30 de novembro de 2006
Este filme eo protocolo são destinados a ajudar o aprendizado de transferência nuclear.
Portanto, realizamos transferência nuclear NU porque nosso grupo tem interesse em reprogramação. Este é um processo fascinante no qual o núcleo diferenciado pode ser reprogramado para um estado embrionário. Estes são os reagentes caso SUM e HCCV e esta é a hialuronidase.
E primeiro preparo um prato com, e isso irá para os incubadores para equilibrar com CO2. Estas são gotas, várias gotas para Turing que são cobertas com óleo mineral. Assim, eles calibram a atmosfera de CO2.
Agora, prepare uma gota de HCZB. Isso será usado para lavagem. Isso é mantido em dias elevados e novamente coberto com este óleo mineral.
Este alto, este cai com hialuronidase. Esta parte aqui são apenas gotas de HCCP. Estas são para lavagem.
Isso é para remover as células ulu do lado O. Esta etapa é aquecida, então ela aquecerá até que eu volte e retire os sinais de óleo dos camundongos e cubra tudo com óleo mineral. Aqui estão gotas de PVP para a limpeza da agulha e para colocar as células, e isto é HCCB mais Cyla B. E aqui realizarei as manipulações.
Ok, esta aqui é uma agulha colorida. O que estou fazendo agora é puxar uma agulha. Pronto, agora tenho uma agulha muito boa, bem fina.
E agora isto é uma micro-fornalha. Preciso cortar a agulha em uma posição específica para obter o tamanho certo para o pipeta de fixação. Aqueço a esfera de vidro, desço com a agulha até que ela derreta e se una a ela, e agora está quebrada.
Eu afasto isso. Veja que a agulha quebrada está perfeita. Agora desço aqui e aumento o calor.
Agora a bola de vidro ficará vermelha, derreterá, empurre a bola de vidro e ela fará uma curva. Isso é suficiente. Eu a retiro.
Você vê, então insiro a agulha. Acabamos de colocar a pipeta de fixação sob esta cabeça. Agora insira-a novamente no microscópio.
Micropipeta, capilar e eu carreguei com mercúrio. Eu o carreguei nesta ponta. Mercúrio carrega este capilar aqui com mercúrio.
Coloque-o no interior. Insira a agulha aqui nesta extremidade. Aperte bem, puxe para trás.
Girar no sentido horário aqui fará com que o mercúrio avance para a frente, permitindo que você o veja. E agora, a ponta no óleo. Está vendo? Então, agora estou descendo ao longo da agulha para obter a visão.
Expulse algumas gotas de mercúrio e aspire um pouco de QVP. Tudo bem. Em seguida, mova-o para cima novamente.
Vou até o HCCB e desço pelo orifício. Minha cabeça, vou até P, que é a pipeta de camundongo. Preciso preparar uma capilar para inseri-la aqui. Obrigado. Já. Bom.
Então, faça alguns capilares. Está bem. E no tubo, estou com a lei.
Eu venho da Suíça e comecei este trabalho há um ano; cheguei ao laboratório de K'S e comecei a aprender transferência nuclear. É realmente um ótimo lugar aqui e é maravilhoso trabalhar aqui. E, é claro, este é um experimento muito complexo e muitos problemas podem surgir durante sua realização.
Portanto, quando você começar, pode enfrentar problemas como muitas células lisando durante a nucleação ou durante a transferência. Ou então, você percebe que, embora a transferência seja bem-sucedida, elas não se desenvolvem. E sempre pode haver inúmeras razões para isso.
Quer dizer, você pode começar a partir do sistema de cultivo de todos os locais. Assim, sempre são necessários alguns controles, como as partes do controle genético ou alguns embriões fertilizados, para testar o sistema de cultivo e as incubadoras. E então você também precisa aprimorar as habilidades com o microscópio.
Então, é preciso muita prática até que você consiga, de forma confiável, inflar o lado e depois transferir de volta. Isso é apenas uma questão de prática e levará algumas semanas ou meses até que você domine bem. Caso contrário, estará pronto para experimentos prolongados.
Portanto, é bom reservar um dia inteiro para isso. E algo complicado no início também é a pipetagem com o camundongo. É importante não formar bolhas, controlar bem o procedimento e não perder a visão geral, ou especialmente danificar um clone, particularmente porque a camada externa, a chamada lúcita, está aberta; na verdade, é possível que, ao aspirar pela boca, você danifique esse clone e ele acabe vazando pela lúcita sonar.
Portanto, também é necessário ter cuidado para não haver óleo nesse tubo bucal. Não sugar demais e não soprar demais, mas essa habilidade é relativamente fácil de adquirir.
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Este vídeo e o protocolo têm como objetivo auxiliar na aprendizagem da transferência nuclear, um processo no qual um núcleo diferenciado é reprogramado para um estado embrionário.
A transferência nuclear permite o reprogramamento de núcleos diferenciados para um estado embrionário, oferecendo um modelo mecanicista para a redução de riscos epigenéticos na validação de alvos. Essa abordagem sustenta a confiança preditiva em estratégias de reprogramação celular relevantes para a medicina regenerativa e terapias derivadas de células-tronco. O entendimento dos princípios do reprogramamento nuclear orienta a descoberta em estágios iniciais, esclarecendo a reversibilidade dos processos de diferenciação e envelhecimento.
O método se insere no continuum de descoberta que vai da verificação de hipóteses sobre alvos até a identificação de compostos promissores, particularmente em ensaios de validação de mecanismos epigenéticos e reprogramação celular.