Name: Modelo murino de isquemia dos membros posteriores (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 51 s
Description: Aprenda a induzir isquemia unilateral em membros posteriores de camundongos por ligadura da artéria femoral, confirmada por imagem laser Doppler. Este modelo é essencial para estudar doença arterial periférica e regeneração vascular.

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Os autores agradecem Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Jeff Velotta, MD, Grant Hoyt, Robert C. Robbins, MD, Jin Yu, MD, Tim Doyle, PhD, e Stanford Núcleo de Imagem de Pequenos Animais para assistência técnica. Os autores também agradecem AM Bickford, Inc. para suporte de equipamentos veterinários. Esta pesquisa foi suportada por concessões de pesquisa do National Institutes of Health (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), o Programa de Pesquisa do Tabaco Califórnia Related Disease da Universidade da Califórnia (15IT-0257 e 1514RT-0169) , e do Instituto de Medicina Regenerativa da Califórnia (RS1-00183). NH é apoiado por uma bolsa da American Heart Association.

1. Indução de isquemia dos membros posteriores unilaterais <ol><li> Os instrumentos cirúrgicos necessários para esta operação são: multa fórceps pontiagudo, uma pinça pontiaguda, tesoura primavera, tesouras cirúrgicas, porta-agulhas e afastador. Nós fazemos nossa própria retrator usando um clipe de papel porque ele é menor do que retratores disponíveis comercialmente. Esterilizar essas ferramentas antes da cirurgia por uma autoclave ou um esterilizador hot-pérola. Uma ferramenta de cautério e estéril fino cotonetes apontou também será necessária para esta cirurgia. Recomenda-se que as ferramentas de ser re-esterilizados nas pontas, conforme necessário durante o procedimento. </li><li> Quando as ferramentas estão prontas, coloque o mouse na câmara de indução anestésica contendo 1-3% de isoflurano em oxigênio a 100% a taxa de fluxo de 1l/min. </li><li> Deixe o mouse na câmara de indução até que ele não responde a estímulos externos. Em seguida, retire o animal da câmara de indução. Recomenda-se lavar o anestésico da caixa antes de abrir a tampa, para diminuir a exposição do operador para o isoflurano. </li><li> Em seguida, coloque o animal em decúbito dorsal sobre a mesa pré-operacionais e conectá-lo a um fluxo contínuo de isoflurano. Usando um barbeador elétrico, remover os pêlos do membro posterior. Aplique o creme de depilação para remover completamente o cabelo. </li><li> Posicione o mouse na posição supina sobre uma almofada coberta aquecida na mesa de operação, e conectá-lo a um fluxo contínuo de isoflurano. Ampliar e garantir o membro posterior com um pedaço de fita. Uma vez que o membro posterior é seguro, limpe a pele com três esfrega alternando betadine e álcool. Para o restante do procedimento cirúrgico, o uso de um microscópio de dissecação em 10X ou 20X de ampliação para obter uma visão ampliada da região hindlimb. </li><li> Utilizando uma pinça fina e tesoura cirúrgica, fazer uma incisão na pele, de aproximadamente 1 cm de comprimento, a partir do joelho para a coxa medial. </li><li> Usando tampão fosfato (PBS)-umedecidos multa cotonetes apontou, escove delicadamente afastado tecido adiposo subcutâneo em torno do músculo da coxa. </li><li> Em seguida, aplique o cautério transversalmente ao inciso e dissecar através do tecido de gordura subcutânea para revelar a artéria femoral subjacente. </li><li> Use um afastador para abrir o ferimento e obter uma melhor visualização da vasculatura dos membros inferiores. </li><li> Utilizando uma pinça fina e um cotonete bem apontou, gentilmente furar através da bainha membranosa femoral para expor o feixe neurovascular. </li><li> Em seguida, usando um jogo limpo de uma pinça fina e haste com algodão, dissecar e separar a artéria femoral a partir da veia femoral e do nervo no local proximal, perto da virilha. Após a dissecção, passe um fio de sutura de seda 7-0 debaixo da extremidade proximal da artéria femoral. Oclusão da artéria femoral proximal usando nós dobro. Coloque o empate na embarcação como proximal na ferida quanto possível a fim de deixar tempo para o empate segundo e um segmento de intervenção que será seccionado. </li><li> Separe a artéria femoral da veia femoral no local distal perto do joelho. Passe um fio de sutura 7-0 debaixo da extremidade distal da artéria femoral proximal até a artéria poplítea. Oclusão do vaso usando nós dobro. </li><li> Oclusão da artéria femoral distal com um segundo conjunto de nós dobro apenas proximal ao primeiro conjunto de nós. Este segundo conjunto de suturas serão usados ​​para prender a artéria durante o processo de transação. </li><li> Da mesma forma, para fins de emocionante, oclusão da artéria femoral proximal com um segundo conjunto de nós dobro imediatamente distal ao primeiro conjunto de nós. </li><li> Transecto o