Artigo de método

Aplicação combinada do coloide de enxofre tecnécio-99m e do corante azul para detecção de linfonodos sentinela em câncer de mama em estágio inicial

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DOI:

10.3791/69027

19 de dezembro de 2025

Neste artigo

Resumo

Este artigo descreve em detalhes o protocolo de mapeamento do linfonodo sentinela (SLN) com aplicação combinada de coloide de enxofre tecnécio-99m (99mTc-SC) e azul de metileno, incluindo a preparação do 99mTc-SC, injeção de fármacos, aquisição e reconstrução de imagem, mapeamento do azul de metileno e localização intraoperatória de SLNs.

Resumo

A biópsia do linfonodo sentinela (SLNB) é o procedimento padrão para o estadiamento dos linfonodos axilares em pacientes com câncer de mama, e sua aplicação tem evitado a dissecção desnecessária dos linfonodos axilares (ALND) em câncer de mama em estágio inicial nas últimas décadas. A localização precisa dos linfonodos sentinela (SLNs) ajuda a melhorar a taxa de sucesso da SLNB. A técnica de traçador duplo (radiocoloide mais corante azul) para mapeamento SLN melhora significativamente a taxa de identificação em comparação com os métodos de traçador único. O radiocoloide mais amplamente adotado é o 99mTc-SC, e o azul de metileno é amplamente utilizado em mapeamento visual. No entanto, estudos anteriores descobriram que a taxa de identificação da imagem SLN varia significativamente, o que pode estar intimamente relacionado ao processo de preparação e à experiência do operador. A padronização do protocolo de mapeamento SLN é crucial para maximizar a taxa de identificação e minimizar resultados falsos negativos. Este artigo fornece um processo detalhado usando 99mTc-SC combinado com azul de metileno para mapeamento SLN em câncer de mama em estágio inicial, incluindo procedimentos para preparação de 99mTc-SC, injeção, aquisição de imagens SLN, mapeamento de azul de metileno e localização intraoperatória.

Introdução

No câncer de mama em estágio inicial, apenas uma minoria dos casos apresenta metástase dos linfonodos axilares. Para esses pacientes, a dissecção dos linfonodos axilares (ALND) não oferece benefícios adicionais de sobrevivência e pode levar a complicações graves, como linfedema dos membrossuperiores 1,2. O linfonodo sentinela (SLN) é definido como o linfonodo "primeira estação" que recebe drenagem linfática do tumormamário 3. Se o SLN não mostrar metástase, a probabilidade de metástase nos linfonodos a jusante é extremamentebaixa, 4. De acordo com as diretrizes de 2021 intituladas Manejo da Axila em Estágio Inicial de Câncer de Mama: Ontario Health (Cancer Care Ontario) e a DiretrizASCO 1, pacientes com resultados negativos da biópsia do linfonodo sentinela (SLNB) podem ser poupadas da ALND, enquanto aquelas com 1-2 SLNs metastáticos podem evitar a ALND sob condições específicas. Estudos demonstraram que a SLNB poupa aproximadamente 70% das pacientes em estágio inicial de câncer de mama deALND desnecessária 5,6,7. Portanto, a detecção de SLN desempenha um papel crucial na determinação da necessidade da ALND, melhorando significativamente a qualidade de vidapós-operatória 1.

