोट का पता लगाने के लिए पर्याप्त संवेदनशील है।

रेटिना ओसीटी इमेजिंग रेटिना संरचना में गतिशील परिवर्तनों की अनुदैर्ध्य रूप से निगरानी और मात्रा निर्धारित करने के लिए एक सुविधाजनक, विश्वसनीय और गैर-आक्रामक तकनीक है। PERG और VEP के साथ तुलना में, OCT इमेजिंग में बहुत बेहतर इंटरसेशन repeatability9 है। इसके अलावा, ओसीटी इमेजिंग नमूना त्रुटि के बिना मिनटों के भीतर सभी ऑप्टिक तंत्रिका फाइबर को कैप्चर और मात्रा में माप सकती है, जो पारंपरिक हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण की तुलना में रेटिना संरचना की जांच करने के लिए बहुत सस्ता और प्रभावी अवसर प्रदान करती है। हालांकि, वर्तमान OCT इमेजिंग का स्थानिक रिज़ॉल्यूशन अभी भी व्यक्तिगत RGC सोमा या ऑप्टिक तंत्रिका फाइबर को बताने के लिए बहुत सीमित है। इसके अतिरिक्त, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि ओसीटी द्वारा मापा गया एक मोटा जीसीसी जरूरी नहीं है कि अधिक बरकरार आंतरिक रेटिना का मतलब है क्योंकि जीसीसी मोटा होना रेटिना एडिमा या रक्तस्राव के कारण हो सकता है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई संघर्ष नहीं है।

Acknowledgments

इस अध्ययन को निम्नलिखित अनुदानों द्वारा वित्त पोषित किया गया था: चीन के राष्ट्रीय प्रमुख आर एंड डी कार्यक्रम (2021YFA1101200); वेनझोउ की चिकित्सा अनुसंधान परियोजना (Y20170188), चीन के राष्ट्रीय प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2016YFC1101200); चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81770926;81800842); Zhejiang प्रांत के प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2018C03G2090634); और वेनझोउ आई हॉस्पिटल (YNZD1201902) के प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम। प्रायोजक या वित्त पोषण संगठन की इस शोध के डिजाइन या संचालन में कोई भूमिका नहीं थी।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
47.6 x 26.8 cm monitors DELL Inc. E2216HV The visual stimuli of contrast-reversal black-white checkerboards were displayed on screens
6.0 mm tracheal tube Henan Tuoren Medical Device Co., Ltd PVC 6.0 ensure the airway
alligator clip
atropine Guangdong Jieyang Longyang Animal pharmaceutical Co.,Ltd. reduce bronchial secretion and protect heart from vagal nerve activation
Carbomer Eye Gel Fabrik GmbH Subsidiary of Bausch & Lomb moisten the cornea and stabilize the recording electrodes
ERG-Jet recording electrodes Roland Consult Stasche&Finger GmbH 2300 La Chaux-De-Fonds ERG recording
eye speculum Shanghai Jinzhong Medical Device Co., Ltd ZYD020 open palpebral fissure
Heidelberg Spectralis OCT system Heidelberg Engineering OCT system
Imaging (https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf)
isoflurane RWD Life Science Co., Ltd R510-22 isoflurane anesthesia
male Saanen goats Caimu Livestock Company, country (Hangzhou, China) The male Saanen goats, aged from 4 to 6 months with weight of 19–23 kg
needle electrode Roland Consult Stasche&Finger GmbH U51-426-G-D use for FVEP ground electrode and PERG reference electrodes
periphery venous catheter intravenously BD shanghai Medical Device Co., Ltd 383019 intravenous access for atropine and propofol
propofol Xian Lipont Enterprise Union Management Co.,Ltd. induce Isoflurane anesthesia in goat
Tropicamide Phenylephrine Eye Drops SANTEN OY, Japan 5% tropicamide and 5% phenylephrine hydrochloride
visual electrophysiology device Gotec Co., Ltd GT-2008V-III use for FVEP & PERG
xylazine Huamu Animal Health Products Co., Ltd. xylazine anesthesia: intramuscular injection of xylazine 3mg/kg
zoletil50 Virbac induce Isoflurane anesthesia in monkey

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References

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तंत्रिका विज्ञान अंक 180
<em>Vivo में</em> बड़े जानवरों में रेटिना गैंग्लियन सेल और ऑप्टिक तंत्रिका समारोह और संरचना का आकलन करने के तरीके
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Ye, Q., Yu, Z., Xia, T., Lu, S., Sun, J., Li, M., Xia, Y., Zhang, S., Wu, W., Zhang, Y. In Vivo Methods to Assess Retinal Ganglion Cell and Optic Nerve Function and Structure in Large Animals. J. Vis. Exp. (180), e62879, doi:10.3791/62879 (2022).

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