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Artigo de método

Um modelo cirúrgico translacional suíno para formação de aderências intraabdominais pós-operatórias

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DOI:

10.3791/70377

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13 de março de 2026

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1Department of Surgery, Stanford University School of Medicine, 2Hagey Laboratory for Pediatric Regenerative Medicine, Division of Plastic and Reconstructive Surgery, Stanford University School of Medicine, 3Department of Bioengineering, Stanford University, 4Department of Material Science and Engineering, Stanford University, 5Sarafan ChEM-H, Stanford University, 6Department of Pediatrics (Endocrinology), Stanford University School of Medicine, 7Woods Institute for the Environment, Stanford University

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve um modelo suíno de formação de aderências intraabdominais pós-operatórias usando mini suínos de Yucatán submetidos a cirurgia abdominal aberta com resseção intestinal. A abordagem induz aderências intra-abdominais de forma confiável e oferece uma plataforma para avaliar o desenvolvimento das aderências e testar estratégias antiaderência.

Resumo

Um modelo suíno da formação de aderências intraabdominais pós-operatórias foi estabelecido usando mini suínos de Yucatán. O protocolo combina laparotomia da linha média, resseção do intestino delgado com anastomose primária em duas camadas e abrasão peritoneal parietal unilateral no formato de procedimento cirúrgico abdominal aberto. A formação da aderência foi avaliada quatro semanas após a cirurgia, utilizando critérios de pontuação grossa e histológica estabelecidos, com avaliações realizadas por observadores cegos. As aderências se desenvolveram em todos os animais que usavam esse modelo e eram multifocais, envolvendo laços intestinais, entre a parede intestinal e abdominal, envolvendo o peritônio sobre outros órgãos do abdômen (por exemplo, o fígado) e locais operatórios, com gravidade variável. A análise histológica às quatro semanas demonstrou aderências compostas predominantemente por matriz extracelular, fibroblastos e vasos sanguíneos, consistentes com um fenótipo de tecido cicatritzando feridas em fase de remodelação. Esse modelo é relevante para o estudo da biologia da fibrose da adesão abdominal e/ou para a avaliação translacional de terapêuticas antiaderentes candidatas. Ao integrar um procedimento cirúrgico intestinal clinicamente relevante com uma lesão peritoneal definida e uma estratégia padronizada de avaliação, esse protocolo oferece uma abordagem reprodutível para induzir e avaliar aderências intraabdominais pós-operatórias em um modelo animal grande.

Introdução

Aderências pós-operatórias são uma fonte importante de morbidade após cirurgias abdominais e pélvicas, desenvolvendo-se em até 93% dospacientes 1,2, com aproximadamente 20% exigindo hospitalização dentro de cinco anos por complicações relacionadas àaderência 3,4. A lesão peritoneal surge de procedimentos cirúrgicos abdominais, bem como irritação intraabdominal (infecção ou exposição a produtos químicos) ou condições inflamatórias crônicas, como doença inflamatória intestinal. As aderências resultantes podem levar a uma ampla gama de consequências clínicas, incluindo obstruções intestinais recorrentes que às vezes exigem cirurgias adicionais, ou causar infertilidade e dorcrônica 5,6,7. A formação de aderências pode ser particularmente severa após ressecções multiviscerais para malignidade, como cirurgias citoredutivas, inflamação crônica ou perfuração intestinal, onde lesão peritoneal extensa amplifica a resposta fibrótica. Além disso, a doença adesiva pode complicar significativamente intervenções cirúrgicas subsequentes, muitas vezes tornando impossível a realização de uma abordagem minimamente invasiva ou causando lesão iatrogênica inadvertida no intestino ou em outros órgãos.

Apesar de sua importância clínica, o desenvolvimento de estratégias antiaderência eficazes é limitado – provavelmente dificultado em parte por limitações em modelos pré-clínicos que recapitulam a anatomia, fisiologia e respostas de cicatrização observadas emhumanos 8. Modelos de roedores são amplamente utilizados devido à sua disponibilidade, tratabilidade experimental e geração confiávelde aderência 9,10,11. No entanto, sua pequena cavidade peritoneal, mesentério fino e ambientes inflamatórios distintos podem limitar a relevânciatranslacional 8,12. Tais modelos contribuíram para o desenvolvimento de abordagens antiaderência que demonstraram eficácia robusta em estudos com animais, mas demonstraram benefício clínico limitado ou dependente do contexto emhumanos 8,13,14,15,16,17. Além disso, procedimentos cirúrgicos comparáveis a humanos, como resseção intestinal e anastomose, são difíceis de modelar de forma translacional relevante em roedores, e diferenças específicas de espécie no metabolismo dos fármacos limitam ainda mais a extrapolaçãoclínica 18.