Diferentes estudos exploraram biópsias linfânicas guiadas por ultrassom para determinar metástase linfonodal em pacientes com câncer de mama, mas esse método apresenta uma alta taxa de falsos negativos (FNR) de 6,4% a 40,8%. Além disso, exigir a presença de um ultrassonista experiente durante a operação apresenta desafios significativos para a implementação clínica em larga escala. Uma variedade de traçadores está disponível para mapeamento SLN em câncer de mama8, 9, 10, corantes radiocoloides e/ou azul, fluoresceína, verde de indocianina (ICG) e injeção de cloridrato de mitoxantrona. Tausch et al. relataram uma taxa de identificação (IR) de 82% apenas com corante azul, 85% apenas com radiocoloide e 94% quando foram usados traçadores duplos (radiocoloide mais corante azul) 11. Uma meta-análise de 13 estudos revelou RI comparável para radiocoloide (96%) e corante azul (96%), enquanto a combinação alcançou 97%12. A administração combinada de traçadores reduz significativamente as taxas de falsos negativos (FNR), com abordagens apenas com radiocoloides apresentando FNRs de 16%-20,3% contra 5,2%-10,8% para o traçador duplo 13,14,15,16,17. A fluoresceína não é inferior à 99mTc-SC e é mais econômica. No entanto, sua fraca penetração nos tecidos limita sua aplicação na detecção de SLNsmais profundas 18. O ICG demonstra eficácia diagnóstica comparável ao 99mTc-SC, tornando-o particularmente adequado para instituições que não possuem recursos de medicinanuclear 19,20. No entanto, sua eficácia é baixa em pacientes com IMC > 30 ou tumores localizadoscentralmente 21. Alguns estudos confirmaram que o desempenho diagnóstico da injeção de cloridrato de mitoxantrônica é semelhante ao de 99mTc-SC para o mapeamentoSLN 8,10. No entanto, o número limitado de estudos exige validação clínica adicional.

Embora existam muitos agentes de imagem disponíveis para detectar SLNs nas últimas décadas, as diretrizes ainda recomendam a combinação de radiocoloide e corante azul para localização de SLN no câncer de mama, devido à sua alta eficácia diagnóstica, suporte médico baseado em evidências substancial e reações adversas gravesmínimas 1,20,22. Agentes alternativos são a fluoresceína ou ICG sem apoio de um departamento de medicina nuclear. 99mTc-SC é o radiocoloide mais comumente utilizado. Comparado a outros corantes azulados, o azul de metileno é mais comumente usado na maioria dos centros daÁsia 23, pois demonstra eficácia semelhante à localização de SLN ao azul de issulfano ou azul patenteado, mas é mais econômico.

A RI relatada de SLN com apenas radiocoloide ou corante azul difere significativamente (de 69,8% a 90,8%) entre os estudos e depende fortemente dos protocolos procedimentais e da experiência dooperador 9,12,13,24. Portanto, procedimentos operacionais padronizados são cruciais para garantir a consistência da IR. Atualmente, vários protocolos diferentes estão disponíveis, o que complica os esforços de padronização. A primeira é o tempo de aquecimento durante a preparação do Tc-SC de 99m. Estudos mostraram que o aquecimento reduzido de 3 minutos pode melhorar a eficiência de síntese de Tc-SC 25 de 99m. 99mO Tc-SC preparado por aquecimento reduzido de 3 minutos tinha pureza radioquímica (RCP) comparável ao aquecimento padrão de 5 minutos (ambos >92%) em 0 h e 6h 26. Além disso, 99mTc-SC com 3 minutos de aquecimento apresentou maior retenção linfântica às 24h27. Portanto, consideramos que o protocolo de aquecimento de 3 minutos é superior. Segundo, injeções periareolares e peritumorais são recomendadas para administração de Tc-SC em 99m. Estudos demonstram que a injeção periareolar teve uma RI mais alta para a SLN axilar em comparação com a injeção peritumoral (99,3% vs. 91,1%, P < 0,001)28. A técnica periareolar é tecnicamente mais simples e apresenta vantagens particulares para tumores ou lesões não palpáveis no quadrante externo superior, principalmente ao prevenir o fenômeno do "brilho atravessado" 29. Além disso, a injeção periareolar cobre naturalmente a drenagem linfática de todos os quadrantes mamários, potencialmente reduzindo a taxa de detecção falhada de SLNs e sendo particularmente benéfica em tumoresmultifocais 30,31. Por isso, consideramos a injeção periareolar mais vantajosa.

Neste artigo, adotamos um protocolo de traçador duplo de Tc-SC pré-operatório 99m(injeção periareolar) combinado com azul de metileno intraoperatório (injeção periareolar). 99mO Tc-SC foi preparado usando um protocolo de aquecimento reduzido de 3 minutos.

