Murino Procedimento de Transplante Renal
10 de julho de 2009
Transplante renal em ratos é um procedimento tecnicamente desafiador que requer cuidados pós-operatórios cuidado e tratamento para o sucesso.
O procedimento de transplante de rim em camundongos começa com a colheita de um órgão doador, na qual o rim esquerdo é removido do camundongo doador e armazenado em gelo. O rim direito é removido do camundongo receptor para abrir espaço para o rim doador. Em seguida, o rim doador é retirado do gelo e transplantado para o camundongo receptor.
O camundongo é deixado em recuperação por quatro dias antes de o rim nativo remanescente ser removido. Após sete dias, os níveis de creatinina são monitorados utilizando um analisador clínico portátil I STAT para avaliar a função do enxerto. Olá, sou Sarah Heimer do laboratório do Dr. Greg Hadley e do Departamento de Cirurgia de Transplante da Universidade Estadual de Ohio.
Hoje vamos mostrar um procedimento de transplante renal em camundongo. A cirurgia de transplante renal que você verá hoje será realizada por nossa neurocirurgiã especialista Jing Wing. Utilize este procedimento em nosso laboratório para estudar os eventos imunológicos da rejeição de transplante, bem como estratégias para prevenir a ocorrência de rejeição.
Então vamos começar. Para iniciar a coleta do órgão doador, realiza-se um pino de dor para garantir que o animal esteja completamente anestesiado; trabalhando em um campo estéril e utilizando instrumentos esterilizados, faça uma incisão mediana no camundongo anestesiado, do esterno até a sínfise púbica, e exponha o rim esquerdo deslocando o intestino lateralmente para o lado direito, a fim de realizar a perfusão do rim doador. Coloque suturas de seda TY 4-0 ao redor da aorta e da veia cava inferior abaixo e acima da artéria e veia renais.
Perfundido lentamente in situ com solução de Ringer lactato heparinizada fria por meio da aorta infrarrenal. Isole o rim esquerdo ligando e seccionando os vasos adrenais e testiculares, juntamente com alguns ramos lombares, com fio de seda 8-0. Em seguida, mobilize a junção da aorta e da veia cava inferior com a artéria e veia renais; coloque quatro laços de seda 8-0 ao redor da aorta e da veia cava inferior abaixo e acima da artéria e veia renais.
Para minimizar o sangramento, ligue primeiro a aorta abaixo do vaso renal. Em seguida, dissecione o ureter esquerdo do hilo renal até a bexiga. Exponha a junção ureterovesical utilizando retração caudal no domo da bexiga.
Certifique-se de evitar o ureter direito ao ressecar um pequeno retalho elíptico da bexiga contendo a junção vesicoureteral esquerda. Esse retalho será utilizado para reconstrução urinária por meio de uma anastomose de bexiga para bexiga. Em seguida, ligue a aorta acima da artéria e veia renais.
Perfunde lentamente a ilhota in situ com solução de Ringer lactato heparinizada fria por meio da aorta infrarrenal. Divida a aorta obliquamente aproximadamente dois milímetros abaixo da artéria renal. Por fim, remova o rim e seu suprimento vascular com o ureter ligado ao retalho da bexiga no bloco.
O rim deve ser armazenado em solução de lactato de Ringer sobre gelo até o momento de ser enxertado no receptor hospedeiro, e o camundongo doador deve ser eutanasiado por dislocação cervical sob anestesia. Como demonstrado anteriormente, o transplante no receptor é iniciado com um aperto para garantir que o animal esteja completamente anestesiado. Para iniciar a cirurgia, faça uma incisão mediana, cubra o intestino com gaze úmida e retrai-o cuidadosamente para o lado esquerdo.
Para realizar com sucesso este transplante renal, deve-se realizar uma anastomose entre o retalho aórtico do doador e a aorta do receptor. A veia renal do doador deve ser anastomosada à veia cava inferior do receptor e o retalho da bexiga do doador à bexiga do receptor. A artéria e veia renais do ureter direito.
Remova o rim após a ligadura. Isole cuidadosamente os ramos lombares e clampie o aorta infrarrenal e a veia cava inferior com dois clamps microvasculares de quatro milímetros. Passe uma sutura de náilon 10-0 através da espessura total da aorta e retrai-a para fazer uma incisão aórtica elíptica mediante um único corte de aproximadamente um quinto do diâmetro do vaso.
Em seguida, faça uma venotomia longitudinal perfurando a veia cava inferior com uma agulha de calibre 30 e estenda adequadamente utilizando tesoura microcirúrgica. Irrigue a aorta e a veia cava inferior com solução salina heparinizada para remover sangue intraluminal ou coágulos. Retire o rim doador do gelo e posicione-o na região flanco direita do camundongo.
