Name: Murino Procedimento de Transplante Renal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-10T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: Aprenda o procedimento de transplante renal em camundongos, incluindo a colheita do rim doador, anastomose vascular e monitoramento pós-operatório da função do enxerto por meio dos níveis de creatinina.

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Estes estudos foram suportados em parte pelo financiamento pelo NIH R01 AI36532 para GAH. Gostaríamos de agradecer o apoio de destaque no transplante de patologia fornecidos pelo Dr. Tibor Nadasdy, ea orientação de valor inestimável e previsão fornecida pelo falecido Dr. Charles G. Orosz em iniciar este esforço de pesquisa.

Colheita de doadores de órgãos (2): <ol><li> Anestesiar o doador utilizando 65mg/kg IP pentobarbital; anestesia é mantida por isoflurano (2-3%). </li><li> Faça uma incisão na linha média do esterno às pubis para entrar no abdômen do doador e expor o rim esquerdo, deslocando o intestino lateralmente para o lado direito. </li><li> Isolar o rim esquerdo por ligadura e dividindo os vasos adrenal e testicular com um fio de seda 8-0. </li><li> Mobilizar a aorta acima de sua junção com a artéria e veia renal. </li><li> Mobilizar a veia cava inferior (VCI) acima e abaixo de sua junção com a artéria e veia renal. </li><li> Ligadura da aorta abaixo da artéria renal e veia com um fio de seda 8-0 para minimizar o sangramento. </li><li> Dissecar o ureter esquerdo do hilo renal até a bexiga. </li><li> Expor a junção ureterovesical usando retração caudal na cúpula da bexiga. </li><li> Especiais de consumo um patch, pequena elíptica da bexiga contendo a junção ureterovesical esquerdo, utilizado para a reconstrução urinária através de uma anastomose da bexiga a bexiga. O ureter direito não está incluído com a bexiga. </li><li> Ligadura da VCI abaixo da artéria renal e veia com um fio de seda 8-0. </li><li> Ligadura da aorta acima da artéria renal e veia e, lentamente, perfundir o enxerto in situ com 0,4 ml de 0,2 frio, heparinizado solução de Ringer lactato através da aorta infra-renal. </li><li> Ligadura da VCI acima da artéria renal e veia com um fio de seda 8-0. </li><li> Transecto da veia renal na sua junção com o IVC. </li><li> Divida a aorta obliquamente, cerca de 2 milímetros abaixo da artéria renal. </li><li> Remover o rim e sua fonte vascular com ureter anexado ao remendo de bexiga em bloco. Loja em solução Ringer com lactato no gelo. </li><li> Euthanize o mouse doador por deslocamento cervical sob anestesia. </li></ol> Transplante de destinatário (2): <ol><li> Anestesiar o destinatário IP com 65 mg / kg pentobarbital e manter a anestesia com isoflurano (2-3%). </li><li> Faça uma incisão na linha média, cobrir o intestino com uma gaze molhada e com cuidado retirar-la para o lado esquerdo. </li><li> Ligadura do ureter direito, artéria e veia renal, e remover o rim direito. </li><li> Cuidadosamente isolar e cross-clamp da aorta infra-renal e veia cava inferior com duas pinças de 4 mm microvasular após a ligadura dos ramos lombares. </li><li> Coloque um fio de náilon 10-0 através de uma espessura total de aorta e retrair para fazer uma aortaotomy elíptica por um único corte (cerca de um quinto do diâmetro do vaso). </li><li> Faça uma venotomia longitudinal perfurando a veia cava inferior com uma agulha de calibre 30 e estender adequadamente com microtesoura. </li><li> Irrigar tanto a aorta e veia cava inferior com solução salina heparinizada para limpar o sangue intraluminal ou coágulos. </li><li> Remover o rim de doador do gelo e coloque-o intra-abdominal no flanco direito do mouse. O rim do doador é mantida úmida com uma gaze embebida com solução salina fria. </li><li> Coloque duas suturas permanecer no ápice proximal e distal do aortaotomy destinatários com a braçadeira aórtica doadores. </li><li> Faça uma anastomose término-lateral entre a braçadeira aórtica doador ea parede anterior do aortaotomy destinatários, utilizando 2 ~ 3 contínua 10-0 suturas de nylon na parte externa da aorta. </li><li> Vire o enxerto renal de doador até o flanco esquerdo do destinatário. repita o procedimento anterior entre a braçadeira aórtica doador ea parede posterior da aortaotomy destinatários </li><li> Executar uma anastomose término-lateral entre a veia do doador renal e da parede posterior da VCI destinatários, utilizando 4-5 contínua 10-0 suturas de nylon no interior da VCI. e, em seguida, a parede anterior do IVC e doadores veia renal são fechadas com 4 ~ 5 sutura contínua fora da VCI. </li><li> Anastomose da veia e artéria ambos deve ser concluído dentro de 20 minutos. </li><li> Lavar o enxerto com solução salina fria várias vezes durante a anastomose. </li><li> Divide a cúpula da bexiga destinatário, e parar o sangramento com cauterização. </li><li> Faça um pequeno corte na cúpula. </li><li> Coloque duas suturas estadia de nylon 10-0 para os doadores anastomize bexiga pequena mancha com a cúpula da bexiga destinatários. Cada lado da anastomose é suturada com 8 ~ 10 pontos contínuos. </li><li> Fechar o abdômen em duas camadas com 4-0 estéril, fio absorvível sintético vicryl. </li><li> Dê ratos destinatário salina morna 0,4 ml durante a cirurgia por injeção intermitente IV. </li></ol> Cuidados pós-operatórios de destinatário <ol><li> Após o fechamento do abdome, uma única injeção intramuscular de penicilina (500U/10g) é administrado (2). </li><li> Além disso, os destinatários recebem buprenorfina 0,05 mg / kg por via intramuscular no dia 0 e cirurgia dia pós 1 para dor. Após a cirurgia, pacientes transplantados recebem água contendo sulfatrim (100mg/kg) até que o experimento é terminated. </li><li> Para primeiras 24h pós-operatório os ratos são mantidos em uma temperatura controlada incubadora. </li><li> Camundongos geralmente se recupera da anestesia dentro de 1 hora da operação e recebem comida regular e água ad libitum. </li><li> Suturas são removidas duas semanas após a cirurgia. </li></ol> Destinatário nefrectomia <ol><li> Anestesiar o destinatário 4 ~ 7 dias pós-transplante renal com 65 mg / kg IP pentobarbital; anestesia é mantida por isoflurano (2-3%). </li><li> Abrir o abdómen através de uma incisão mediana. </li><li> Cobrir o intestino com solução salina, gaze e com cuidado retirar-la para o lado direito. </li><li> Remover o rim esquerdo após ligadura à esquerda ureter veia renal e artéria. </li><li> Fechar o abdômen em duas camadas com fio absorvível 4-0 vicryl sintéticos. </li></ol> As determinações de creatinina Sangue Total <ol><li> Semanais para coleta de sangue a cada duas semanas, inferior a 0,2 cc é realizada submandibularly sem anestesia ou retro-orbital sob anestesia isoflurano. </li><li> Quantitativas dos níveis de creatinina no sangue são determinados utilizando um I-Stat Analyzer portátil Clínica (Heska Corp, Fort Collins, CO). </li><li> Unidades convencionais (mg / dl) são convertidos em unidades SI de micromol / L multiplicando as unidades convencionais por 88,4. </li></ol>