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Protocolo

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Aprovação de Pesquisa Clínica do Primeiro Hospital Afiliado, Faculdade de Medicina da Universidade de Zhejiang [2025B] Aprovação Ética do IIT nº 0125. O consentimento informado por escrito foi obtido de todos os sujeitos. Todo o procedimento de síntese deve ser realizado dentro de uma exaustão. O painel de vidro de chumbo do capuz oferece proteção contra radiação, enquanto seu design de fluxo de ar de pressão negativa impede a dispersão de aerossóis radioativos ou voláteis, evitando assim a inalação pelo pessoal. Descarte frascos, seringas e agulhas em um recipiente de resíduos radioativos de 99mTc, de acordo com as regulamentações relevantes. Outros materiais devem ser tratados como resíduos médicos comuns. Manter a proteção contra radiação e a privacidade do paciente durante todo o processo.

1. Seleção de pacientes

NOTA: De acordo com as diretrizes de 2021 intituladas Manejo da Axila em Câncer de Mama em Estágio Inicial: Ontario Health (Cancer Care Ontario) e as Diretrizes ASCO, pacientes com câncer de mama em estágio inicial que necessitam de localização SLN são identificadas pelocirurgião 1. O mapeamento SLN de 99mTc-SC foi realizado entre 3 e 18 horas antes da cirurgia.

  1. Defina os seguintes critérios de inclusão: (1) Câncer de mama em estágio inicial com linfonodos axilares clínicos (ALNs) negativos (cN0). cN0 é definido como resultados negativos em exame clínico e exame de imagem, ou ALN foi patologicamente negativo por biópsia guiada por ultrassom com agulha. (2) ALN negativo após terapia neoadjuvante em pacientes com cN0. (3) Metastase de ALN confirmada por biópsia em pacientes com cN1, e clinicamente negativa após terapia neoadjuvante.
  2. Defina os seguintes critérios de exclusão: (1) Câncer inflamatório de mama. (2) Pacientes com AL metastático confirmado por biópsia sem terapia neoadjuvante. (3) Pacientes com metástase positiva de ALN e ainda positivos após a terapia neoadjuvante.

2. Preparação do 99mTc-SC

  1. Preparativos necessários antes da rotulagem do 99mTc-SC
    1. Faça a pré-venda do kit do profármaco composto por três frascos: Frasco A contendo 2,0 mL de ácido clorídrico (HCl) 0,15 mol/L; Frasco B contendo 2,0 mL de uma solução tampão composta por 49,2 mg de fosfato de dihidrogênio de sódio (NaH 2PO4) e 15,8 mg de hidróxido de sódio (NaOH); Frasco C, um produto liofilizado contendo um pó branco solúvel em água composto por 2,0 mg de tiosulfato de sódio (Na2S2O3), 2,3 mg de edetato dissódico (Na2EDTA) e 18,1 mg de gelatina. Guarde o kit em uma geladeira de 4 °C.
    2. Descongelando o kit: Remova-o 1 h antes da preparação do medicamento para atingir a temperatura ambiente.
    3. Pedido de tecnécio-99m no dia da imagem: Certifique-se de que a injeção de tecnécio-99m seja eluída por um gerador Mo-Tc em até 24 horas e esteja livre de agentes oxidantes.
    4. Preparação do banho-maria: Encha o banho-maria com água suficiente e aqueça-o a 100 °C, mantendo o estado de ebulição.
      NOTA: O pertecnetato de sódio ordenado [99mTc] requer atividade suficiente para compensar a perda de síntese, e recomenda-se uma atividade de 185 MBq por paciente, com volume total de 0,5-1 mL. Ao preparar para múltiplos pacientes, a dose total de 99mTc deve ser aumentada de acordo com o número de pacientes, com volume total não superior a 1 mL e concentração radioativa não superior a 18,5 GBq/mL.
  2. Processo de rotulagem
    1. Prepare a injeção de 99mTc-SC em condições de proteção contra radiação, normalmente em uma exaustão de fumo. Em condições assépticas, injete a injeção de pertecnetato de sódio [99mTc] no Frasco C. Agite bem para dissolver o pó liofilizado e deixe-o repousar por 5 minutos.
      NOTA: Realize todas as operações sob condições assépticas e desinfete antes de cada retirada da solução. Se os swabs desinfetantes estiverem contaminados com radionuclídeos, descarte-os como resíduos radioativos. Certifique-se de que o ar seja expelido rigorosamente ao injetar 99mTc nos frascos do kit. Mantenha pressão negativa nos frascos até a etapa final da retirada da solução.
    2. Retire 1,5 mL de solução do frasco A e injete-o no frasco de reação. Misture bem e deixe descansar por mais 5 minutos para obter a mistura D.
    3. Banho-maria fervente: Coloque o frasco contendo a mistura D no banho-maria e aqueça por 3 minutos (Figura 1A).
      NOTA: O tempo de aquecimento não deve exceder 3 minutos, pois o aquecimento prolongado pode reduzir significativamente a porcentagem de partículas < 0,2 μm 99mTc-SC 25,26,27. Use pinças para manusear os frascos após ferver e evitar queimaduras.
    4. Prepare a mistura E: Retire o frasco contendo a mistura D e deixe esfriar por 2 a 5 minutos. Depois, retire 1,5 mL de solução do Frasco B e injete-o no frasco contendo a mistura D. Misture cuidadosamente para obter a mistura E. Use uma seringa de 5 mL para extrair toda a mistura E.
    5. Filtração: Conecte um filtro dedicado à seringa. Coloque a agulha e insira-a em um frasco de vácuo. Filtrar lentamente a mistura E sem aplicar pressão para obter a solução de 99mTc-SC (Figura 1B).
  3. Preparação da injeção final:
    1. Use uma seringa de 2 mL para extrair a solução de 99mde Tc-SC. Certifique-se de que cada paciente receba de 37 a 55,5 MBq em um volume total de 0,4 a 1,0 mL, preferencialmente próximo de 0,1 mL por local para minimizar o desconforto causado pela injeção. Após extrair a solução, substitua a agulha por uma agulha de calibre 4,5 (26 G) para administração.
      NOTA: Uma dose total injetada de 37 MBq é geralmente considerada suficientepara 32.