segmento da artéria femoral entre os nós distal e proximal com um cotonete fino e pontudo e uma tesoura de mola. Tenha cuidado para não perfurar a parede da veia femoral. </li><li> Remover o retrator e fechar a incisão usando Vicryl 5-0. Estas suturas não precisam ser removidos em um momento posterior, como eles se dissolvem sozinhos. </li><li> Uma vez que a incisão é fechada, colocar o animal em cima de uma almofada coberta aquecida na gaiola de recuperação e monitorar continuamente até que desperto. </li><li> Depois de origem animal se recuperou de uma hora, prossiga com o passo de perfusão do laser Doppler sangue, a fim de confirmar a indução de isquemia. </li></ol> 2. Laser Doppler perfusão sanguínea <ol><li> Para começar o laser Doppler perfusão passo, coloque o mouse na câmara de indução anestésica contendo 1-3% de isoflurano em oxigênio a 100% a taxa de fluxo de 1l/min. </li><li> Deixe o mouse na câmara de indução até que ele não responde a estímulos externos. Em seguida, retire o animal da câmara de indução. Recomenda-se lavar o anestésico da caixa antes de abrir a tampa, para diminuir a exposição do operador para o isoflurano. </li><li> Colocar o animal na mesa pré-operacional conectado ao fluxo contínuo de isoflurano. Em seguida, retire o cabelo da hindlimb usando um barbeador elétrico seguido por creme de depilação, se necessário. </li><li> Após a remoção do cabelo,colocar o animal em uma superfície de 37 ° C aquecidos por 5 minutos sob fluxo contínuo de isoflurano. Monitorar a temperatura do núcleo para garantir euthermia, como mudanças de temperatura irá afetar significativamente a perfusão. </li><li> Após 5 minutos, colocar o animal em decúbito dorsal sobre uma superfície não-reflexiva de absorção de luz, como pano de cor verde, conectado a um fluxo contínuo de isoflurano. Estender membros posteriores. </li><li> Em seguida, ligue a impressora a laser Doppler e do software de aquisição e inicializar o software. Especificar o tamanho do campo de visão e resolução. É melhor para manter o campo de visão e densidade de pixels consistente entre os animais, a fim de tornar a análise futura mais fácil. </li><li> Abra um novo arquivo. Prima start para iniciar a aquisição dos dados de imagem. Geralmente, o gerador de imagens detecta automaticamente a distância do mouse, mas se solicitado, especifique a distância do animal para o gerador de imagens. O laser vai mostrar as fronteiras do campo de visão e, em seguida, começar a adquirir dados. </li><li> Após a aquisição for concluída, a imagem começará a mostrar uma gama de cores que são indicativos do nível de perfusão de sangue para as pernas. As cores podem ser definidas para uma gama específica de perfusão para melhor comparar os dados entre os animais. </li><li> Quando a aquisição de dados estiver concluída, salve o arquivo. </li><li> Em seguida, retornar o animal para a gaiola de recuperação e monitorar o animal continuamente até que desperto. </li><li> Para analisar os dados, use o ajuste de limite no software de análise para subtrair qualquer ruído de fundo. Um limite de 0,2 geralmente é um valor razoável. Selecionar 2 regiões de interesse, ou ROIs, que cobrem cada área hindlimb. A variedade de pontos de referência pode ser usada para padronizar o ROI entre os membros e os animais. Em seguida, determinar a perfusão média e variabilidade no ROI. A diferença de perfusão e perfusão entre o membro isquêmico e membro de controle pode então ser facilmente determinada. </li><li> Este procedimento pode ser repetido para acompanhar as alterações na perfusão hindlimb ao longo do tempo. Em um ponto de tempo desejado, o animal pode ser sacrificado para avaliação da função do tecido e comparação com dados de imagem de perfusão. </li></ol> 3. Resultados representativos: A anatomia da vasculatura hindlimb é mostrado na Figura 1 2. Um diagrama representativo da hindlimb após explante artéria femoral é mostrado na Figura 2. Para confirmar a indução de isquemia para o membro posterior, laser Doppler análise de imagens de perfusão demonstra uma redução dramática no fluxo sangüíneo para o membro isquêmico, em comparação com o membro de controle, como mostrado na Figura 3. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="Figura 1" width="600" height="406" /> Figura 1. Anatomy da vasculatura hindlimb. Asteriscos indicam os locais de ligação para a indução de isquemia hindlimb. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="Imagem 2" width="600" height="450" /> Figura 2. Diagrama Representante mostrando a anatomia do membro posterior após a ligadura da artéria femoral na porção proximal e distal após a remoção da artéria femoral. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="Figura 3" width="600" height="256" /> Figura 3. Laser Doppler imagens mostrando o fluxo de sangue antes e após a indução de isquemia para o membro posterior esquerda (indicada pela seta).

