Name: Heterotópico e Transplante ortotópico traqueal em ratos usados como modelos para estudar o desenvolvimento de doenças das vias aéreas obliterante (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-20T18:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Aprenda os modelos de transplante traqueal heterotópico e ortotópico em camundongos para estudar o desenvolvimento da doença obstrutiva das vias aéreas. Este método auxilia pesquisadores a compreender complicações pós-transplante.

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Os autores agradecem Christiane Pahrmann (Lab Manager).

<ol><li> Masculino Balb / C camundongos (8-12 semanas) são adquiridos a partir de Charles River Laboratories (Sulzfeld, Alemanha). Os ratos estão alojados em condições convencionais, standard alimentados com alimentos ratos e água ad libitum. </li><li> Isofluran 2% é usado para anestesia. </li></ol> PREPARAÇÃO DOS DOADORES <ol><li> Raspar o cabelo abdominal e desinfectar a área usando betaisodona. </li><li> Sob visão microscópica, realizar uma incisão mediana cervical a partir do nível da laringe ao esterno. </li><li> Retire a gordura subcutânea e os músculos correia para obter uma visão clara da traquéia. </li><li> Dissecar a traquéia de qualquer tecidos circundantes, como o esôfago, nervos, artérias e tecido conjuntivo. </li><li> Remover a traquéia todo (da laringe até a bifurcação). </li><li> Lave o transplante com solução salina fria e guardar o enxerto, a 4 ° C. </li><li> O doador é sacrificado por deslocamento cervical após a colheita da traquéia. </li></ol> BENEFICIÁRIO: transplante heterotópico <ol><li> Raspar o cabelo abdominal em uma ampla margem ao redor do local da incisão e desinfectar a área três vezes com betaisodona (betadine), seguido pelo álcool. Os olhos devem ser lubrificados com um produto de pomada oftálmica para evitar as córneas de secar. </li><li> Executar uma laparotomia mediana e coloque o intestino para uma luva, esterilizada moistured. </li><li> Espalhe o omento maior cuidado. Coloque o enxerto para o centro e fixar-lo com uma sutura única 8-0 (Prolene, Ethicon, Alemanha). </li><li> Cobrir integralmente o transplante com o omento maior e corrigir o enxerto com uma única sutura 8-0 (Prolene, Ethicon, Alemanha). </li><li> Realocar os intestinos de volta para o abdômen e lavar com soro fisiológico morno, estéril antes do seu encerramento. </li><li> Close up em 2 camadas - camada de parede abdominal e pele com padrão contínuo usando Prolene 7-0 para o músculo e 7-0 Vicryl para a pele. </li></ol> BENEFICIÁRIO: transplante ortotópico <ol><li> Raspar o cabelo abdominal em uma ampla margem ao redor do local da incisão e desinfectar a área três vezes com betaisodona (betadine), seguido pelo álcool. Os olhos devem ser lubrificados com um produto de pomada oftálmica para evitar as córneas de secar. </li><li> Divide os músculos cinta para visualizar todo o complexo laringotraqueal. </li><li> Dissecar cuidadosamente a traquéia dos tecidos circundantes, ter o cuidado de preservar os nervos laríngeos recorrentes. </li><li> Divida a três anéis da traquéia caudal da cricóide. O animal mantém a respiração fisiológica através da traqueostomia. </li><li> Garantir limpa bordas traqueal no receptor, assim como no enxerto. </li><li> O enxerto se interpõe entre os defeitos destinatário traqueal e orientada para manter a polaridade anatômica. </li><li> Usando 8-0 (Prolene, Ethicon, Alemanha), anastomose do enxerto de doador com a distal (mediastino) traquéia. O aspecto posterior da anastomose é realizada de forma contínua em execução. A face anterior é então completada com pontos interrompidos. </li><li> Remova qualquer secreções das vias aéreas. </li><li> A anastomose proximal é, então, completou da mesma forma como o distal. </li><li> Garantir a integridade das vias aéreas e respiração adequada e espontânea. </li><li> Mudar o local da alça muscular e fechar o camada de tecido subcutâneo e pele usando 6-0 (Vicryl, Ethicon, Alemanha) com padrão contínuo. </li><li> Uso de anestesia de injeção para o destinatário, pois o animal irá reter a respiração fisiológica através da traquéia. Uma combinação de 75/1/0.2 mg / kg de propofol, fentanil e medetomidina, respectivamente, é usado para anestesia ip em camundongos. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1: Doadores traquéia. 1A: Doadores traquéia in situ após a preparação. 1B: traquéia doadora excisadas. 1C: Doadores traquéia após a remoção. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: Modelo heterotópica. 2A: O enxerto é posicionado no centro do omento maior. 2B: O enxerto é fixado em ambas as extremidades com uma sutura simples. 2C: O enxerto é envolto em omento maior e fixada com uma sutura simples. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: Modelo ortotópico. 3A: O enxerto se interpõe entre os defeitos destinatário traqueal e da parede posterior é anastomosado na moda funcionamento contínuo. 3B: A parede anterior é completada com uma sutura simples. <img src="/files/ftp_upload/1437/1437Fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4: Histologia. 4A: Recuperado traquéia transplantada heterotópico após 28 dias no H + E staIning (15x). Observe a obliteração luminal 100%. 4B: Recuperado traquéia transplantada ortotópico após 60 dias no H + E coloração (15x). Obliteração luminal máxima alcançada é de aproximadamente 45%. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Modelo de Transplante heterotópico traqueal </td><td> Modelo de Transplante ortotópico traqueal </td></tr><tr><td> Vantagens </td><td> + Fácil de executar + Obliteração luminal com oclusão completa das vias aéreas após 28 dias + Carinho Sem físicas dos animais pela OAD </td><td> + Ventilação Física do enxerto + A administração da droga inalada possível + Fortes reações imunológicas, como a produção de anticorpos IgM alorreativas + Meio Physiological torácica + Anastomose traqueal-traqueal imita o ambiente clínico </td></tr><tr><td> Desvantagens </td><td> - Sem ventilação da traquéia transplantada - Não há uma avaliação de patógenos inalados possível - Inibição do transporte mucociliar e secreções retidas - Microambiente peritoneal, em vez de meio torácica </td><td> - Formação cirúrgica necessária - Obliteração luminal com app oclusão luminal. 45% após 60 dias - Os animais podem desenvolver sintomas de OAD </td></tr></tbody></table> Tabela 1: Vantagens e Desvantagens da heterotópica e Transplante ortotópico traqueal.