3. Controle de qualidade do 99mTc-SC

NOTA: Uma pequena alíquota do radiofármaco é aspirada em uma seringa para testes de controle de qualidade antes do uso.

  1. Propriedades fisicoquímicas
    1. Confirme que o injetado preparado é uma suspensão coloidal estabilizada com gelatina, estéril e livre de pirógeno, adequada para administração intravenosa. De acordo com os requisitos da Farmacopeia dos Estados Unidos (USP)33, certifique-se de que o pH varie entre 4,5 e 7,5.
      NOTA: O valor de pH do 99mTc-SC sintetizado neste estudo foi de ~6,0.
  2. Pureza radioquímica (RCP)
    1. Realize a determinação da pureza radioquímica (RCP) de amostras de 0 h e 6 h tanto dos protocolos de aquecimento de 3 min quanto de 5 min, de acordo com os requisitos daUSP 33.
      1. Retire 0,1 mL de injeção de Tc-SC 99mde 3 minutos de aquecimento e 5 minutos de aquecimento a 0 h e 6 h após a preparação, e depois dilua adequadamente (aproximadamente 1:10).
      2. Coloque as injeções diluídas usando um tubo capilar de 10 μL sobre uma tira de papel cromatográfico (25 mm × 300 mm), em um ponto aproximadamente 20 mm de uma das extremidades, e então deixe secar.
      3. Utilizando metanol de 85% como fase móvel, desenvolva o cromatograma pela técnica de cromatografia ascendente durante um período adequado e seco.
      4. Determine a distribuição radioativa no cromatograma escaneando com um scanner radioativo. Calcule o RCP usando a fórmula: RCP = 100% - (% pertecnetato livre).
        NOTA: Um valor de RCP superior a 92% foi considerado aceitável (Figura 2). Se o RCP for inferior a 92% ou qualquer outro parâmetro de controle de qualidade não cumprir os padrões, a injeção deve ser repreparada incondicionalmente e submetida a testes de requalificação até que todas as especificações sejam atendidas.