<ol><li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCook%2C+MJ+%22The+anatomy+of+the+laboratory+mouse%22">The anatomy of the laboratory mouse</a>. , Academic Press. New York. (1976).</li>
<li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li>
<li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+trait+locus+%28LSq-1%29+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li>
</ol>

Existem algumas fontes de variabilidade a considerar no planejamento e execução de modelos de isquemia hindlimb. Primeiro, o nível de isquemia pode variar de acordo com a localização da ligadura com relação ao de ramos laterais. Portanto, para a consistência do modelo, os animais devem ser submetidos ao mesmo nível de ligadura arterial. Outra fonte de variabilidade na recuperação isquêmica está relacionada com a idade dos animais, com animais jovens (6-8 semanas) com taxas de recuperação mais rápido e mais completo do que animais mais velhos (8-10 meses de idade), avaliado pela hemodinâmica (ie perfusão do laser Doppler) ou funcionais (teste ergométrico, por exemplo) medidas. Para estudos em que se está avaliando um agente angiogênico, pode ser preferível usar animais mais velhos, porque uma maior diferença entre os grupos pode ser observada com uma intervenção terapêutica. Por outro lado, para estudos em que se está avaliando um fator anti-angiogênico, pode ser preferível utilizar animais mais jovens para maximizar o tamanho do efeito 3. Se realizado corretamente, deve haver o mínimo de complicações tais como hemorragia, infecção ou mortalidade. Se o sangramento ocorre por ruptura acidental da veia femoral ou outros recipientes, com uma pressão moderada de algodão estéril aplicador derrubado ou gaze deve ser aplicado no local da hemorragia até que o sangramento pare. Os animais que apresentem sinais de infecção devem ser tratados com agentes anti-infecciosos. Animais exibindo gangrena significativa pode precisar beeuthanized. Esta complicação é mais comum em animais mais velhos, e em algumas cepas, como camundongos BALB c 4. Além disso, o modelo de isquemia hindlimb pode causar a dor ligeira a moderada. Portanto, os analgésicos, como a buprenorfina ou carprofeno deve ser administrado conforme necessário para o tratamento de dor, de acordo com recomendações do IACUC. Em conclusão, nós demonstramos um método simples e reprodutível para o estudo da PAD em um modelo murino de isquemia hindlimb. O modelo de isquemia hindlimb análise com laser Doppler é um excelente sistema para o estudo de patologias vasculares e de avaliação dos candidatos terapêuticos.

