A encefalomielite autoimune experimental é um dos modelos murinos de esclerose múltipla mais utilizados. No protocolo atual, camundongos C57BL/6J de ambos os sexos são imunizados com peptídeo glicoproteico oligodendrócito de mielina, resultando principalmente em paresia ascendente da cauda e membros. Aqui discutimos o protocolo de indução e avaliação da EAE.
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Artigo de método
Modelagem da Esclerose Múltipla em Dois Sexos: Encefalomielite Autoimune Experimental Induzida por MOG35-55
Neste artigo
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Resumo
Resumo
A esclerose múltipla (EM) é uma doença inflamatória crônica autoimune que afeta o sistema nervoso central (SNC). Caracteriza-se por diferentes prevalências entre os sexos, acometendo mais mulheres do que homens, e desfechos diferentes, mostrando formas mais agressivas em homens do que em mulheres. Além disso, a EM é altamente heterogênea em termos de aspectos clínicos, radiológicos e patológicos. Assim, faz-se necessário o aproveitamento de modelos experimentais animais que permitam a investigação do maior número possível de aspectos da patologia. A encefalomielite autoimune experimental (EAE) representa um dos modelos de EM mais utilizados em camundongos, modelando diferentes características da doença, desde a ativação do sistema imune até danos ao SNC. Descrevemos aqui um protocolo para a indução de EAE em camundongos C57BL/6J machos e fêmeas usando imunização com o peptídeo glicoproteico 35-55 de oligodendrócitos de mielina (MOG35-55), que leva ao desenvolvimento de uma forma crônica da doença. Relatamos também a avaliação do escore clínico diário e do desempenho motor desses camundongos durante 28 dias pós-imunização (28 dpi). Finalmente, ilustramos algumas análises histológicas básicas em nível do SNC, enfocando a medula espinhal como o sítio primário de dano induzido pela doença.
Introdução
A esclerose múltipla (EM) é uma doença inflamatória crônica autoimune que afeta o sistema nervoso central (SNC). Mostra a presença de infiltração perivascular de células inflamatórias, desmielinização, perda axonal e gliose1. Sua etiologia permanece desconhecida e seus aspectos clínicos, radiográficos e patológicos sugerem notável heterogeneidade nadoença2.
Devido à sua etiologia e complexidade desconhecidas, até o momento, nenhum modelo animal recapitula todas as características clínicas e radiológicas apresentadas na EM humana 3,4. N....
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Protocolo
Os cuidados e manejo dos animais no presente trabalho foram realizados de acordo com a Diretiva do Conselho da União Europeia de 22de setembro de 2010 (2010/63/UE); todos os procedimentos relatados no presente estudo foram aprovados pelo Ministério da Saúde italiano (407/2018-PR) e pelo Comitê de Ética da Universidade de Torino (Projeto n° 360384). Sugerimos adequar o desenho experimental às diretrizes ARRIVE originalmente publicadas por Kilkenny et al., em 201020. Antes de começar, certifique-se de que os materiais necessários estão disponíveis (consulte a Tabela de Materiais). Esterilizar todos os utensílios e vidr....
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Resultados
Acompanhamento das EAE após a imunização
Isso foi avaliado conforme descrito a seguir.
Peso corporal e ingestão alimentar
A análise de variância (ANOVA) two-way (sexo e tempo como variáveis independentes) mostra uma diminuição no PN dos animais EAE de ambos os sexos, especialmente na segunda semana pós-indução (F(1,57) = 4,952, p < 0,001; Figura 2A). No entanto, o dimorfismo sexual no PN é sem.......
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Discussão
O protocolo de EAE induzido por MOG35-55 que descrevemos levou ao desenvolvimento de uma forma crônica de EM em camundongos C57BL/6J7,8,13. Nesses resultados representativos, relatamos que os animais de ambos os sexos submetidos ao procedimento de imunização desenvolveram uma forma crônica da doença (ou seja, não se recuperam totalmente após o início da doença, acumulam déficits e mantêm um EC de pelo menos 1,5 na fas.......
