Avaliação da Função Ventricular Direita em Modelos Experimentais de Hipertensão Arterial Pulmonar

Summary

A apresentação de métodos detalhados para a avaliação da função do ventrículo direito aumentará a qualidade e a confiabilidade da pesquisa sobre hipertensão pulmonar, oferecendo uma estrutura robusta para estudos futuros e aumentando a reprodutibilidade em diferentes laboratórios.

Abstract

A hipertensão pulmonar (HP) é uma condição crônica associada à redução da sobrevida, tornando-se uma área crítica de pesquisa. Modelos experimentais de HP melhoraram significativamente nossa compreensão de sua fisiopatologia e facilitaram o desenho de pequenos ensaios observacionais e clínicos. No entanto, é crucial estabelecer metodologias padronizadas para garantir a comparabilidade entre diferentes estudos experimentais e grupos de pesquisa. A padronização não apenas aumenta a reprodutibilidade, mas também promove a colaboração entre as equipes de pesquisa.

Neste vídeo, descrevemos as etapas metodológicas necessárias para analisar os parâmetros funcionais da HP com precisão. Isso inclui avaliação ecocardiográfica, punção invasiva do ventrículo direito (VD) e cálculo do índice de Fulton. Em relação à ecocardiografia, a medida do tempo de aceleração arterial pulmonar e da razão do tempo de ejeção pulmonar, bem como o cálculo do débito do VD, são apresentados em detalhes. Em relação às medidas invasivas, são descritos procedimentos essenciais, incluindo protocolos de anestesia, posicionamento ideal do animal, configuração da ventilação mecânica, abertura precisa da parede torácica, visualização do VD e técnicas de punção do VD.

A metodologia para dissecção ventricular (índice de Fulton) é explicada detalhadamente, assim como o cálculo da relação VD/ventrículo esquerdo mais septo, corrigido para o peso corporal do animal. Acreditamos que fornecer uma apresentação detalhada desses métodos aumentará a qualidade e a confiabilidade da pesquisa em HP, oferecendo uma estrutura robusta para estudos futuros e aumentando a reprodutibilidade em diferentes laboratórios.

Introduction

A mensuração funcional adequada da função do ventrículo direito (VD) em pequenos animais tornou-se essencial desde o aumento de estudos utilizando modelos animais em ciências respiratórias e cardiovasculares. Existem vários modelos animais de hipertensão pulmonar (HP), usando monocrotalina¹, hipóxia² ou Sugen + hipóxia³. Eles serviram bem para desvendar novas vias fisiopatológicas ^1,4 e estudar novos tratamentos farmacológicos^{potenciais 5} e não farmacológicos⁶ para HP. No entanto, apesar do a....

Protocol

O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais (CEUA) da Universidade Federal do Rio de Janeiro sob o número de processo 043/22. Todos os procedimentos obedeceram aos Princípios de Cuidados com Animais de Laboratório e ao Guia da Academia Nacional de Ciências dos EUA para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. O estudo seguiu as diretrizes do ARRIVE¹¹.

1. Preparação animal e protocolo experimental

1. Calcule o número de animais conforme relatado anteriormente¹².
   NOTA: Levando em consideração que as diferenças no RVSP entre CTRL e HAP ....

Results

Para as análises estatísticas, cada variável foi testada quanto à normalidade e variância por meio do teste de Shapiro-Wilk. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão. O teste t não pareado foi utilizado para comparar as concentrações de partículas nos grupos controle (CTRL) e hipertensão arterial pulmonar (HAP) (p<0,05).

Alterações ecocardiográficas em modelo animal de HAP
A Figura 4 mostra que a relação PAT/PET foi men.......

Discussion

A HAP é uma doença progressiva caracterizada por remodelamento vascular excessivo, que promove aumento da resistência vascular pulmonar, resultando em aumento da pós-carga do^VD14. Assim, o RVSP representa uma variável funcional que se correlaciona diretamente com a gravidade da^HAP15. Com o tempo, a resposta adaptativa do VD é hipertrofia concêntrica compensatória (medida pelo índice de Fulton)¹⁶ e dilatação ventricul.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagentes
Álcool 70%	Montenegro	ALC70-001
Gel condutor	Mercor	CG-002
Solução salina (NaCl 0,9%)	BioPharma	SAL-009
Instrumentos
19 G conjunto	de veias do couro cabeludoDescarpack	SVS-19G
Pinça Kelly Curva	ABC instrumentos cirurgicos	CKF-003
Pinça Kelly	ABC instrumentos cirurgicos	KF-004
Agulhas (18, 22 e 26 G)	Descarpack	NDL-MIX
Placa de Petri	GlassLab	PD-150
Lâmina de barbear	ABC instrumentos cirurgicos	RB-005
Bisturi	ABC instrumentos cirurgicos	SC-006
Tesoura	ABC instrumentos cirurgicos	SCIS-007
Linha de sutura	ABC instrumentos cirurgicos	SUT-008
Seringas (1, 3 e 5 mL)	Descarpack	SYR-135
Cânula de traqueostomia	MedTech	TC-010
Pinça	ABC instrumentos cirurgicos	TWZ-011
Drugs
Dextroketamine hydrochloride 5%	Cristá lia	DXT-005	87,5 mg/kg intraperitoneal
Isoflurano 1 mL/mL 240 mL	Cristá lia	ISO-240	2,5% solução para inalação
Cloridrato de lidocaína 1%	Crist á lia	LID-001	400 µ L subcutâneo localmente
Monocrotalina	Sigma-Aldrich	C2401	60 mg/kg
brometo de pancurônio intraperitoneal 2 mg/mL	Cristá lia	PAN-002	2 mg/kg heparina sódica intravenosa
5000 UI/mL	Cristá lia	HEP-5000	diluído 1:4 em 1 mL
Cloridrato de xilazina 2%	Syntec	XYL-002	12,5 mg/kg intraperitoneal
Equipment
GraphPad Prism 9	GraphPad Software, Inc	GP9
Monitor veterinário multiparamétrico em rede LifeWindow 9x	Digicare Animal Health	LW9x
Software LabView	National Instruments, Corp.	Software LV-2019
MATLAB R2019a (Versão)	The MathWorks, Inc.	MATLAB-2019
Monitor e transdutor de sinal	MedTech	MST-015
Balança de precisão	Sartorius	PS-020
R540 Mouses& Máquina de Anestesia para Animais de Rato	RWD Life Schience Co.,LTD	R540-ANA
Scale	Ohaus	SCL-025
Servo-i ventilador mecânico	Getinge AB	SERVO-I	FiO2 = 21%; volume corrente = 8 ml/kg, frequência respiratória = 70 bpm e PEEP = 3 cmH2O
SonoView software	SONOTEC Ultraschallsensorik Halle GmbH	SV-2020
UGEO HM70A system	Samsung Eletrô nica da Amazô nia LTDA	HM70A
G*Power 3.1.9.7	Universidade de Dü sseldorf, Alemanha	gpower