<table><tbody><tr><td>Ferramentas cirúrgicas</td><td>Ferramenta</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hastes flexíveis de algodão Constix</td><td>Ferramenta</td><td>Contec</td><td>SC-4</td><td></td></tr><tr><td>Betadine (povidona-iodo)</td><td>Reagente</td><td>PDI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Álcool 70%</td><td>Reagente</td><td>Kendall</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda 7-0</td><td>Ferramenta</td><td>Genzyme</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura vicryl 5-0</td><td>Ferramenta</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aparelho de barbear elétrico</td><td>Ferramenta</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cauterização</td><td>Ferramenta</td><td>Baxter International Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema de Laser Doppler e PeriScan PIM 3</td><td>Equipamento</td><td>Perimed</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

modelo murino de isquemia dos membros posteriores

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

Nos Estados Unidos, a doença arterial periférica (DAP) afeta cerca de 10 milhões de indivíduos, e é também mundialmente prevalente. Terapias médicas para o alívio sintomático são limitadas. Intervenções cirúrgicas ou endovasculares são úteis para alguns indivíduos, mas a longo prazo os resultados são muitas vezes decepcionantes. Como resultado, há uma necessidade para o desenvolvimento de novas terapias para tratar a PAD. A preparação isquemia murino hindlimb é um modelo de PAD, e é útil para testar novas terapias. Quando comparado com outros modelos de isquemia tecidual como a ligadura da artéria coronária ou cerebral, ligadura da artéria femoral prevê um modelo mais simples de tecido isquêmico. Outras vantagens deste modelo são a facilidade de acesso para a artéria femoral e baixa taxa de mortalidade. Neste vídeo, demonstramos a metodologia para o modelo murino de isquemia hindimb unilateral. Os materiais e procedimentos específicos para a criação e avaliação do modelo será descrita, incluindo a avaliação da perfusão do membro por laser Doppler. Este protocolo também pode ser utilizado para o transplante e não-invasiva de rastreamento de células, o que é demonstrado por Huang et al. 1.

O procedimento cirúrgico para a indução de isquemia hindlimb unilateral é demonstrada, com a confirmação de isquemia por laser Doppler imagens de perfusão.

Modelo murino de isquemia dos membros posteriores

Nos Estados Unidos, a doença arterial periférica (DAP) afeta cerca de 10 milhões de indivíduos, sendo também prevalente em todo o mundo. Terapias médicas para...