Coloque dois pontos de fixação nos ápices proximal e distal da aortotomia do receptor com o retalho aórtico do doador. Realize uma anastomose término-lateral entre o retalho aórtico do doador e a parede anterior da aortotomia do receptor utilizando dois a três pontos contínuos de náilon 10-0 na face externa da aorta. Após girar o enxerto renal do doador para o flanco esquerdo do receptor.
Repita o procedimento anterior entre o enxerto aórtico do doador e a parede posterior da aorta do receptor. É importante lembrar que a anastomose da veia e da artéria deve ser concluída dentro de 20 minutos. O enxerto também deve ser lavado com soro fisiológico frio várias vezes durante a anastomose.
Realize uma anastomose término-lateral entre a veia renal do doador e a parede posterior da veia cava inferior do receptor utilizando quatro a cinco suturas contínuas de náilon 10-0 no interior da veia cava inferior. Feche a parede anterior da veia cava inferior e a veia renal do doador com quatro a cinco suturas contínuas no exterior da veia cava inferior. O próximo passo é dividir a cúpula da bexiga do receptor.
Interrompa o sangramento com eletrocautério. Uma vez concluída a fixação, faça um pequeno corte na cúpula e coloque dois pontos de sustentação de náilon 10-0 para anastomosar o retalho pequeno da bexiga do doador com a cúpula da bexiga do receptor; suture cada lado da anastomose com oito a dez pontos contínuos. Por fim, feche o abdome em duas camadas com suturas contínuas de vicril sintético absorvível estéril 4-0.
O cuidado pós-operatório começa com a administração de uma única injeção intramuscular de penicilina. O receptor do transplante também recebe 0,05 miligramas por quilograma de buprenorfina por via intramuscular no dia zero e no dia um após a cirurgia para controle da dor, além de suprimento contínuo de água contendo sulfametoxazol e trimetoprima. As primeiras 24 horas após a operação, o animal é mantido em uma incubadora com temperatura controlada.
Os pontos de pele são removidos duas semanas após a cirurgia. A remoção do rim nativo remanescente é essencial para que a diminuição da função do enxerto renal possa ser monitorada por meio de medições de creatinina sérica. Normalmente é realizada entre quatro e sete dias após o enxerto inicial do rim doador e envolve os principais passos utilizados ao excisar o rim do camundongo doador.
A anestesia com isoflurano é utilizada para sedar o animal hospedeiro, permitindo a coleta de amostras de sangue. Os níveis quantitativos de creatinina em sangue total por via retro-orbital são utilizados como indicador para avaliar a função do enxerto e são determinados com um analisador clínico portátil I stat. As unidades convencionais são convertidas para unidades SI multiplicando-se as unidades convencionais por 88,4.
A concentração de creatinina é expressa em mícromols por litro. Os animais geralmente se recuperam duas a três horas após a cirurgia e exibirão comportamento normal de camundongo após a remoção do rim nativo remanescente. A sobrevivência do animal depende da função do enxerto renal, que pode ser avaliada por exames diários da saúde geral do animal e da creatinina.
Medição de sangue total utilizando um analisador clínico portátil i-STAT como referência. Um camundongo normal não transplantado apresenta nível de creatinina próximo a 20 micromolar. A disfunção do enxerto renal é considerada quando o camundongo apresenta sinais de doença e o nível de creatinina está elevado, próximo a 100 micromolar.
Acabamos de mostrar a você o procedimento para transplante renal em camundongo. Embora este procedimento seja tecnicamente desafiador, nosso laboratório obteve grande sucesso na sua realização. Isso é tudo.
Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.
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Visão Geral
O transplante renal em camundongos é um procedimento tecnicamente desafiador que exige cuidados e tratamentos pós-operatórios cuidadosos para o sucesso. O procedimento envolve a remoção do rim do doador e seu transplante no camundongo receptor, seguido de monitoramento da função do enxerto.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Biologia do Transplante
- Modelos de Camundongo
- Cuidados Pós-operatórios
Contexto
- O transplante renal é um procedimento crítico na pesquisa.
- Requer técnicas cirúrgicas precisas e monitoramento rigoroso.
- Compreender a função do enxerto é essencial para o sucesso.
- Modelos de camundongos são comumente utilizados em estudos de transplante.
Objetivo do Estudo
- Demonstrar o procedimento de transplante renal em camundongos.
- Destacar a importância dos cuidados pós-operatórios.
- Avaliar a função do enxerto por meio da monitorização dos níveis de creatinina.
Métodos Utilizados
- Coleta do rim esquerdo do camundongo doador.
