Name: Imagem de bioluminescência de heme oxigenase-1 Upregulation no Procedimento de Gua Sha (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-28T09:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Aprenda a imagem de bioluminescência para estudar a regulação da heme oxigenase-1 em camundongos após o procedimento de Gua Sha. Esta técnica permite monitorar em tempo real os efeitos sistêmicos desta terapia tradicional chinesa.

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K. Wong, Wong STC são suportados pelo financiamento do Funcional e Molecular Imaging Center, Brigham e hospital das mulheres K. Wong, Wong STC são suportados pelo Centro de Biotecnologia e Informática, The Methodist Hospital Research Institute, Weill Cornell Medical College. KK Kwong, I. Chen, JQ Ren são suportados pelo financiamento do A. Athinoula Martinos Center for Biomedical Imaging, Massachusetts General Hospital. Lenuta Kloetzer, Braden Kuo são suportados por fundos do Centro de Pesquisa neuroentérico, Massachusetts General Hospital Os autores agradecem os drs. Q. Xu X. Zeng e de imagem Optical Lab, Brigham e do Hospital da Mulher para ajuda técnica.

<ol><li> Feminino HO-1-luciferase camundongos transgênicos (idade de 4-6 semanas) pode ser comprado de Taconic Farms, Inc. Após a chegada, os ratos são colocados em uma instalação de alojamento dos animais durante pelo menos 4 dias para permitir acomodação. </li><li> Preparação para a imagem de bioluminescência: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Pesar cada rato HO-1. Peso do animal é necessário para calcular a dosagem de luciferina. </li><li> Depilação: Use um cotonete para aplicar removedor de pêlos Nair ® sobre o abdome e / ou traseira do animal. À espera de 5 a 10 segundos. Utilize um cotonete limpo para limpar o cabelo. Mergulhe um pedaço de tecido em água destilada para limpar o cabelo restante limpo. </li><li> Coloque um papel não-fluorescente preto (Strathmore Artagain ® papel preto) na plataforma de imagem de uma estação de 100 IVIS para reduzir o ruído de fundo. </li><li> Prepare luciferina (de Xenogen Corporation) solução na concentração de 7,5 mg / ml (dissolvida em estéril H 2 O). A dose de luciferina é o peso corporal 65,5 mg / kg. Assim, um mouse de 20 gramas requer injeção intraperitoneal de solução de luciferina 0,175 ml. Para conseguir isso, um volume de injeção única de luciferina solução (0.175ml) é pré-carregado a uma seringa com uma agulha de calibre 26 </li></ol></li><li> Gua Sha procedimento: Gua Sha é aplicado apenas uma vez antes de executar o protocolo de imagem de bioluminescência. Desde Gua Sha não é doloroso, o rato só precisa ser brevemente anestesiados com isoflurano para manter a calma. Gua Sha processo inclui as seguintes etapas: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Aplicar óleo de cozinha ou água destilada para lubrificar áreas da pele alvo de Gua Sha algumas vezes durante o procedimento de Sha Gua. </li><li> Repetidamente raspar o cabelo região livre da parte traseira do mouse em vigor suave, mas firme com uma colher de sopa de cerâmica ou uma colher de plástico. </li><li> A raspagem continua até que a pele fica vermelha de volta, que é um sinal de extravasamento de sangue por via subcutânea, geralmente atingida dentro de 2 a 3 minutos. </li></ol></li><li> Imagem de bioluminescência pode ser iniciado imediatamente ou várias horas após Gua Sha como HO-1 upregulation é construída lentamente ao longo de algumas horas. O procedimento para a imagem latente da bioluminescência é: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Anestesiar o rato em uma câmara de indução da anestesia preenchido com uma mistura de ar grade isoflurano (1,5%) e médicos. </li><li> Uma vez que o mouse está anestesiado, mova o mouse para a câmara de imagem na estação de imagem óptico IVIS 100. Posicione o mouse em decúbito dorsal (barriga para cima). A câmara de imagem é continuamente infundidos com 1,5% de isoflurano. A plataforma de imagem é aquecida a 37 ° C para manter o mouse quente. </li><li> Definir a aquisição de imagens em &quot;binning médio&quot; e tempo de exposição definido para ser 30 segundos. Começar a adquirir imagens. Configurar a máquina para repetir a aquisição de imagem a cada três minutos, manual ou automaticamente. Após a aquisição da primeira imagem, uma região de interesse (ROI) é desenhada para cobrir o tórax, abdominal, e região da cabeça. Este ROI é então copiado e colado às imagens a seguir usando &quot;Living Imagem ®&quot;, software que acompanha o IVIS 100 estação. </li><li> Intensidade do sinal é medido em fótons por segundo. Tempo para marcar a intensidade do sinal para chegar ao seu valor de pico e manter a imagem o mouse por cerca de 5 a 10 minutos após o horário de pico. </li><li> Quando a aquisição de imagens na posição supina é feito, flip o mouse e colocá-lo na posição prona (back up). Continue imagem do animal de 5 a 10 minutos com o ROI agora desenhadas para cobrir as costas ea região da cabeça no uso do &quot;imagem viva ®&quot; software. A escolha da imagem na posição prona, após a posição supina é arbitrária. Pode-se optar por começar com a posição prona, dependendo de os principais órgãos de interesse. Outra opção é a imagem posições supina e propenso a experimentos separados. </li><li> Quando a aquisição de imagem na posição prona é terminado, desligue o isoflurano eo movimento do mouse da câmara de imagem para a câmara de indução para se recuperar. A câmara de indução é agora infundido com ar médica e só o mouse normalmente acorda em menos de um minuto. </li><li> Salvar dados de imagem para pós-processamento. </li><li> Após o estudo de imagem inicial, aquisições de imagem adicionais são realizadas por vários dias após Gua Sha. Uma agenda de amostra é repetida imagem na hora 12 ª, 24 ª hora, 36 ª hora, 48 ª hora, 72 horas nd e 120 ª hora, mas o momento exato do calendário de imagem é flexível. Sessões de imagem adicionais podem ser adicionados se um longo acompanhamento é necessário. Antes de imagem, repita o procedimento de remoção do cabelo se o cabelo tem crescido de volta. </li></ol></li><li> Para o grupo controle, repita todo o procedimento, mas ignorar Gua Sha (passo 3). Se o mesmo grupo de ratos é utilizado tanto para controle e Gua Sha, o controle de experiment deve ser realizada preferencialmente antes do procedimento sha Gua ou, pelo menos, um mês depois. </li></ol> Resultados representativos: As imagens mostram a bioluminescência na figura 1 em upregulation vivo da HO-1 em resposta a Gua Sha. O gráfico da Figura 2 mostra a mudança quantitativa temporal sobre 120 horas em fluxo óptico (fótons / seg) de todo o corpo do mouse mesmo relacionadas com Gua Sha ... <img src="/files/ftp_upload/1385/figure1tmb.jpg" alt="figura 1" border="0" /> Figura 1. Da esquerda para a direita, as imagens representativas da vista frontal (supino) do mouse mesmo antes de Gua Sha, às 18 horas, 36 horas e 120 horas após a Gua Sha, respectivamente. Depois de Gua Sha, observa-se o progresso do aumento significativo intensidade de sinal em múltiplos órgãos, que abrangem as regiões do trato gastrointestinal, o trato genital, o fígado, rins (do ponto de vista de volta, não mostrado), e outros. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure1.jpg">clique aqui</a> para uma versão ampliada da figura 1. <img src="/files/ftp_upload/1385/figure2tmb.jpg" alt="figura 2" border="0" /> Figura 2. Mudança quantitativa do fluxo (fótons / seg) de todo o corpo rastreadas mais de 120 horas após Gua Sha no mouse mesmo da Figura 1. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure2.jpg">clique aqui</a> para ver uma versão ampliada da figura 2.