<ol><li>Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+transplants+in+mice.+An+analysis+of+the+immune+status+of+mice+bearing+long-term%2C+H-2+incompatible+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22JExpMed%22%5BJournal%5D)">Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants.</a> JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).</li>
<li>Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+techniques+for+kidney+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved techniques for kidney transplantation in mice.</a> Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).</li>
</ol>

Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela The Ohio State University IACUC.

Efetuamos cerca de 1200 casos de transplante renal em ratos com uma taxa de sucesso técnico de&gt; 90%. Comparado com o transplante cardíaco, a taxa de sucesso de transplante renal é geralmente baixa. No entanto, nosso laboratório tem mantido uma alta taxa de sucesso (&gt; 90%) de transplante renal. Os pontos-chave para o sucesso são para reduzir as lesões de reperfusão a ambos os rins de doadores e receptores, bem como minimizar o sangramento e trombose durante todo o procedimento e pós-operatório. Os seguintes fatores...

<table><tbody><tr><td>i-STAT</td><td>Outro</td><td>HESKA</td><td>Cat 5101</td><td></td></tr><tr><td>Cartucho i-STAT</td><td>Outro</td><td>HESKA</td><td>CAT 5110-CREA</td><td></td></tr><tr><td>Sulfatrim</td><td>Outro</td><td>Actavis</td><td>R02109</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Outro</td><td>NOVAPLUS</td><td>CA-0474</td><td></td></tr><tr><td>Sutura 10-0</td><td>Cirurgia</td><td>Sharpoint</td><td>AK0100</td><td></td></tr></tbody></table>