4. Preparação e administração do paciente de 99mTc-SC

  1. Confirme a identidade da paciente, número do prontuário médico, diagnóstico e localização pré-operatória do tumor de mama (normalmente marcada pelo cirurgião).
  2. Informe o paciente sobre o procedimento de mapeamento do linfonodo sentinela (SLN), incluindo possível dor pela injeção, locais de injeção e cronograma de imagem.
  3. Meça a dose radioativa de 99mde Tc-SC antes da injeção em cada paciente (Figura 3A) para garantir uma dose razoável, de modo a obter excelente imagem e o mínimo possível de danos causados por radiação ao paciente. Garantir que cada paciente receba uma dose total injetada de 37 MBq em um volume total de 0,4 mL32. Desinfete a pele com swabs iodados, depois administre Tc-SC 99mpor injeção subcutânea na região periareolar (posições 3, 6, 9 e 12 horas) da mama afetada (Figura 3B).
  4. Aplique pressão no local da injeção com um cotonete estéril por 5 minutos. Após a hemostasia, instrua a paciente a realizar uma massagem suave nos seios para melhorar o drenagem linfática e aguarde na área de espera para as imagenssubsequentes 32.
    NOTA: Durante a injeção de 99mTc-SC, use escudos de chumbo para reduzir a exposição à radiação.

5. Aquisição e reconstrução de imagens

  1. Para aquisição de imagem32, inicie a imagem ~30 minutos após a injeção (geralmente entre 20 e 40 minutos) com SPECT/CT.
    1. Peça ao paciente que adote uma posição de decúbito deitado e lateral (lado injetado adjacente ao detector), com os braços abduzidos e as mãos posicionadas próximas à cabeça.
    2. Use os seguintes parâmetros de imagem plana: modo H, colimador de alta resolução de baixa energia (LEHR), fotopico de 140 keV com janela de ±10%, matriz 256 × 256, ZOOM 1,0, contagens de 300K, campo de visão que vai da região supraclavicular até o diafragma.
    3. Realize a imagem por fusão Tomo imediatamente se as SLNs forem visualizadas em imagens planares. Se não, realize imagens 1 h após a injeção usando os seguintes parâmetros de imagem por fusão Tomo: colimador LEHR, fotopico de 140 keV, janela ±10%, matriz 128 × 128, ZOOM 1.0, 60 projeções (intervalos de 6°, 16 s/frame). Parâmetros CT: 120 kV, 150 mA, espessura de corte de 2,5 mm.
  2. Para reconstrução de imagens, processe imagens em uma estação de trabalho para gerar conjuntos de dados SPECT/CT planares e fundidos. Localize SLNs em imagens fundidas e meça dimensões de eixo longo dos nós.
  3. Se as SLNs não forem visualizadas na imagem Tc-SC de 99m, primeiro descarte os fatorescorrigíveis 32.
    1. Reconfirme com a equipe de enfermagem que a injeção foi administrada subcutâneamente na região periareolar e não profundamente no tecido glandular (se incorreto, injetar novamente o 99mTc-SC).
    2. Verifique se há alguma compressão local no local da injeção, que pode prejudicar o drenagem linfática. Se presente, libere a compressão imediatamente e instrua as pacientes a massajarem suavemente a mama para promover o fluxo linfático.
    3. Em alguns pacientes com drenagem linfática lenta, estenda o tempo de imagem para 2 horas e, se for negativo, realize uma imagem pré-operatória adicional 2 horas antes da cirurgia, dentro de 24 horas após ainjeção 34,35. Se a SLN continuar negativa após esses passos, use azul demetileno 36.

6. Mapeamento intraoperatório de azul de metileno e identificação de SLN

  1. No dia da cirurgia (dentro de 24 horas após a administração da radiofarmacêutica): injete 1 mL de azul de metileno no tecido subcutâneo na posição periareolar20,29 horas das 3,6,9,12 horas.
  2. Após 10-15 minutos, trace canais linfáticos tingidos de azul para localizar SLNs.
  3. Confirme as SLNs usando um Sistema de Detecção Gama (sinal positivo: o nó mais quente e quaisquer outros nós quentes com mais de 10% da contagem do nó mais quente).
  4. Extrair SLNs para análise de seções congeladas e garantir que o manejo cirúrgico final seja guiado pelos resultados patológicos da SLN.
    NOTA: Se o método de traçador duplo não conseguir localizar SLNs, um terceiro traçador, como o ICG, pode ser tentado. No entanto, na maioria dos casos, a causa da falha de imagem pode ser fatores como metástase linfática, obstrução linfática ou interrupção da drenagem linfática devido a cirurgiasanteriores 14,37. Portanto, métodos adicionais de rastreamento SLN ainda podem falhar. Consequentemente, na maioria dos casos, as diretrizes atuais recomendam prosseguir com um ALND20,38; a responsabilidade final por essa decisão cirúrgica recai sobre o cirurgião cirúrgico.