<ol><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+potential+therapeutics+based+on+in+vivo+spatiotemporal+transcription+patterns+of+heme+oxygenase-1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Selection of potential therapeutics based on in vivo spatiotemporal transcription patterns of heme oxygenase-1.</a> J Mol Med. 80, 655-6564 (2002).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada a declarar.

Transcrição de HO-1, uma forma induzível da heme oxigenase, é regulada por vários fatores, incluindo heme, peróxido de hidrogênio, radiação UV, hipóxia e stress físico. Imagens de corpo inteiro, como o relatado HO-1 protocolo de bioluminescência fornece uma visão rápida de expressão de HO-1 sistêmica em múltiplos órgãos. Em pequenos animais, imagem de bioluminescência permite alta sensibilidade in vivo em tempo real avaliação quantitativa longitudinal óptico de alterações na expressão genética sistêmica, como mostrado. ...

<table><tbody><tr><td>Luciferina</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>P/N 122796</td><td>Anteriormente Xenogen</td></tr><tr><td>IVIS 100</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td>Anteriormente Xenogen</td></tr></tbody></table>

imagem de bioluminescência de heme oxigenase-1 upregulation no procedimento de gua sha

Bioluminescence Imaging of Heme Oxygenase-1 Upregulation in the Gua Sha Procedure

Gua Sha é uma terapia popular tradicional chinesa que emprega raspagem da pele para causar subcutânea extravasamento de sangue microvascular e contusões. O protocolo de imagem óptica bioluminescente da HO-1-<em&gt; Luciferase</em&gt; Camundongos transgênicos reportados neste manuscrito oferece uma rápida<em&gt; In vivo</em&gt; Ensaio da upregulation da heme oxigenase-1 (HO-1) a expressão gênica em resposta ao procedimento Sha Gua. HO-1 tem sido conhecido para fornecer citoproteção contra o estresse oxidativo. A regulação alta de HO-1, avaliados pela saída bioluminescência, é pensado para representar uma resposta antioxidante de produtos hemoglobina circulante lançado pela Gua Sha. Gua Sha foi administrada por golpes repetidos de uma borda colher suave sobre a pele lubrificada nas costas ou outra parte do corpo alvo do camundongo transgênico até petéquias (hemorragias lasca) ou equimoses (manchas roxas) indicativo de extravasamento de sangue de capilares subcutâneos foi observada. Depois de Gua Sha, sessões de imagem de bioluminescência foram realizadas diariamente durante vários dias para acompanhar a dinâmica de expressão de HO-1 em vários órgãos internos.