Nos Estados Unidos, a doença arterial periférica, DAP, afeta cerca de 10 milhões de indivíduos, em particular fumantes, diabéticos e pessoas com mais de 70 anos. O objetivo geral desta cirurgia é induzir isquemia de membro posterior mediante a ligadura dos segmentos proximal e distal da artéria femoral. O procedimento começa com a anestesia, depilação e posicionamento do camundongo sobre a mesa cirúrgica na posição supina.Em seguida, faz-se uma incisão na pele a partir do joelho em direção à coxa medial, expondo a artéria femoral subjacente. A seguir, a artéria femoral é cuidadosamente separada da veia femoral. São feitos nós duplos no local de ligadura distal, bem como no local de ligadura proximal.O segmento da artéria femoral é então ressecado. O local da incisão é fechado com pontos e o animal é deixado em recuperação da anestesia. Para confirmar a indução de isquemia na pata traseira, o camundongo anestesiado é posicionado em decúbito dorsal.Em seguida, ambas as patas traseiras são escaneadas pelo laser doppler. A imagem é então salva e avaliada quanto à perfusão. Olá, sou John Cook.Sou professor de medicina na divisão de medicina cardiovascular da Universidade de Stanford. Nosso laboratório tem interesse em angiogênese e regeneração vascular. Neste vídeo, dois dos meus pós-doutorandos, Dra. Nan Wong e Hir Niyama, irão apresentar a vocês o modelo de isquemia de membro posterior em camundongo, que é um modelo importante para a doença arterial periférica e frequentemente utilizado em nosso laboratório para avaliar os efeitos de fatores de crescimento e terapia celular sobre a angiogênese.Utilizamos esses procedimentos em nosso laboratório para estudar o efeito de células endoteliais derivadas de células-tronco na reparação vascular. Então, vamos começar. Os instrumentos cirúrgicos necessários para esta operação incluem pinça fina pontiaguda, pinça pontiaguda, tesoura de mola, tesoura cirúrgica, porta-agulha e afastador.Nós fabricamos nosso próprio afastador usando um clipe de papel, pois ele é menor do que os disponíveis comercialmente. Os afastadores devem esterilizar essas ferramentas antes da cirurgia com um esterilizador de contas quentes; uma pinça de cauterização e cotonetes estéreis de ponta fina também serão necessários para esta cirurgia. Quando as ferramentas estiverem prontas, coloque o camundongo na câmara de indução anestésica contendo um a 3% de isoflurano em oxigênio a 100%, com uma taxa de fluxo de um litro por minuto.Deixe o camundongo na câmara de indução até que ele não responda a estímulos externos. Em seguida, remova o animal da câmara de indução. Depois, posicione o animal em posição supina sobre a mesa de pré-operatório e conecte-o a um fluxo contínuo de isoflurano.Usando uma máquina elétrica de barbear, remova os pelos da pata traseira. Aplique creme depilatório para remover completamente os pelos. Após a depilação do camundongo, estenda e fixe a pata traseira com um pedaço de fita adesiva.Uma vez que a pata traseira esteja firme, limpe a pele com três esfrega&ccedil;&otilde;es alternadas de Betadine e &aacute;lcool. Usando pin&ccedil;as finas e tesoura cir&uacute;rgica, fa&ccedil;a uma incis&atilde;o na pele com aproximadamente um cent&iacute;metro de comprimento, partindo do joelho em dire&ccedil;&atilde;o &agrave; coxa medial, utilizando solu&ccedil;&atilde;o salina tamponada com fosfato. Umede&ccedil;a cotonetes pontiagudos e definidos com PBS.Remova suavemente o tecido adiposo subcutâneo ao redor do músculo da coxa. Em seguida, aplique a cautérização transversalmente em tamanhos adequados e dissecque através do tecido adiposo subcutâneo para expor a artéria femoral subjacente. A seguir, utilize um retrator para abrir a ferida e obter uma melhor visualização da vasculatura da extremidade inferior.Usando pin&ccedil;as finas em um cotonete com ponta fina, perfure delicadamente a bainha femoral membran&aacute;cea para expor o feixe neurovascular. Em seguida, utilizando um novo par de pin&ccedil;as finas e um cotonete limpo, dissecione e separe a art&eacute;ria femoral da veia femoral e do nervo na regi&atilde;o proximal pr&oacute;xima &agrave; virilha. Ap&oacute;s a disseca&ccedil;&atilde;o, passe um fio de seda 7-0 sob a extremidade proximal da art&eacute;ria femoral.Oclua a artéria femoral proximal usando nós duplos. Coloque o laço no vaso o mais proximal possível na ferida, de modo a deixar comprimento suficiente para o segundo laço e um segmento intermediário que será seccionado. Separe a artéria femoral da veia femoral no local distal, próximo ao joelho.Passe uma alça de fio 7-0 sob a extremidade distal da artéria femoral, próxima à artéria poplítea. Oclua o vaso usando nós duplos. Oclua a artéria femoral distal com um segundo par de nós duplos logo proximal ao primeiro par de nós.Este segundo conjunto de pontos será usado para segurar a artéria durante o procedimento de secção. De forma semelhante, para fins de fixação, oclua a artéria fal proximal com o segundo conjunto de nós duplos logo distal ao primeiro conjunto de