É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Um modelo de roedor da operação Ross: Implantação de enxerto de artéria pulmonar sinténica em posição sistêmica

2.7K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/63179

⸱

1 de abril de 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Demonstramos como estabelecer um modelo murino de implantação de raízes pulmonares na aorta descendente para simular o procedimento ross. Este modelo permite a avaliação a médio/longo prazo da remodelação do autoenxerto pulmonar em posição sistêmica, representando a base do desenvolvimento de estratégias terapêuticas para promover sua adaptação.

Resumo

A operação Ross para doença da válvula aórtica recuperou novos interesses devido aos seus excelentes resultados a longo prazo. No entanto, quando empregada como substituição de raiz autônoma, descreve-se a possível dilatação do autoenxerto pulmonar e posterior regurgitação aórtica. Vários modelos animais foram propostos. No entanto, estes geralmente são limitados a modelos ex-vivo ou experimentos in vivo com modelos animais grandes relativamente caros. Neste estudo, buscou-se estabelecer um modelo de roedor de implantação de enxerto de artéria pulmonar (PAG) em posição sistêmica. Um total de 39 ratos adultos de Lewis foram incluídos. Imediatamente após a eutanásia, a raiz pulmonar foi colhida de um animal doador (n=17). Os ratos síndicos (n=17) e operados por farsa (n=5) foram sedados e ventilados. No grupo receptor, o PAG foi implantado com anastomose de ponta a ponta na posição aórtica abdominal infra-renal. Ratos operados por sham foram submetidos apenas à transeção e à re-anastomose da aorta. Os animais foram acompanhados com estudos de ultrassom em série por dois meses e análise histológica pós-morte. O diâmetro médio do PAG na posição nativa foi de 3,20 mm (IQR=3,18-3,23). No seguimento, o diâmetro médio do PAG foi de 4,03 mm (IQR=3,74-4,13) em 1 semana, 4,07 mm (IQR=3,80-4,28) em 1 mês e 4,27 mm (IQR=3,90-4,35) aos 2 meses (p<0,01). A velocidade sistólica máxima foi de 220,07 mm/s (IQR=210,43-246,41) em 1 semana, 430,88 mm/s (IQR=375,28-495,56) em 1 mês, e 373,68 mm/s (IQR=305,78-429,81) aos 2 meses (p=0,02) e não diferiram do grupo operado por farsa no final do experimento (p=0,5). A análise histológica não mostrou nenhum sinal de trombose endotelial. Este estudo mostrou que modelos de roedores podem permitir a avaliação da adaptação a longo prazo da raiz pulmonar a um sistema de alta pressão. Uma implantação sistênica de PAG sistênica representa uma plataforma simples e viável para o desenvolvimento e avaliação de novas técnicas cirúrgicas e terapias medicamentosas para melhorar ainda mais os resultados da operação Ross.

Introdução

A estenose da válvula aórtica congênita é um subgrupo de doença cardíaca congênita caracterizada por uma obstrução do trato ventricular esquerdo no qual a lesão está localizada no nível valvular. A malformação afeta aproximadamente 0,04-0,38 por 1000 nascidos vivos1.

As opções disponíveis para a correção são muitas, cada uma com suas próprias vantagens e desvantagens. Para pacientes adequados para correção biventricular2, a abordagem pode ser direcionada para reparação da válvula (valvulotomia percutânea ou cirúrgica) ou sua substituição3. Esta última é a preferida quan....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Atenção Animal da Universidade de Padova (OPBA, protocolo n° 55/2017) e autorizados pelo Ministério da Saúde italiano (Autorização n° 700/2018-PR), em cumprimento à Diretiva da União Europeia 2010/63/UE e à Lei Italiana 26/2014 para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.

1. Cuidados com animais e modelo experimental

  1. Certifique-se de que todos os ratos de Lewis sejam obtidos de uma única empresa (Tabela de materiais). Mantenha os ratos em instalações convencionais com livre acesso a comida e água.
  2. Certifique-se de que o peso dos ra....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

Um total de 39 ratos adultos de Lewis foram incluídos neste estudo: 17 animais foram usados como doadores de PAG, 17 animais como receptores e 5 como operados por farsa (grupo controle) (Tabela 1). Os ratos do sexo masculino foram 22 (56%) e as do sexo feminino 17 (44%); estes últimos foram utilizados apenas no grupo de doadores.

Nenhum evento fatal ocorreu durante a operação com 100% de sobrevivência. Durante o acompanhamento, dois animais do grupo transplantado tiveram desfe.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

A substituição da válvula aórtica com a raiz pulmonar autóloga (operação Ross) representa uma opção atraente para o reparo da estenose da válvula aórtica congênita devido ao perfil favorável e ao crescimento potencial do autoenxerto10. A maior limitação para este procedimento é a dilatação potencial da neorre válvula aórtica, que predispõe ao desenvolvimento da regurgitação a longo prazo. A possibilidade de caracterizar as modificações na artéria pulmonar após a exposição a pressões sistêmicas pod.......