Modelos animais grandes, especialmente suínos, são amplamente utilizados para estudar processos abdominais devido à sua semelhança anatômica e fisiológica com humanos e seu manuseio cirúrgico comparável, fornecendo uma plataforma para estudar tanto a formação de aderências quanto para testar intervenções terapêuticas 19,20,21,22. Modelos existentes de aderência suína forneceram insights importantes, mas muitos focam na formação de aderências específicas para procedimentos e frequentemente carecem de procedimentos padronizados, limitando sua aplicabilidade, especialmente a aderências severas que surgem após cirurgia intestinalaberta 23,24,25,26,27.

Para abordar essas limitações, desenvolvemos um modelo suíno de aderências intraabdominais pós-operatórias que integra laparotomia da linha média, resseção do intestino delgado e uma abrasão peritoneal parietal unilateral. Essa estratégia peritoneal multifocal recapitula insultos que promovem aderências comumente encontrados em cirurgias abdominais e produz aderências de diferentes intensidades e localizações no período de quatro semanas, com aderências garantidas na lateral do abdômen, onde é realizada abrasão parietal direcionada, bem como aderências estocásticas em todo o abdômen. Ao incorporar um procedimento cirúrgico intestinal clinicamente relevante com uma lesão peritoneal definida e reprodutível, esse modelo supera limitações importantes dos sistemas suínos anteriores e oferece uma plataforma consistente para estudar a formação pós-operatória de aderências e avaliar intervenções antiaderências.

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Protocolo

Declaração de Ética

Todos os estudos suínos foram conduzidos sob protocolos aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais da Universidade de Stanford (IACUC) protocolo #34052, conforme descritoanteriormente 28.

1. Pecuária

  1. Adquira mini porquinhos de Yucatán (recomendados de 9 a 12 kg, de 7 a 9 semanas de idade) de um fornecedor verificado. Recomendamos n = 4 porcos por coorte. Animais domésticos em casais, em ambientes com controle de luz e temperatura.
  2. Ofereça o tradicional chow porcino ad libitum. Os animais devem ter acesso a um suprimento contínuo de água para evitar a desidratação.
  3. Monitorar e registrar o peso corporal e a saúde geral em intervalos regulares, conforme os padrões institucionais.

2. Anestesia e Preparação Pré-Operatória

  1. Porcos sedados em seus terrários domésticos usando xilazina e cetamina intramusculares. Transporte cuidadosamente os animais para a sala cirúrgica assim que a sedação for considerada adequada pelo veterinário.
  2. Uma vez na sala cirúrgica, proteja as vias aéreas do animal por meio de intubação endotraqueal. Mantenha a anestesia durante todo o procedimento com isoflurano sob supervisão de um veterinário licenciado.
  3. Administrar fluidos intravenosos, medicamentos vasoconstritores e inotrópios conforme necessário para tratar a hipotensão intraoperatória, evitando hipoperfusão intestinal e causando risco potencial de vazamento anastomótico.
  4. Aplique pomada oftálmica para lubrificar os olhos e prevenir abrasões na córnea. Administre cefazolina ou antibiótico equivalente 1 hora antes da incisão para prevenir infecção da ferida.