- Remoção do rim direito do camundongo receptor.
- Transplante do rim doador para o camundongo receptor.
- Monitoramento dos níveis de creatinina utilizando um analisador clínico portátil I STAT.
Resultados Principais
- O rim doador é transplantado com sucesso no camundongo receptor.
- A recuperação pós-operatória é monitorada durante quatro dias.
- Os níveis de creatinina são avaliados após sete dias para verificar a função do enxerto.
- O procedimento demonstra a viabilidade do transplante renal em camundongos.
Conclusões
- O transplante renal em camundongos é um modelo viável para estudar a função renal.
- A monitorização cuidadosa pós-operatória é crucial para o sucesso.
- Este modelo pode auxiliar na compreensão da biologia do transplante.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O estabelecimento de modelos confiáveis de transplante renal em camundongos permite a redução mecanicista de riscos de candidatos a imunoterapias direcionados às vias de rejeição de transplantes. Este procedimento sustenta a validação pré-clínica de biológicos e moléculas de pequeno porte, fornecendo um sistema relevante para a avaliação da sobrevida e função do enxerto. O monitoramento quantitativo da creatinina por meio de analisadores portáteis oferece alinhamento translacional de biomarcadores para decisões de avanço ou interrupção no estágio inicial de descoberta.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêuticos
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a investigação de hipóteses imunológicas em modelos de rejeição de transplante por meio de resultados controlados de sobrevida do enxerto.
- Valor Operacional: Oferece um fluxo cirúrgico padronizado com taxa de sucesso superior a 90%, reduzindo a variabilidade em estudos de validação de alvos.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Valor Científico: Gera leituras quantitativas de creatinina em sangue total utilizando analisadores I-STAT para avaliação da resposta dose-resposta de compostos imunomoduladores.
- Valor Operacional: Estabelece protocolos reprodutíveis de cuidados pós-operatórios, incluindo administração de penicilina e sulfatrim, para monitoramento consistente da função do enxerto.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Valor Científico: Apoia a modelagem de sistemas relevantes para doenças ao permitir a avaliação longitudinal da função do enxerto por meio de medições seriadas de creatinina.
- Valor Operacional: Facilita a continuidade pré-clínica ao permitir a nefrectomia nativa no dia 4-7 para isolar a função do rim doador e reduzir riscos mecanicistas.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este método integra-se ao contínuo de descoberta, desde a validação do alvo até a avaliação pré-clínica, fornecendo métricas quantificáveis da função do enxerto que orientam a identificação de compostos líderes e o avanço ajustado ao risco.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses sobre alvos imunomoduladores por meio de alterações mensuráveis nos níveis de creatinina, refletindo lesão ou proteção do enxerto.
- Triagem: Garante prontidão do ensaio por meio de controle padronizado da lesão por reperfusão e prevenção de trombose durante a anastomose.
- Análises: Permite medições quantitativas da variável dependente creatinina em sangue total, em mícromols por litro, com limiar de disfunção próximo a 100 µmol/L.
- Pesquisa Translacional: Conecta-se à continuidade pré-clínica utilizando a creatinina como biomarcador translacional alinhado à avaliação clínica da função do enxerto.
- Reutilização Empresarial: Estrutura o procedimento como uma plataforma reutilizável para equipes de imunologia e nefrologia que estudam mecanismos de rejeição em múltiplas modalidades terapêuticas.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Reduz a ambiguidade mecanicista na imunologia de transplantes ao fornecer um modelo validado com controles definidos de lesão por reperfusão.
- Valor Operacional: Garante padronização por meio da especificação do fio de sutura (nylon 10-0) e dos protocolos de perfusão com ringer lactato heparinizado.
- Valor Estratégico: Melhora as decisões de prosseguir ou interromper ao associar o aumento da creatinina à disfunção do enxerto, permitindo a interrupção precoce de candidatos ineficazes.
- Impacto no Portfólio: Apoia a priorização ajustada ao risco por meio de limiares objetivos de função do enxerto derivados do monitoramento seriado da creatinina.
Considerações sobre a Implementação
- Exige experiência microcirúrgica em técnicas de anastomose vascular e reconstrução ureteral.
- Depende do acesso a analisadores clínicos portáteis I-STAT para quantificação pontual da creatinina.
- Necessita de protocolos padronizados no pós-operatório, incluindo profilaxia antibiótica e controle da dor.
- Envolve considerações de adaptação para diferentes linhagens de camundongos, que afetam o tamanho vascular e o manuseio do fio cirúrgico.
- Limitado pela janela de 20 minutos para conclusão da anastomose, a fim de prevenir trombose e garantir a viabilidade do enxerto.
