Name: Rato de isolamento de células Adrenal Cromafim (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-05T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: Aprenda o isolamento de células cromafins da medula adrenal em ratos para estudos de acoplamento excitação-secreção. Este método fornece um sistema in vitro confiável para investigar processos neuroendócrinos.

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Abreviaturas: ACCs - Células Adrenal Cromafim, E. Soln - solução enzimática, E. DMEM - Modified Dulbecco Enriquecido Eagle Medium <ol><li> Preparação <ol><li> Adicionar papaína a quantidade desejada de E. Soln (40 unidades papaína / 1ml E. Soln.). </li><li> Ativar papaína com carbogênio por cerca de 15 minutos em gelo. Buffer de Locke oxigenar sobre gelo também. </li></ol></li><li> Dissecação <ol><li> Use 10/08 rato semana. </li><li> Antes de remover a digestão oxigenado tampão de Locke e colocar no gelo. </li><li> Consulte o vídeo para procedimento de dissecção. </li><li> Uma vez retirado, glândulas lugar em oxigenado tampão de Locke. </li></ol></li><li> Preparação de Gland <ol><li> Retire a gordura da glândula. </li><li> Faixa de córtex da glândula. </li></ol></li><li> A digestão enzimática <ol><li> Filtro estéril oxigenado papaína. </li><li> Fazer quatro piscinas de papaína oxigenada em uma placa de Petri. <ol><li> 3 piscinas deve ser de cerca 100uls. </li><li> Uma das piscinas deve ser de cerca 400uls. </li></ol></li><li> Lavar medulas através piscinas <ol><li> 1 através da 3 piscinas 100ul. </li><li> Em seguida, através da piscina 400ul </li><li> Pippette 300ul E. Soln e medula peças de piscina 400ul em tubo de microcentrífuga. </li><li> Qrap parafilme em microcentrífuga tubo e colocar em 37 ° C banho-maria por 20min. </li><li> Lembre-se de continuar a oxigenar restantes E. Soln contendo papaína. </li><li> Após 20 minutos estéril filtro mais E. Soln. </li><li> Substituir as antigas E. medulas banho Soln com o recém-filtrada E. Soln. </li></ol></li></ol></li><li> Triturações <ol><li> Aspirar e descartar E. Soln. </li><li> Lavar medulas em 1ml E. DMEM. </li><li> Aspirar e descartar E. DMEM. </li><li> Adicionar 300ul E. DMEM e triturar 20X com 1ml ponta. </li><li> Cortar ponta 200ul com lâmina de barbear estéril. </li><li> Triturar 5-10X com ponta 200ul corte. </li><li> Descartar E. DMEM medulas peças de banho. Medium irá conter detritos. </li><li> Adicionar 300uls fresco E. DMEM para medulas peças. </li><li> Triturar com a ponta 200ul 20x </li><li> Pippette E. DMEM para microcentrífuga pedaços de tubo withough medulas. Médio conterá ACCs livres. </li><li> Adicionar 300uls fresco E. DMEM para medulas peças. </li><li> Triturar medulas com uma agulha de seringa 23,5 calibre 20x. </li><li> Combine E. DMEM de ambas as triturações. Peças medulas não deve estar presente e deve agora ter uma aparência featherlike. </li></ol></li><li> Galvanização <ol><li> Microcentrífuga E. DMEM de as duas últimas etapas de trituração por 2,5 minutos a 3.7g s. </li><li> Ressuspender sedimento em 50uls-200 E. DMEM, dependendo experimentos subseqüentes. </li><li> Placa de 10 30uls em uma lamela de vidro. </li><li> Esperar 15 minutos para que as células aderem. </li><li> Adicionar 750uls de E. DMEM. </li></ol></li></ol>

Os autores não têm nada a declarar.

rato de isolamento de células adrenal cromafim

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

Adrenal medular cromafins sistemas de cultura de células são extremamente úteis para o estudo da secreção de excitação de acoplamento em uma configuração em vitro. Este protocolo ilustra o método utilizado para dissecar as supra-renais e, em seguida, isolar a região medular, removendo o córtex adrenal. A digestão da medula em células cromafins único é então demonstrada.

Rato de isolamento de células Adrenal Cromafim

Os sistemas de cultura de células cromafins da medula adrenal são extremamente úteis para o estudo do acoplamento excitação-secreção em ambiente in vitro. Este ...

Observação: Este vídeo não

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JoVE Journal

Biology

Biologia

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Isolamento de macrófagos do gânglio da raiz dorsal de camundongos usando dissociação mecânica

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Isolamento de Cortical Microglia com Imunofenótipo preservada e funcionalidades de murino Os recém-nascidos

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Imagem Plasma Membrane Deformações Com pTIRFM

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Microscopia Confocal para medir três modos de dinâmica de poros de fusão em células adrenal chromaffin

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Rato de isolamento de células Adrenal Cromafim

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