<ol><li>Adams, B., Berry, G., Huang, X., Shorthouse, R., Brazelton, T., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppressive+therapies+for+the+prevention+and+treatment+of+obliterative+airway+disease+in+heterotopic+rat+trachea+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Immunosuppressive therapies for the prevention and treatment of obliterative airway disease in heterotopic rat trachea allografts.</a> Transplantation. 69, 2260-2266 Forthcoming.</li>
<li>Adams, B., Brazelton, T., Berry, G., Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+respiratory+epithelium+in+a+rat+model+of+obliterative+airway+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The role of respiratory epithelium in a rat model of obliterative airway disease.</a> Transplantation. 69, 661-665 Forthcoming.</li>
<li>Deuse, T., Schrepfer, S., Reichenspurner, H., Hoyt, G., Fischbein, M., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+experimental+heterotopic+and+orthotopic+tracheal+transplantations+%26%23x2013%3B+when+to+use+which+model%3B+Transplant+Immunology+17%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Techniques for experimental heterotopic and orthotopic tracheal transplantations &#x2013; when to use which model; Transplant Immunology 17.</a> , 255-261 (2007).</li>
<li>Hele, D., Yacoub, M., Belvisi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heterotopic+tracheal+allograft+as+an+animal+model+of+obliterative+bronchiolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Research%22%5BJournal%5D)">The heterotopic tracheal allograft as an animal model of obliterative bronchiolitis.</a> Respiratory Research. 2, 169-183 Forthcoming.</li>
<li>Hertz, M., Jessurun, J., King, M., Savic, S., Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproduction+of+the+obliterative+bronchiolitis+lesion+after+heterotopic+transplantation+of+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Reproduction of the obliterative bronchiolitis lesion after heterotopic transplantation of mouse airways.</a> American Journal of Pathology. 142, (1993).</li>
<li>McDyer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+murine+obliterative+bronchiolitis+in+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+American+Thoracic+Society%22%5BJournal%5D)">Human and murine obliterative bronchiolitis in transplant.</a> Proceedings of the American Thoracic Society. 4, 37-43 Forthcoming.</li>
<li>Schrepfer, S., Deuse, T., Hoyt, G., Sheikh, A., Hoffmann, J., Reichenspurner, H., Robbins, R., Pelletier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+orthotopic+tracheal+transplantation%3A+the+stanford+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Experimental orthotopic tracheal transplantation: the stanford technique.</a> Microsurgery. 27, 187-189 (2007).</li>
</ol>

Sonja Schrepfer recebeu uma bolsa de pesquisa do Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/3-1).] Todos os animais receberam cuidados humanos, em conformidade com os Princípios de Laboratório Animal Care, experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela Sociedade Nacional de Pesquisa Médica e do Manual sobre Cuidados e Uso de Animais de Laboratório, publicado pela National Institutes of Health (Institutos Nacionais de Saúde publicação 85-23, revisado em 1985). Todos os animais foram obtidos a partir de Charles River Laboratories (Sulzfeld, Alemanha) e foram mantidos no biotério atendimento do Hospital Universitário Hamburg Eppendorf. Os animais receberam ração padrão e água ad libitum.