3. Procedimento Cirúrgico

  1. Posicione o animal em deitado em uma bolsa térmica para manter a normotermia. Meça a saturação de oxigênio (SpO 2) com oxímetro de pulso, pulso com monitor de frequência cardíaca e temperatura a cada 10 minutos.
  2. Remova os pelos do abdômen usando uma máquina de cortar a pele e prepare a pele com uma única rodada de cotonetes de álcool, seguida de gaze embebida em povidona-iodo. Limpe o excesso de solução antisséptica do abdômen usando uma toalha estéril.
  3. Cubra o abdômen usando toalhas estéreis e cortinas cirúrgicas para manter a esterilidade durante todo o procedimento. Infiltre a solução de lidocaína na parede abdominal no local planejado da incisão usando uma agulha calibre 25.
  4. Realize uma laparotomia da linha média fazendo uma incisão de espessura total através da pele, tecido subcutâneo e musculatura da parede abdominal ao longo da linha alba para entrar na cavidade peritoneal usando um bisturi de 10 lâminas. Coloque retratores na parede abdominal e eviscere os intestinos.
  5. Identifique uma região do intestino ~10-15 cm proximal à válvula ileocecal e ressece um segmento de 2,5 cm (1 polegada) do intestino delgado usando tesoura. Ressecar o mesenterio associado com eletrocauterização para hemostasia dos vasos sanguíneos mesentéricos. Feche as duas extremidades intestinais abertas usando pontos de seda 3-0 interrompidos para alcançar um fechamento estanque. Realize uma anastomose primária de duas camadas, de um lado para o outro (funcional de ponta a ponta). Reconstrua a camada interna do lúmen com uma sutura sintética absorvível 3-0 em modo contínuo e a camada externa com uma sutura 3-0 não absorvível em movimento. Tente minimizar o vazamento intestinal durante o procedimento.
  6. Abrade suavemente uma seção de 3 x 5 cm do peritônio parietal ao longo da parede lateral direita do abdómen usando gaze estéril ou uma almofada de electrocauterização até que a superfície peritoneal pareça desgastada ou haja edema subserosiano na parede abdominal (10-15 movimentos com pressão média). A parede lateral esquerda do abdômen pode ser deixada sem abrasão para servir como controle técnico, embora, usando esse modelo, aderências estocásticas se formem por todo o abdômen de forma semelhante à doença humana.
  7. Reposicione o intestino na cavidade abdominal e remova os retratores da parede abdominal. Irrigue o abdômen com 1 L de soro fisiológico estéril aquecido, evacue todo o líquido e confirme a hemostasia (sem sangramento ativo) antes do fechamento.
  8. Feche a fáscia com uma sutura absorvível 0-0 em movimento. Feche a pele com um ponto não absorvível 2-0 ou 3-0 e cubra a incisão com um curativo estéril. A duração média do procedimento foi de 1 hora.
  9. Extubar animais ao retornar a respiração espontânea. Monitore os sinais vitais (pulso, saturação de oxigênio, temperatura, pressão arterial) continuamente até se recuperar totalmente da anestesia.

4. Cuidados Pós-Operatórios

  1. Administre Carprofeno (25 - 50 mg por via oral) 24 horas por dia durante os primeiros 3 dias após a cirurgia e depois, conforme necessário (PRN). Mantenha os animais em uma dieta líquida rica em proteínas (1,5 frascos duas vezes ao dia) durante os primeiros 3 dias pós-operatórios.
  2. Administre amoxicilina (10 mg/kg) duas vezes ao dia por via oral durante uma semana e depois faça um PRN para sinais de infecção da ferida (vermelhidão, calor, inchaço com ou sem drenagem).
  3. Verifique os animais duas vezes ao dia quanto ao apetite, atividade, função intestinal e integridade da ferida. Se estiver preocupado com infecção, converse sobre a dosagem e duração do antibiótico com o veterinário. O curativo estéril deve ser mantido pelos primeiros 3 dias após a cirurgia para minimizar o risco de infecção da ferida. Registre o peso em intervalos de 2 a 3 dias para garantir a manutenção do peso após a operação.
  4. Faça a transição dos animais para comida sólida a partir do quarto dia pós-operatório (POD4). Faça a ponte na ingestão de comida sólida com uma dieta suplementar líquida rica em proteínas até tolerar calorias suficientes apenas com comida sólida.

5. Eutanásia

  1. Eutanasiem animais às 4 semanas sob supervisão veterinária usando uma solução de eutanásia conforme os padrões institucionais.
  2. Avalie as aderências de forma grosseira. Colete imediatamente tecidos e amostras de sangue para análises a jusante. Descarte todos os resíduos biológicos e farmacêuticos de acordo com as diretrizes de Saúde e Segurança Ambiental da sua instituição.

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Resultados

O modelo proposto de aderência pós-operatória suína (Figura 1) foi combinado com um sistema de pontuação adaptado para classificar aderências em temporeal 28. A pontuação da aderência foi realizada independentemente por 3 membros da equipe cegados para condições experimentais no período de 4 semanas em uma coorte representativa de n=4 porcos; as pontuações foram médias para uma pontuação final de aderê...