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Divulgações
Nenhum dos autores tem conflitos de interesse a declarar com relação à pesquisa, autoria e/ou publicação deste artigo.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo Ministero dell'Istruzione, dell'Università e della Ricerca - MIUR projeto Dipartimenti di Eccellenza 2018-2022 e 2023-2027 para o Departamento de Neurociência Rita Levi Montalcini; Fundação Cavalieri-Ottolenghi, Orbassano, Itália. BB foi fellow do INFRA-P, Região do Piemonte (n.378-35) (2022-2023) e PRIN 2020-20203AMKTW. Agradecemos à Fondazione per la Ricerca Biomedica Onlus (FORB) pelo apoio. As taxas de publicação foram apoiadas pela doação do Distretto Rotaract 2031 e, particularmente, do Rotaract Club Torino Nord-Est. Agradecemos a Elaine Miller pela revisão de nosso manuscrito.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 18 G x 1 ½ “ Agulha de 1,2 x 40 mm para a seringa de vidro | Terumo | TER-HYP-18G-112-PIN | |
| Câmera digital conectada ao microscópio óptico | digital NIKON DS-U1 | ||
| Balança eletrônica de precisão | Merck | Mod. Kern-440-47N, resolução 0,1 g | |
| Eosin Y | Sigma-Aldrich | HT110216 | |
| pipeta de seringa de vidro " ultra asept" Sistema Sacco de 10 ml | |||
| Vidraria (ou seja, becker para preparar a emulsão) | VWR | 213-1170, 213-1172 | |
| Hematoxilina (Mayer' s) | Filtro Sigma-Aldrich | MHS32 | antes de usá-lo. |
| Software de análise de imagem | Fiji | ||
| Incompleto Freund' s adjuvante (IFA) | Sigma-Aldrich | F5506 | Store em +4 °C. |
| Isoflurano | Wellona Pharma | Este medicamento é usado como anestésico inalatório. | |
| Camundongos C57BL/6J machos e fêmeas | Jackson Laboratory, Envigo | Idade 8-10 semanas, peso corporal ideal de ~20 g. | |
| Micrótomo | Leica HistoCore BIOCUT R | ||
| Meio de Montagem | Mouse Rotarod 107961 | ||
| Ugo Basile | #47600 | ||
| Mycobacterium tuberculosis (MT), cepa H37Ra | Difco Laboratories Inc. | 231141 | Armazene a +4 °C. |
| Peptídeo de glicoproteína de oligodendrócitos de mielina 35-55 (MOG35-55) | Espikem | EPK1 | Armazenar a -80 ° C diluído (2 mg/mL) em solução fisiológica; Prepare-o no dia da imunização para evitar, tanto quanto possível, alterações ou contaminações. |
| Microscópio óptico | NIKON eclipse 90i | ||
| Paraformaldeído (PFA) | Sigma-Aldrich | 158127 | Armazenar em +4 ° C uma vez diluído (4%) em tampão fosfato. |
| Toxina da coqueluche (PT) | Duotech | PT.181 | Loja a -80° C diluído (concentração 5 µ g/mL) em solução fisiológica |
| Solução fisiológica (solução de cloreto de sódio a 0,9%) | B. Eurospital | A 032182038 | Conservar a +4 &°; C uma vez aberto. |
| Tampão fosfato salino (PBS) | Thermo Scientific | J61196. | |
| para aquisição de imagens | NIS-Element AR 2.10 | ||
| Seringas U-100 0,5 mL com 30 G x 5/16" (0,30 x 8 mm) em agulha fixa | Seringas Nipro | SYMS-0.5U100-3008B-EC | |
| U-100 1 mL com 26G x ½ ” (0,45 x 12,7 mm) na agulha | PIC | 20,71,26,03,00,354 | |
| Pomada veterinária para os olhos | Lacrilube, Lacrigel Europhta | ||
| Xylazine | Rompun | Esta mistura de drogas é usada como anestésico injetável e sedativo. | |
| Zolazepam e Tiletamina | Zoletil 100 | Este medicamento é usado como anestésico injetável, sedativo, relaxante muscular e analgésico |
Referências
- Thompson, A. J., Baranzini, S. E., Geurts, J., Hemmer, B., Ciccarelli, O. Multiple sclerosis. Lancet. 391 (10130), 1622-1636 (2018).
- Gold, S. M., Willing, A., Leypoldt, F., Paul, F., Friese, M. A. Sex differences in autoimmune disorders of the central nervous system. Semin immunopathol. 41 (2), 177-....
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Reimpressões e permissões
Errata
Formal Correction: Erratum: Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis
Posted by JoVE Editors on 2/16/2024. Citeable Link.
An erratum was issued for: Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. The Authors section was updated. An additional affiliation (School of Pharmacy, Pharmacology Unit, University of Camerino) was added for author Antonino Casile.
