O acompanhamento dos níveis de neurotransmissores extracelular em regiões distintas do cérebro de animais que circulam livremente oferece insights sobre a relação entre a liberação do neurotransmissor e comportamento. Em microdiálise in vivo juntamente com detecção eletroquímica fornece anatômicas excelentes e resolução de química; e informações sobre como a neurotransmissão basal é alterada por manipulações farmacológicas ou fisiológicas.
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Artigo de método
Cirurgia estereotáxica sobrevivência em Roedores
Neste artigo
Resumo
Resumo
A capacidade de medir extracelular níveis basais de neurotransmissores no cérebro de animais acordado permite a determinação dos efeitos de diferentes desafios sistêmicos (farmacológico ou fisiológico) para o SNC. Por exemplo, pode-se medir diretamente como projeções do animal dopamina mesencéfalo responder à dopamina de liberação de drogas como estímulos d-anfetamina ou naturais, como alimentos. Neste vídeo, mostramos-lhe como implante de cânulas guia alvo locais específicos no cérebro de ratos, como inserir e implante de uma sonda de microdiálise e como usar cromatografia líquida de alta eficiência acoplado com detecção eletroquímica (HPLC-CE) para medir os níveis extracelulares de neurotransmissores e metabólitos oxidáveis. Introdução preciso local de medicamentos através da sonda de microdiálise permite para o trabalho refinado da especificidade site em mecanismo de um composto s da ação. Esta técnica tem anatômicas excelentes e resolução de química, mas apenas a resolução de tempo modesto como amostras de microdiálise geralmente são processados a cada 20-30 minutos para garantir níveis de neurotransmissores detectável. Ferramentas complementares ex vivo (ou seja, fatia de cultura de células e eletrofisiologia) pode contribuir para a monitorização em tempo real neurotransmissão.
Protocolo
Sumário
Dois meses de idade camundongos C57BL/6J idade média ou equivalente ou três meses de idade média, idade ratos Sprague Dawley ou equivalente são anestesiados com cetamina (60 mg / kg ip para ratos; ip 100 mg / kg para camundongos) e xilazina (10 mg / kg, ip para qualquer espécie). Sedação é monitorado usando uma pitada toe gentil retirar reflexo demonstrado em Walantus et al. (Jove, 6, 2007) e Szot et al. (Jove, 9, 2007). Termorregulação pode ser fornecida através de uma almofada de aquecimento thermostatregulated (ALA Instruments Inc.) e monitoradas através de um termômetro ....
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Discussão
Em microdiálise in vivo é a ferramenta de escolha para medir vários neurotransmissores e metabólitos em locais distintos do cérebro de um animal vivo. No entanto, ele só monitora os níveis extracelulares de substâncias neuroquímicas e não oferece a resolução de tempo para monitorar exocitose do neurotransmissor em tempo real. Através de uma versão da técnica chamada de "net-flux", a concentração do neurotransmissor real em um determinado site pode ser calculado, que por sua vez pode dar medições precisas da taxa de recaptação de n.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a declarar.
Agradecimentos
Apoiada por DK065872 (PEV), uma Smith Award Foundation Família de Excelência em Pesquisa Biomédica (PEV), F31 DA023760.
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Materiais
Materiais são descritos no documento de protocolo
Referências
- Bungay, P. M., Newton-Vinson, P., Isele, W., Garris, P. A., Justice, J. B. Microdialysis of dopamine interpreted with quantitative model incorporating probe implantation trauma. J. Neurochem. 86, 932-946 (2003).
- Chen, K. C.
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Reimpressões e permissões