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Discussão

O modelo proposto de adesão suína oferece um método clinicamente relevante e confiável para modelar aderências intra-abdominais. Em contraste com modelos de lesão focal ou de local único, a combinação de laparotomia da linha média, resseção do intestino delgado com anastomose e abrasão peritoneal parietal padronizada foi intencionalmente selecionada para recapitular os insultos peritoneais multifatoriais encontrados durante procedimentos cirúrgicos abdominais abertos. A abrasão controlad...

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Divulgações

Os autores não têm divulgações relevantes.

Agradecimentos

A pesquisa relatada nesta publicação foi apoiada pelo programa SPARK de Stanford, pela Bolsa de Melhoria de Aderências Cirúrgicas do American College of Surgeons, generosamente apoiada pela família Carlino, e pelo Departamento de Cirurgia da Universidade de Stanford. Gostaríamos de agradecer ao Centro de Serviço Veterinário de Stanford e à equipe do Pavilhão de Animais Comparados. Todas as ideias, análises, referências e figuras foram criadas e verificadas pelos autores. Ferramentas de IA eram usadas apenas para pequenas edições de linguagem e gramática.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Animais
Fêmeas de Yucatán mini porcos, de 9 a 12 kg de peso corporal (7 a 9 semanas de idade)S& S Farms8
Suprimentos cirúrgicos
DMI4000 Microscópio BLeica MicrosystemsHistologia
Materiais
Euthasol VirbacEutanásia
Coloração Alcoólica EosinaAzer Scientific & nbsp;  Cat#ES709Histologia
Slides foscosFisher Scientific & nbsp;Cat#12-550-400Histologia
Mayer′ s Solução de Hematoxilina  Sigma-Aldrich Cat#MHS80 Histologia
Medicamentos
AmoxicilinaCovetrus59629Prevenção de infecção
10mg/kg de BID por via postal x1
Ancef/CefazolinaCovetrus84773Controle de infecção pré-operatório
25 mg/kg IV
AtipamezoleCovetrus82124Agente de Reversão de Sedação
0,2 mg/kg 
AtropinaCovetrus74760Bradicardia
0,04mg/kg   
Bupernorfina de liberação prolongada (ER)Faramácia WedgewoodAnalgesia
0,18 mg/kg IV
Carprofeno - intraoperatórioDechraAnalgesia
25 mg/kg IV 
Carprofeno - pós-operatórioDechraAnalgesia
25-50mg PO PRN
CereniaZoetisAntináusea
1-2 mg/kg IV uma vez intraoperatório
IsofluranoDechraSedação 
Lidocaína 2%VetOneV1 510212Analgesia
2 mg/kg de quadratura antes da incisão
KetaminaDechraAnesthsia & Analgesia
12 mg/kg IM
DobutaminaHospira Dosagem e titulação por anestesiologista 
Povidona-iodo (Betadine)ValleyVet12265Asséptico
Xilazina (Rompun)DechraGW l400000Sedação/Analgesia
2,2 mg/kg IM
Suprimentos Cirúrgicos
Sutura 3-0 PDS (polidioxanona)EthiconCat#Z316HAnastamosis
Quantidade - 2 
Sutura de seda 3-0 (Pop-off) EthiconCat#1679HQuantidade de Anastamosis
- 1 pacote de refrigerante
Sutura PDS 0-0 (polidioxanona)EthiconCat#Z990GFechamento Linea Alba
Quantidade - 1
Sutura Prolene 3-0EthiconCat#8684GFechamento da Pele
Quantidade - 1
Bovie Electrocautery Grayline Medical SupplyCat#E2516Homeostase e corte
Conjunto padrão de instrumentos cirúrgicos abomdinais estéreis com retratores na parede abdominal, como reatores do Exército/Marinha ou Richardson.
3M Tegaderm + Pad 3MCat#3593Curativos cirúrgicos
Dieta líquida rica em proteínasGarantirDiet
1,5 frascos BID
Software
BioRenderNúmero do acordo SH28Z3OOKIGeração de figuras 
Adobe IllustratorAdobev29.8.1Geração de figuras 
FIJINIHGeração de figuras 
*Nota: Ferramentas de IA eram usadas apenas para pequenas edições de linguagem e gramática
*BID - duas vezes ao dia,  IV - intravenoso, intramuscular, PO - por os/ por boca, SQ - subcutâneo, PRN - conforme necessário

Referências

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