nós. Seccione o segmento da artéria femoral entre os nós distal e proximal com um cotonete de ponta fina e uma tesoura de mola.Use cuidado para não perfurar a parede da veia femoral. Remova o retrator e feche a incisão utilizando suturas de cinco pontos. Após o fechamento da incisão, retorne o animal à gaiola de recuperação e monitore até que esteja acordado. Após o animal ter se recuperado por uma hora, prossiga com a perfusão sanguínea por laser doppler.Passo para confirmar a indução de isquemia. Para iniciar o passo de perfusão com laser doppler, coloque o camundongo na câmara de indução de anestesia contendo um a 3% de isoflurano em oxigênio a cem por cento, com uma taxa de fluxo de um litro por minuto. Deixe o camundongo na câmara de indução até que ele não responda a estímulos externos.Em seguida, remova o animal da câmara de indução e coloque-o sobre a mesa pré-operatória conectada ao fluxo contínuo de isoflurano. Então, remova os pelos da pata traseira usando uma máquina de barbear elétrica, seguida por creme depilatório, se necessário. Após a remoção dos pelos, posicione o animal sobre uma superfície aquecida a 37 graus Celsius por cinco minutos, sob fluxo contínuo de isoflurano.Após cinco minutos, posicione o animal em posição supina sobre uma superfície absorvedora de luz não reflexiva, como um pano de cor verde conectado a um fluxo contínuo de isoflurano. Estenda as patas traseiras. Em seguida, ligue o imagiador a laser doppler e o software de aquisição e inicialize o software.Especifique o tamanho do campo de visão e a resolução. É recomendável manter o campo de visão e a densidade de pixels consistentes entre os animais. Para facilitar a análise futura, abra um novo arquivo.Pressione iniciar para começar a aquisição dos dados da imagem. Quando solicitado, especifique a distância do animal até o imageador. O laser mostrará as bordas do campo de visão e, em seguida, iniciará a aquisição de dados.Após a conclusão da aquisição, a imagem começará a exibir uma variedade de cores que indicam o nível de perfusão sanguínea nas patas. As cores podem ser ajustadas para uma faixa específica de perfusão. Para comparar melhor os dados entre os animais quando a aquisição estiver concluída, salve o arquivo, devolva o animal à gaiola de recuperação e monitore-o continuamente até que esteja acordado.Para analisar os dados, utilize o ajuste de limiar no software de análise para subtrair qualquer ruído de fundo. Um limiar de 0,2 geralmente é um valor razoável. Selecione duas regiões de interesse ou ROI que cubram cada área da pata traseira.Uma variedade de marcos anatômicos pode ser utilizada para padronizar a ROI entre membros e animais, e então determinar a perfusão média e a variabilidade na ROI. A diferença de perfusão e a razão de perfusão entre o membro isquêmico e o membro controle podem então ser facilmente determinadas. Este procedimento pode ser repetido para acompanhar as alterações na perfusão do membro posterior.Com o passar do tempo, em um ponto temporal desejado, o animal pode ser eutanasiado para avaliação da função tecidual. Em comparação com os dados de imagem de perfusão, um diagrama representativo da pata traseira após a exposição da artéria femoral é mostrado aqui. Os pontos marcam as localizações dos sítios de ligadura proximal e distal.Quando a cirurgia é realizada com cuidado, há sangramento mínimo e a cirurgia pode ser concluída em menos de uma hora. E aqui estão os resultados da análise da imagem de perfusão por laser doppler. A imagem à esquerda mostra a perfusão de ambas as extremidades antes da indução isquêmica.Embora a imagem à direita mostre a profusão em ambos os membros, após o membro posterior esquerdo ter sofrido indução isquêmica. A intensidade da cor na imagem indica a quantidade de fluxo sanguíneo.Em comparação com o membro controle, o membro isquêmico apresenta pouca cor, o que sugere uma redução acentuada no fluxo sanguíneo. Com base nesses dados, o software pode quantificar a perfusão média nos membros isquêmico e controle para determinar a diferença de perfusão e a razão de perfusão. Assim, esses resultados confirmam a indução de isquemia no membro posterior.Acabamos de mostrar como induzir isquemia unilateral na pata traseira no modelo de camundongo e confirmar a indução da isquemia por meio da perfusão sanguínea com imagem de laser Doppler. O modelo de isquemia na pata traseira com análise por imagem de laser Doppler é um excelente sistema para estudar patologias vasculares e avaliar candidatos terapêuticos. Este procedimento pode ser seguido pelo transplante e rastreamento não invasivo de células, o que é demonstrado em outro vídeo do jve por Huang et al.Ao realizar estes procedimentos, é importante lembrar-se de ter cuidado para não perfurar a parede da veia femoral ao dissecar a artéria femoral com tesoura de dissecação. Utilize também um local de ligadura semelhante em todos os animais do experimento, para garantir a consistência do modelo de isquemia acentuada. É isso.Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

