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Artigo de método

Uma técnica cirúrgica modificada para transplante de rim em camundongos

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DOI:

10.3791/63434

22 de julho de 2022

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este protocolo apresenta uma nova técnica cirúrgica de transplante de rim de camundongos com foco em uma estratégia de anastomose arterial modificada. Uma técnica de sutura vascular, incluindo um método simples e mais seguro de anastomose ureter-bexiga também é apresentada. Essas modificações reduzem o tempo de operação e melhoram a taxa de sucesso do procedimento de transplante renal do camundongo.

Resumo

O transplante de rim em camundongos é um procedimento cirúrgico complicado e desafiador. Há muito poucas publicações demonstrando os principais passos desta operação. Por isso, este artigo introduz a técnica e aponta as ressalvas cirúrgicas associadas a esta operação. Além disso, modificações importantes em relação ao procedimento convencional são demonstradas. Em primeiro lugar, um pedaço da aorta abdominal é cortado e preparado para que as bifurcações proximais da artéria renal, incluindo a artéria ureteral sejam transectadas juntamente com o rim doador em bloco. Isso reduz o risco de necrose ureter e evita o desenvolvimento de uma oclusão do trato urinário. Em segundo lugar, demonstra-se um novo método de anastomose vascular que permite ao operador aumentar ou diminuir flexívelmente o tamanho da anastomose após a reinfusão do transplante renal. Isso evita o desenvolvimento de restrições de vasos e sangramento intraabdominal. Em terceiro lugar, é mostrada uma técnica que possibilite a anastomose do delicado doador e da bexiga receptora que não causa um trauma. A adoção deste protocolo pode reduzir o tempo de operação e reduzir os danos à bexiga do receptor, aumentando significativamente a taxa de sucesso da operação para os camundongos receptores.

Introdução

Desde que Sakowitz et al. desenvolveram modelos de transplante de rim em 1973 pela primeira vez1, provou-se como uma importante ferramenta experimental para estudar os mecanismos de lesão isquêmica de transplante e rejeição aoimune, bem como para o desenvolvimento de novos tratamentos destinados a prolongar a sobrevivência do aléxico e possivelmente para alcançar a tolerância imunológica. No entanto, a técnica cirúrgica tem se mostrado complexa e muito exigente, às vezes tendo complicações como restrições anastomóticas vasculares que levam à insuficiência pré-renal não imunológica2, falha pós-renal causada por isquemia e....

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Protocolo

Todos os experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes da diretiva 2010/63/UE do Parlamento Europeu sobre proteção de animais usados para fins científicos (Cartão de ética animal: Baixo Ministério da Proteção e Segurança de Drogas da Saxônia, nº 33.9-42502-04-11/0492). Realizar procedimentos utilizando instrumentos cirúrgicos e consumíveis estéreis (autoclaved) e tentar manter a área de operação o mais estéril possível.

NOTA: Os camundongos machos C57BL/6J serviram como doadores e receptores (modelo de transplante sintérico), enquanto os camundongos Balb/c serviram como receptores de aoenxerto renal (modelo para estud....

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Resultados

Quatro semanas após o transplante, tanto a técnica modificada quanto a técnica convencional apresentaram sinais moderados de atrofia tubular renal14,15 quando comparada aos rins contralaterais receptores nativos (Figura 1). O grau de atrofia dos túbulos renais não demonstrou diferença significativa entre as duas técnicas diferentes. A coloração tricrática de Masson Goldner 14,15

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Discussão

Embora o modelo de transplante de pele em camundongos seja simples e fácil de realizar para estudar eventos de rejeição aoimune, as técnicas cirúrgicas para investigar mais especificamente as alterações inflamatórias relacionadas ao aoimune após o coração16 e o transplante de rim10 tem se mostrado complexo e muito exigente. Do ponto de vista do nefrologista transplantado, o estabelecimento de um modelo de transplante renal de camundongos estável eficaz e de longo prazo aind.......

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Agradecimentos

Agradecemos à equipe do Dr. Tiantian Bai pela ajuda com a voz, Srta. Mian Pao por sua ajuda na ilustração médica. Este trabalho foi apoiado em parte pela Fundação Alemã de Pesquisa (DFG) para promover colaborações internacionais (HO2581/4-1 para AH) e pela Fundação Nacional de Ciência da China (NSFC; #81760291 para a FJ).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
30G-agulhasBraun456300-acepromazina
CP PharmaTranquisolP-Bepanthen
pomada para os olhosHaus-ApothekePZN01578675-Bonn
Micro FórcepsFST11083-07-Caixa
para dispositivo de isolamento e fornecimento de oxigênioRUSKINNINVIV-C57BL
/6J  camundongosRio Charles. Alemanhasem númerode catálogo-Carprofeno
ZoetisRimadyl 50 mg/ml-CATETER-FEP
26GTERUMOSurflo-W-Clip
Aplicador Pinça EstiloFST18057-14-Pinça
CurvaWPI14114-G-Cutasept
desinfecção da peleVWRBODL980365-
DesidratadorDIAPATHDonatello-caneta
eletrocirúrgicaBovieCHANGE-A-TIP-Embedding
máquinaWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-P5-Etanol
Sinopharm Group Chemical Reagent Co.LtD100092683-Frozen
plataformaWuhan Junjie Electronics Co., LtdJB-L5-almofadasde
gaze, cotonetesLohmann-Rauscher13353-Lâmina
de vidroServicebioG6004-HE
conjunto de solução de coranteServicebioG1003-Tapete
de aquecimentoTHERMO MAT PRO 30WHTP-30-esponja
hemostáticaCuraSponJ1276A-solução
de heparinaHaus-ApothekePZN 03029820-
caixa de geloPETZNão há número de catálogo disponível-
Sistema de imagemNikonNikon DS-U3-
Dispositivo de anestesia por inalaçãoGROPPLERBKGM 0616-
isofluranoCP PharmaIsofluran CP 1 ml / ml-cetamina
Zoetissem número de catálogo-
conjuntode solução de corante MassonServicebioG1006-metamizole
WDTsem catálogonumer-Micro
tesouraFST15000-00,15000-10-Micro
Serrefine ( Clamp ) Angular / 16 mmFST18055-06-Microscópio
LeicaLEICAMZ6-Microscópio
lightSCHOTTKL2500LED-Neutral
gumSCRC10004160-Forno
Tianjin Laibo Rui Instrument Equipment Co., LtdGFL-230-Pathology
fatiadorShanghai Leica Instrument Co., LtdRM2016-Solução
salina (NaCl 0,9%)Haus-ApothekePZN06178437-tesoura
Peha Instruments991083/4-Slides
Servicebio-
pequena placa de PetriSarstedt8,33,900-pinça
retaWPI14113-G-fita
cirúrgicaBSN4120-Pinça
de amarração de sutura - 10 cmFST18025-10-Suturas
(10-0)MedtronicN2540-Suturas
(4-0)ETHILONV4940H-
Suturas(7-0)ETILON1647H-Seringa
(0,3 mL)BD
324826-Seringa (1 mL)BD320801-Espalhador de
tecidoZhejiang Kehua Instrument Co., LtdKD-P-Microscópio
óptico verticalNikonNikon Eclipse E100-xilazina
BayerRompun-
Reagente químico Co. LtD do grupode Xylene10023418-
Sinopharm

Referências

  1. Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplantation Proceedings. 5 (1), 721-725 (1973).
  2. Jiang, K., et al.

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Reimpressões e permissões

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