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

O estudo foi financiado pelo orçamento integrado para pesquisa interdepartamental (BIRD) 2019.

....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Cloreto de sódio a 0,9%Monico SpAAIC 030805105Dois frascos de 100 mL. O frio (4° C) para a lavagem do órgão de colheita; O Quente (39° C) para umedecimento e reidratação do receptor
7,5% de iodopovidonaB BraunAIC 032151211
BarraquerAesculapFD 232RPorta-microagulhas reto para as anastomoses vasculares
Porta-agulhas CastroviejoNão disponívelJ 4065Para fechar o animal
Pinça de aplicação de clipeRudolf MedicalRU 3994-05Para aplicação de clipe
CotonetesJohnson & amp Johnson Medical SpAN/AProduto de supermercado.
Pinça de microjoalheiro curvadaRudolf MedicalRU 4240-06Usado para passar suturas por baixo dos vasos.
Creme depilatórioRB healthcareN/AProduto de supermercado
Máquina de eletrocautérioLED SpASurton 200
Tesoura finaRudolf MedicalRU 2422-11Para abrir o abdômen (receptor)
Micro tesoura Vannas curva de ponta finaAesculapOC 497RApenas para preparar a raiz pulmonar, corte os vasos lombares e o Prolene
10/0Unidade de limpeza de isoflurano / halotano FluovacHarvard Apparatus LtdK 017041Completo de máquina de anestesia, tubo de anestesia, câmara de indução e unidade de limpeza com filtro absorvível
GentamycinMSD ItaliaSrl AIC 020891014Antibiótico. Dose única, 5 mg / kg intramuscular, administrada durante a cirurgia
HeparinPharmatex Italia SrlAIC 034692044500 UI na veia cava abdominal receptora
Cateter IVSmiths Medical Ltd4036Seringa de insulina 20G
, 1 mLFisher Scientific14-841-33Para injetar heparina no animal de colheita e lavar a aorta seccionada no receptor
Pinça bipolar de joalheiroGIMA SpA30665ponta de 0,25 mm. Para eletrocautério de vasos muito pequenos
Ratos Lewis (LEW/HanHsd)Envigo RMS SRL, San Pietro al Natisone, Udine, Itália86104MMacho ou fêmea, pesando 200-250 g (animais que colhem raízes pulmonares) e 320-400 g (receptores)
Micro-MosquitoRudolf MedicalRU 3121-10Em número de quatro, com pontas cobertas com tubos de silicone. Para manter em tração a sutura de Prolene durante a anastomose
Microscópio cirúrgicoLeica MicrosystemsM 400-EUsado com ampliações intercambiáveis de 6x, 10x e 16x no procedimento
Perma-Hand silk 2-0Johnson & Johnson Medical SpAC026DPara levantar a aorta
Pomada oftálmica PetrolatumDechraNDC 17033-211-38
Prolene 10-0Johnson & Johnson Medical SpAW2790Sutura não absorvível muito fina, com uma agulha de corpo redondo BV75-3, para as anastomoses vasculares
RetractoresNão qualquerN/ADois retractores caseiros
Micro fórceps de ponta de anelRudolf MedicalRU 4079-14Para manipulação delicada
SevofluraneAbbVie SrlAIC 031841036Misturado com oxigénio, para anestesia
inalatóriaMicrotesoura tipo molaRudolf MedicalRU 2380-14Reta; 14 cm de comprimento
Clipes padrão para aneurismaRudolf MedicalRU 3980-12Dois clipes (7,5 mm; 180 g; 1,77 N) para fechar a aorta
Gaze estéril de material não tecidoLuigi Salvadori SpA26161V7,5x7,5 cm, quatro camadas
Tesoura reta DoyenRudolf MedicalRU/1428-16Para uso no doador
Pinça de microjoalheiro retaRudolf MedicalRU 4240-0410,5 cm de comprimento. Utilizado em toda a anastomose
SeringasArtsana SpAN/A20 mL (para o animal de colheita) e 5 mL (para o receptor). Para lavagem e imersão salina
TiCron 4-0CovidienCV-331Para fechar músculos e pele
Fórceps de tecido V. MuellerMcKessonCH 6950-009Usado para pele e músculos
TramadolSALF SpAAIC 044718029Analgésico. Dose única, 5 mg / kg intramuscular
Virgin silk 8-0Johnson & amp Johnson Medical SpAW818para ligadura de ramo arterial
esterilizada

Referências

  1. Botto, L. D., Correa, A., Erickson, J. D. Racial and temporal variations in the prevalence of heart defects. Pediatrics. 107 (3), 32(2001).
  2. Vergnat, M., et al. Aortic stenosis of the neonate: A single-center experience. The Journal of Thor....

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Explorar mais artigos

Modelo Ross em RoedoresImplante de Enxerto SingênicoDoença Valvar AórticaAnastomose Termo-TerminalAorta AbdominalUltrassom SeriadoAnálise HistológicaAutoenxerto PulmonarDilatação do Enxerto