A falta de entendimento mecanicista da medula espinhal lesão de isquemia-reperfusão tem dificultado mais adjuntos para evitar paraplegia após operação da aorta alto risco. Assim, o desenvolvimento de modelos animais é imperativo. Este manuscrito demonstra reprodutível menor paralisia extremidade após oclusão da aorta torácica em um modelo murino.

Reproducable Paraplegia por Thoracic Aorta Oclusão em um modelo murino de Medula Espinhal A isquemia-reperfusão

Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

A indução cirúrgica de isquemia de membros posteriores no camundongo é útil para examinar a angiogênese, no entanto, isso está comprometido em certas linhagens de camundongos que exibem necrose tecidual induzida por isquemia acentuada. São descritos métodos para induzir isquemia subaguda de membros usando constritores ameróides para contornar esse problema por meio da indução de oclusão arterial gradual.

Métodos para aguda e subaguda Murino dos membros posteriores Isquemia

Descrevemos um modelo de camundongo de AVC induzido pela oclusão da artéria cerebral média usando uma sutura revestida de silicone. O protocolo pode ser aplicado para induzir oclusão permanente ou isquemia temporária, seguida de reperfusão.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Nós descrevemos um procedimento cirúrgico usado para induzir a isquemia periférica nos coelhos com hiperlipidemia e diabetes. Esta cirurgia actua como um modelo pré-clínico para as circunstâncias experimentadas na doença de artéria periférica nos pacientes. A angiografia também é descrita como um meio de medir a extensão da isquemia introduzida e a recuperação da perfusão.

Modelo pré-clínico de isquemia de membros posteriores em coelhos diabéticos

Aqui, é apresentado um modelo experimental de isquemia do membro posterior crítico, seguido de uma bateria de testes funcionais, histológicos e moleculares para avaliar a efetividade das terapias angiogênicas.

Avaliando a angiogênese terapêutica em um modelo murino de isquemia Retromembro

Nisto nós descrevemos um procedimento cirúrgico que mostra como conseguir a ligadura permanente da artéria coronária descendente esquerdo-anterior nos ratos. Este modelo é de grande relevância para investigar a fisiopatologia do infarto do miocárdio e os processos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto do miocárdio murino usando ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda

Este artigo demonstra uma abordagem cirúrgica eficiente para estabelecer isquemia aguda em camundongos com uma pequena incisão. Essa abordagem pode ser aplicada pela maioria dos grupos de pesquisa sem quaisquer atualizações laboratoriais.

Um modelo cirúrgico modificado de isquemia de membros traseiros em ApoE-/- Ratos usando uma incisão em miniatura

Descrevemos um método simples e reprodutível que pode induzir infarto do miocárdio ou lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior esquerda através de micromanipulação.

Indução de Infarto do Miocárdio e Lesão de Isquemia-Reperfusão Miocárdica em Camundongos

O presente protocolo descreve um modelo único e clinicamente relevante de doença arterial periférica que combina artéria femoral e eletrocoagulação venosa com a administração de um inibidor de sinthase de óxido nítrico para induzir gangrena de copulxina em camundongos FVB. A perfusão II intracardiac é então usada para imagens tridimensionais de alta resolução da vasculatura do footpad.

Imagem tridimensional de alta resolução da Vasculatura do Footpad em um Modelo de Gangrena Hindlimb Murine

Descrevemos como gerar um modelo cirúrgico amplamente utilizado de lesão de isquemia-reperfusão (IRI) intestinal em roedores. O procedimento envolve a oclusão da artéria mesentérica superior seguida da restauração do fluxo sanguíneo. Este modelo é útil para estudos que investigam causas oclusivas de IRI intestinal em medicina veterinária e humana.

Modelo de lesão de isquemia-reperfusão intestinal por roedores via oclusão da artéria mesentérica superior

Aprenda a induzir isquemia unilateral em membros posteriores de camundongos por ligadura da artéria femoral, confirmada por imagem laser Doppler. Este modelo é essencial para estudar doença arterial periférica e regeneração vascular.

Modelo murino de isquemia dos membros posteriores

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