Gua Sha, raspagem de pele tradicional chinesa terapêutica, causa extravasamento de sangue por via subcutânea microvascular. Relatamos um protocolo de imagem de bioluminescência de HO-1-<em&gt; Luciferase</em&gt; Camundongos transgênicos para demonstrar que Gua Sha upregulates heme oxigenase-1 (HO-1) em vários órgãos.

Imagem de bioluminescência de heme oxigenase-1 Upregulation no Procedimento de Gua Sha

O Gua Sha é uma terapia popular tradicional chinesa que utiliza a raspagem da pele para causar extravasamento sanguíneo microvascular subcutâneo e equimoses. O protocolo ...

Olá, sou Jeffrey Young da divisão de Neurorradiologia do Departamento de Radiologia do Brigham Women's Hospital, um hospital de ensino da Harvard Medical School. Olá, sou Brad Quo. Sou da unidade gastrointestinal e do Departamento de Medicina, bem como do Centro Martino de Radiologia do Massachusetts General Hospital.Hoje mostraremos um procedimento para a imagem de bioluminescência da regulação da oxigenase um em um modelo de camundongo vivo. Utilizamos esta técnica em nosso laboratório para estudar a upregulação sistêmica da oxigenação da hema. Um com um procedimento chamado guha, uma técnica da medicina tradicional chinesa que envolve raspagem da pele.Então vamos começar. Camundongos fêmeas transgênicos HO um com luciferase são pesados antes de serem anestesiados, para que a dosagem correta de Lucifer possa ser calculada posteriormente, antes do início da remoção dos pelos. Confirme, pela ausência do reflexo de pinçamento do dedo do pé, que os camundongos estão completamente anestesiados.Em seguida, use um cotonete para aplicar um creme depilatório sobre o dorso do animal. Espere de cinco a 10 segundos, depois use um cotonete limpo para remover o pelo. Depois disso, mergulhe um

bioluminescence-imaging-heme-oxygenase-1-upregulation-gua-sha

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Biologia

Imagem de bioluminescência de hipóxia induzida a atividade do fator-1α é aplicada para monitorar o desenvolvimento hipóxia intracraniana tumor em um câncer de mama modelo de cérebro de rato metástase.

Na imagem de bioluminescência vivo Tumor de mama Dynamics Hipóxia metástase do cancro cerebral em um modelo de rato

NADPH oxidase é a principal fonte de espécies reactivas de oxigénio (ROS) em fagócitos. Por causa da natureza efêmera de ROS, é difícil de medir e monitorar os níveis de ROS em animais vivos. Um método minimamente invasivo para quantificação de série de ROS em ratos vivos é descrito.

Imagem de bioluminescência de NADPH oxidase em diferentes modelos animais

Este artigo descreve a administração...

Imagem bacteriana Bioluminescent<em&gt; Em Vivo</em

Source: Hunt, A. M. A., et al. Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model. J. Vis. Exp.(2017).This video demonstrates the procedure for assessing infection clearance and healing progression in a wounded diabetic mouse using bioluminescent and microscopic images.

Bioluminescence Imaging to Track Bacterial Infection and Wound Healing in a Mouse Model

Nós descrevemos um método de imagem não-invasivo para distinguir as fases inflamatórias. Administração sistêmica de luminol revela áreas de inflamação aguda dependentes atividade da MPO em neutrófilos. Em contraste, a injeção de lucigenina permite a visualização de inflamação crônica dependente de atividade Phox em macrófagos.

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Este manuscrito descreve o uso de repórteres fluorogenic geneticamente codificado em um aplicativo de imagem latente da viver-pilha para o exame de estresse oxidativo induzido por xenobiótico. Esta abordagem experimental oferece inigualável resolução spatiotemporal, sensibilidade e especificidade, evitando muitas das deficiências dos métodos convencionais utilizados para a detecção de estresse oxidativo toxicológico.

Abordagens para avaliação de estresse oxidativo toxicológico usando sensores Fluorogenic geneticamente codificado de imagem

Descrevemos um não-invasivo na vivo de imagem protocolo que é simplificada e custo-benefício, utilizando o L-012, um analógico-luminol quimioluminescente, para visualizar e quantificar as espécies reativas de oxigênio (ROS) geradas em um modelo do rato excisional ferido.

Na Vivo Imagens de espécies reativas de oxigênio em um Murine ferida modelo

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O objetivo deste protocolo é induzir a produção transitória in vivo de níveis não letais de espécies reativas de oxigênio (EROs) na pele de camundongos, promovendo ainda mais respostas fisiológicas no tecido.

Estimulação de nichos de células-tronco e regeneração tecidual em pele de camundongo por fotogeração dependente de protoporfirina IX comutável de espécies reativas de oxigênio in situ

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Um protocolo padronizado de cobre Bian-Stone Gua Sha para o Tratamento da Síndrome de Fadiga Crônica em Indivíduos Humanos

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