murino procedimento de transplante renal

Murine Renal Transplantation Procedure

Transplante renal ortotópico em ratos é um procedimento tecnicamente desafiador. Embora o primeiro transplante renal em ratos foram realizadas por Russell et al mais de 30 anos (1) e refinada por Zhang et al anos depois (2), poucas pessoas no mundo têm dominado este procedimento. Em nosso laboratório temos realizado com sucesso 1.200 transplantes renais com ortotópico&gt; taxa de sobrevivência de 90%. Os pontos-chave para o sucesso incluem o controle rigoroso do sangramento reperfusão, e trombose, tanto durante o procedimento e pós-transplante, e uso de 10-0, em vez de 11-0 sutura para anastomoses. Pós-operatório cuidados e tratamento do destinatário é extremamente importante para o sucesso do transplante e da avaliação. Todos os destinatários do enxerto renal receber antibióticos sob a forma de uma injeção de penicilina imediatamente pós-transplante e sulfatrim na água de beber continuamente. Saúde animal global é avaliado diariamente e análises de creatinina no sangue são realizados rotineiramente com uma máquina portátil I-STAT para avaliar a função do enxerto.

Transplante renal em ratos é um procedimento tecnicamente desafiador que requer cuidados pós-operatórios cuidado e tratamento para o sucesso.

Murino Procedimento de Transplante Renal

O transplante ortotópico renal em camundongos é um procedimento tecnicamente desafiador. Embora os primeiros transplantes de rim em camundongos tenham sido realizados por Russell...