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Resultados

Sintetizamos com sucesso 99mTc-SC com RCP > 92%, a curva da RCP é mostrada na Figura 2. Obtivemos mapeamento SLN de alta qualidade do 99mTc-SC para detectar SLNs em pacientes com câncer de mama em estágio inicial (Figura 4). O mapeamento do azul de metileno foi útil para a rápida localização das SLNs durante a operação (Figura 5). As SLNs foram finalmente identificadas por um d...

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Discussão

Neste estudo, o uso combinado de Tc-SC 99mpré-operatório e azul de metileno intraoperatório alcançou uma taxa de identificação de SLN de 99,8%, enquanto sozinho radiocoloide demonstrou uma taxa igualmente alta de 99,1%. Assim, os cirurgiões podem alcançar uma taxa de detecção de SLN quase ótima usando apenas radiocoloide. No entanto, nos casos em que o mapeamento radiocoloide falhou, o azul de metileno ajudou na detecção de SLN, o que está alinhado com estudos anteriores de ma...

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Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse a revelar.

Agradecimentos

Esse trabalho foi financiado pela Fundação de Ciências Naturais de Zhejiang (bolsa nº LTGY23H180014); Programa de Ciência e Tecnologia Médica e da Saúde de Zhejiang (bolsa nº 2023KY694).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
0,9% de soro fisiológicoChina Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.24a75B3Solução de diluição
Filtro de Seringa AcrodiscPALLPN46120,2 & mu; Membrana de Supor
Artigo sobre cromatografiaCytiva09927854Para análise de pureza radioquímica
ExaustãoQingdao Qingdun Medical Technology Co., Ltd.20150710Proteção radiológica na síntese de fármacos
Capilar de Mancha de VidroSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.20250510Amostre a injeção para análise de pureza radioquímica
Escudo de chumboSuzhou Hengkang Medical Devices Co., Ltd5mm PbProteção radiológica na injeção
Luvas de borracha descartáveis para esterilização médicaSri Trang Gloves (Tailândia) Sociedade Pública Limitada & nbsp;F840Protege as mãos da contaminação.
MetanolHuzhou Shuanglin Chemical Technology Co., Ltd.20251021Para análise de pureza radioquímica
Azul de MetilenoJumpcan Pharmaceutical Co., Ltd.240812Mapeamento intraoperatório de Azul de Metileno e identificação de SLN
Scanner de camada fina radioativa TLC MiniGitaSepate Technology Co., Ltd.TLC para pureza radioquímica
  agulhaJiangsu Kangbao Medical Equipment Co., Ltd.20240722Bitola 4,5 (26 G)
Sistema de Detecção Gama de Neosondas (GDS)Mammotome2331609Detecção intraoperatória de linfonodos sentinela  
Prova de PHSinopharm Chemical Regent  Co.,LtD72002361Intervalo: 1-14
SPECT/CTGE SaúdeDiscovery NM/CT 670Aquisição de Imagem
  seringaZhejiang Longde Pharmaceutical Co., Ltd. 202404004, 2024120141 mL, 5 mL
Tecnécio-99MBeijing Atom High-Tech Co., Ltd.241020-111  Deve ser eludido de um gerador Mo-Tc em até 24 horas, e deve estar livre de agentes oxidantes.
Frasco ABeijing Shihong Pharmaceutical Co., Ltd.2410202,0 mL de 0,15 mol/L de ácido clorídrico (HCl)
Frasco BBeijing Shihong Pharmaceutical Co., Ltd.2410202,0 mL de uma solução tampão composta por 49,2 mg de dihidrogênio fosfato de sódio (NaH2PO4) e 15,8 mg de hidróxido de sódio (NaOH).
Frasco CBeijing Shihong Pharmaceutical Co., Ltd.241020Produto liofilizado contendo um pó branco solúvel em água composto por 2,0 mg de tiosulfato de sódio (Na2S2O3), 2,3 mg de edetato dissódico (Na2EDTA) e 18,1 mg de gelatina
Estação de trabalho XelerisGE SaúdeSoftware de imagemImagens de processo para gerar conjuntos de dados SPECT/CT planares e fundidos, localizar SLNs & nbsp;

Referências

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