Transferência nuclear em oócitos de camundongos

Então, fazemos a transferência nuclear da NU porque nosso grupo está interessado em reprogramação. Este é um processo fascinante em que o núcleo diferenciado pode ser reprogramado em um estado embrionário. Estes são os reagentes caso SUM e HCCV e este é a hialuronidase.

E primeiro eu preparo um prato com, e isso vai para as incubadoras para equivaler a um CO2. Estas são gotas, são várias gotas para Turing que cobriram com óleo mineral. Então, eles calibram a atmosfera de CO2.

Agora faça a queda de HCZB. Isso será usado para lavar. Isso é alto em dias e novamente coberto por este óleo mineral.

Essa alta, isso cai com a hialuronidase. Esta parte aqui são apenas gotas de HCCP. Estes são para lavar.

Isso é para remover células ulu do lado O. Este estágio é aquecido para que aqueça até eu voltar e pegar os sinais de óleo dos ratos e cobrir tudo com óleo mineral. Isso aqui são gotas de PVP para limpeza da agulha e para colocar as células, e isso é HCCB mais Cyla B. E aqui vou fazer as manipulações.

Ok, isso aqui é uma cor de agulha. O que estou fazendo agora é puxar uma agulha. Tudo bem, agora eu tenho uma agulha muito bonita, muito fina.

E agora esta é uma micro forja. Eu tenho que cortar a agulha na posição certa para ter o tamanho certo segurando a pipeta. Eu aqueço a bola de vidro, desço com a agulha derretendo nela e agora ela está quebrada.

Eu afasto isso. Você vê que a agulha quebrada é perfeita. Agora eu vou até aqui, eu empurro o calor.

Agora a bola de vidro vai ficar vermelha, vai derreter, empurre a bola de vidro e ela faz uma curva. Isso é o suficiente. Eu o remova.

Você vê, então eu insiro a agulha. Acabamos de fazer a pipeta de retenção subcolocá-la nesta cabeça. Agora insira-o de volta no microscópio.

Micro pipeta, capilar e carreguei com mercúrio. Eu carreguei nesta dica. Mercúrio carregue este capilar aqui com mercúrio.

Ele vai para dentro. Coloque a agulha aqui nesta cabeça. Aperte bem, puxe-o para trás.

Girar no sentido horário aqui empurrará o mercúrio aqui para a frente para que você possa vê-lo. E agora a ponta no óleo. Ver? Então agora estou descendo a agulha para obter a visão.

Expulse algumas gotículas de mercúrio e sugue um pouco de QVP. Está tudo bem. E então mova-o para cima novamente.

Eu vou para o HCCB e desço o buraco. Minha cabeça, eu vou para P, que é a pipeta de rato. Preciso preparar um capilar para inseri-lo aqui. Obrigado.Já.Bom.

Então faça um pouco capilar. Okey. E no cano. Eu sou ley.

Estou vindo da Suíça e comecei este trabalho há um ano e vim para o laboratório K'S e comecei a aprender transferência nuclear. É realmente, é um ótimo lugar aqui e é ótimo trabalhar aqui. E, claro, este é um experimento muito complexo e muitos problemas podem surgir ao fazê-lo.

Então, quando você começa, pode encontrar problemas como muitas células lisando enquanto você nuclea ou enquanto faz a transferência. Ou então você descobre que, embora tenha transferido com sucesso, eles não se desenvolvem. E sempre há, pode haver inúmeras razões.

Quero dizer, você pode começar com o sistema de cultura de todos os sites. Portanto, sempre são necessários alguns controles, como as partes do controle genético ou alguns imperadores fertilizados para testar o sistema de cultura, as incubadoras. E então você também precisa melhorar as habilidades do microscópio.

Portanto, é preciso muita prática até que você possa inate o lado de forma confiável e depois transferir de volta. Isso é apenas uma questão de prática e levaremos algumas semanas ou meses até que você seja bom nisso. E, caso contrário, está pronto para longos experimentos.

Portanto, é bom reservar um dia inteiro para isso. E então algo complicado no começo também é a pipetagem do mouse. Então, para não fazer bolhas, para controlá-lo bem e não perder o descuido ou, especialmente, você também pode danificar um clone, principalmente porque a camada externa, o modo de lucita está aberto, é realmente possível quando você boca, você danifica aquele clone e ele meio que vaza daquele sonar lucita.

Então, quando também precisa ter cuidado para não ter óleo nesse tubo de boca. Não chupar muito e não soprar muito, mas isso é relativamente facilmente adquirido, essa habilidade.