O procedimento de transplante de rim em camundongos começa com a colheita de um órgão doador, na qual o rim esquerdo é removido do camundongo doador e armazenado em gelo. O rim direito é removido do camundongo receptor para abrir espaço para o rim doador. Em seguida, o rim doador é retirado do gelo e transplantado para o camundongo receptor.O camundongo é deixado em recuperação por quatro dias antes de o rim nativo remanescente ser removido. Após sete dias, os níveis de creatinina são monitorados utilizando um analisador clínico portátil I STAT para avaliar a função do enxerto. Olá, sou Sarah Heimer do laboratório do Dr. Greg Hadley e do Departamento de Cirurgia de Transplante da Universidade Estadual de Ohio.Hoje vamos mostrar um procedimento de transplante renal em camundongo. A cirurgia de transplante renal que você verá hoje será realizada por nossa neurocirurgiã especialista Jing Wing. Utilize este procedimento em nosso laboratório para estudar os eventos imunológicos da rejeição de transplante, bem como estratégias para prevenir a ocorrência de rejeição.Então vamos começar. Para iniciar a coleta do órgão doador, realiza-se um pino de dor para garantir que o animal esteja completamente anestesiado; trabalhando em um campo estéril e utilizando instrumentos esterilizados, faça uma incisão mediana no camundongo anestesiado, do esterno até a sínfise púbica, e exponha o rim esquerdo deslocando o intestino lateralmente para o lado direito, a fim de realizar a perfusão do rim doador. Coloque suturas de seda TY 4-0 ao redor da aorta e da veia cava inferior abaixo e acima da artéria e veia renais.Perfundido lentamente in situ com solução de Ringer lactato heparinizada fria por meio da aorta infrarrenal. Isole o rim esquerdo ligando e seccionando os vasos adrenais e testiculares, juntamente com alguns ramos lombares, com fio de seda 8-0. Em seguida, mobilize a junção da aorta e da veia cava inferior com a artéria e veia renais; coloque quatro laços de seda 8-0 ao redor da aorta e da veia cava inferior abaixo e acima da artéria e veia renais.Para minimizar o sangramento, ligue primeiro a aorta abaixo do vaso renal. Em seguida, dissecione o ureter esquerdo do hilo renal até a bexiga. Exponha a junção ureterovesical utilizando retração caudal no domo da bexiga.Certifique-se de evitar o ureter direito ao ressecar um pequeno retalho elíptico da bexiga contendo a junção vesicoureteral esquerda. Esse retalho será utilizado para reconstrução urinária por meio de uma anastomose de bexiga para bexiga. Em seguida, ligue a aorta acima da artéria e veia renais.Perfunde lentamente a ilhota in situ com solução de Ringer lactato heparinizada fria por meio da aorta infrarrenal. Divida a aorta obliquamente aproximadamente dois milímetros abaixo da artéria renal. Por fim, remova o rim e seu suprimento vascular com o ureter ligado ao retalho da bexiga no bloco.O rim deve ser armazenado em solução de lactato de Ringer sobre gelo até o momento de ser enxertado no receptor hospedeiro, e o camundongo doador deve ser eutanasiado por dislocação cervical sob anestesia. Como demonstrado anteriormente, o transplante no receptor é iniciado com um aperto para garantir que o animal esteja completamente anestesiado. Para iniciar a cirurgia, faça uma incisão mediana, cubra o intestino com gaze úmida e retrai-o cuidadosamente para o lado esquerdo.Para realizar com sucesso este transplante renal, deve-se realizar uma anastomose entre o retalho aórtico do doador e a aorta do receptor. A veia renal do doador deve ser anastomosada à veia cava inferior do receptor e o retalho da bexiga do doador à bexiga do receptor. A artéria e veia renais do ureter direito.Remova o rim após a ligadura. Isole cuidadosamente os ramos lombares e clampie o aorta infrarrenal e a veia cava inferior com dois clamps microvasculares de quatro milímetros. Passe uma sutura de náilon 10-0 através da espessura total da aorta e retrai-a para fazer uma incisão aórtica elíptica mediante um único corte de aproximadamente um quinto do diâmetro do vaso.Em seguida, faça uma venotomia longitudinal perfurando a veia cava inferior com uma agulha de calibre 30 e estenda adequadamente utilizando tesoura microcirúrgica. Irrigue a aorta e a veia cava inferior com solução salina heparinizada para remover sangue intraluminal ou coágulos. Retire o rim doador do gelo e posicione-o na região flanco direita do camundongo.Coloque dois pontos de fixação nos ápices proximal e distal da aortotomia do receptor com o retalho aórtico do doador. Realize uma anastomose término-lateral entre o retalho aórtico do doador e a parede anterior da aortotomia do receptor utilizando dois a três pontos contínuos de náilon 10-0 na face externa da aorta. Após girar o enxerto renal do doador para o flanco esquerdo do receptor.Repita o procedimento anterior entre o enxerto aórtico do doador e a parede posterior da aorta do receptor. É importante lembrar que a anastomose da veia e da artéria deve ser concluída dentro de 20 minutos. O enxerto também deve ser lavado com soro fisiológico frio várias vezes durante a anastomose.Realize uma anastomose término-lateral entre a veia renal do doador e a parede posterior da veia cava inferior do receptor utilizando quatro a cinco suturas contínuas de náilon 10-0 no interior da veia cava inferior. Feche a parede anterior da veia cava inferior e a veia renal do doador com quatro a cinco suturas contínuas no exterior da veia cava inferior. O próximo passo é dividir a cúpula da bexiga do receptor.Interrompa o sangramento com eletrocaut&eacute;rio. Uma vez conclu&iacute;da a fixa&ccedil;&atilde;o, fa&ccedil;a um pequeno corte na c&uacute;pula e coloque dois pontos de sustenta&ccedil;&atilde;o de n&aacute;ilon 10-0 para anastomosar o retalho pequeno da bexiga do doador com a c&uacute;pula da bexiga do receptor; suture cada lado da anastomose com oito a dez pontos cont&iacute;nuos. Por fim, feche o abdome em duas camadas com suturas cont&iacute;nuas de vicril sint&eacute;tico absorv&iacute;vel est&eacute;ril 4-0.O cuidado pós-operatório começa com a administração de uma única injeção intramuscular de penicilina. O receptor do transplante também recebe 0,05 miligramas por quilograma de buprenorfina por via intramuscular no dia zero e no dia um após a cirurgia para controle da dor, além de suprimento contínuo de água contendo sulfametoxazol e trimetoprima. As primeiras 24 horas após a operação, o animal é mantido em uma incubadora com temperatura controlada.Os pontos de pele são removidos duas semanas após a cirurgia. A remoção do rim nativo remanescente é essencial para que a diminuição da função do enxerto renal possa ser monitorada por meio de medições de creatinina sérica. Normalmente é realizada entre quatro e sete dias após o enxerto inicial do rim doador e envolve os principais passos utilizados ao excisar o rim do camundongo doador.A anestesia com isoflurano é utilizada para sedar o animal hospedeiro, permitindo a coleta de amostras de sangue. Os níveis quantitativos de creatinina em sangue total por via retro-orbital são utilizados como indicador para avaliar a função do enxerto e são determinados com um analisador clínico portátil I stat. As unidades convencionais são convertidas para unidades SI multiplicando-se as unidades convencionais por 88,4.A concentração de creatinina é expressa em mícromols por litro. Os animais geralmente se recuperam duas a três horas após a cirurgia e exibirão comportamento normal de camundongo após a remoção do rim nativo remanescente. A sobrevivência do animal depende da função do enxerto renal, que pode ser avaliada por exames diários da saúde geral do animal e da creatinina.Medição de sangue total utilizando um analisador clínico portátil i-STAT como referência. Um camundongo normal não transplantado apresenta nível de creatinina próximo a 20 micromolar. A disfunção do enxerto renal é considerada quando o camundongo apresenta sinais de doença e o nível de creatinina está elevado, próximo a 100 micromolar.Acabamos de mostrar a você o procedimento para transplante renal em camundongo. Embora este procedimento seja tecnicamente desafiador, nosso laboratório obteve grande sucesso na sua realização. Isso é tudo.Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

Research

JoVE Journal

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