Mice estão disponíveis em diferentes transgeneic e modelo knockout e, portanto, adequado ao estudo de questões relacionadas com mecanicista OAD (4). Ambos os modelos de transplante de traquéia mostrado neste vídeo podem ser usados ​​como modelos confiáveis ​​para estudar o desenvolvimento OAD. No entanto, cada modelo demonstra vantagens e limitações. O transplante heterotópico de traquéia é de fácil execução e não requer treinamento cirúrgico especial (3, 5). A...

heterotópico e transplante ortotópico traqueal em ratos usados ​​como modelos para estudar o desenvolvimento de doenças das vias aéreas obliterante

Heterotopic and Orthotopic Tracheal Transplantation in Mice used as Models to Study the Development of  Obliterative Airway Disease

Obliterante das vias aéreas doença (OAD) é a principal complicação após o transplante de pulmão, que limita a sobrevivência a longo prazo (1-7). Para estudar a fisiopatologia, tratamento e prevenção da OAD, diferentes modelos animais de transplante de traqueia em roedores têm sido desenvolvidos (1-7). Aqui, usamos dois modelos estabelecidos de traquéia transplante, o modelo heterotópico e ortotópico e demonstrar suas vantagens e limitações. Para o modelo heterotópico, o doador traquéia é envolto em omento maior do destinatário, enquanto que o doador é anastomosado traquéia até o final-de-final da anastomose no modelo ortotópico. Em ambos os modelos, o desenvolvimento de lesões histológicas obliterante semelhante a OAD clínica tem sido demonstrada (1-7). Este vídeo mostra como executar ambos, o heterotópico, bem como a técnica de transplante ortotópico traqueal em ratos, e compara a evolução temporal do desenvolvimento OAD em ambos os modelos usando histologia.

Este vídeo mostra e compara dois modelos experimentais para estudar o desenvolvimento de doenças das vias aéreas obliterante (OAD) em camundongos, o modelo de transplante heterotópico e ortotópico traqueal.

Heterotópico e Transplante ortotópico traqueal em ratos usados ​​como modelos para estudar o desenvolvimento de doenças das vias aéreas obliterante

A doença obliterante das vias aéreas (DOVA) é a principal complicação após transplantes pulmonares que limita a sobrevida a longo prazo (1-7).
Para estudar o...

Os transplantes heterotópicos e ortotópicos de traqueia começam com a remoção da traqueia do doador para o transplante heterotópico. Uma incisão abdominal é feita no receptor e os intestinos são colocados sobre uma luva. A traqueia do doador é posicionada no centro do epiplon maior e fixada por dois pontos para o transplante ortotópico.Após uma incisão cervical ser feita no receptor, a traqueia é liberada do tecido circundante e cortada. Em seguida, a traqueia doador é inserida entre as duas extremidades da traqueia do receptor e as traqueias são suturadas. Olá, eu sou Sonya Refa.Sou professor de Imunologia e Cirurgia Cardíaca no Departamento de Cirurgia Cardiovascular do Centro Cardíaco Universitário de Hamburgo. Meu laboratório concentra-se em imunologia de transplantes e imunobiologia de células-tronco. Hoje vamos apresentar a vocês o modelo de transplante de tecido do Moon Auto e o modelo de transplante do rebento aqui.Olá, sou do laboratório TSI. Estamos utilizando o modelo de transplante heterotópico de traqueia em camundongos para estudar os mecanismos por trás do desenvolvimento de doenças obstrutivas das vias aéreas. E eu sou Carrie Wan, aluna da Universidade de Stanford e

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Bronquiolite obliterante é o impedimento-chave para a sobrevivência a longo prazo de transplantados de pulmão e à falta de um modelo robusto pré-clínica impede examinar imunopatogênese bronquiolite obliterante. Ao contrário de outros transplantes de órgãos sólidos, o transplante de pulmão vascularizado do mouse tem apenas recentemente foram desenvolvidos. Aqui nós mostramos o nosso modelo de bronquiolite obliterante desenvolvida de forma independente após murino de transplante de pulmão...

Desenvolvimento de bronquiolite obliterante em um modelo murino de transplante de pulmão ortotópico

Nós desenvolvemos um método simples, confiável e relativamente barata para a intubação traqueal em ratos através de laringoscopia direta utilizando um otoscópio com um espéculo 2,0 mm. Esta técnica é não traumático e pode ser usado para as medições repetidas em experiências crónicas. Achamos superior à traqueostomia ou relatado anteriormente técnicas não cirúrgicas.

Entubação endotraqueal em Ratos<em&gt; Via</em&gt; Laringoscopia direta Usando um otoscópio

A utilização de um modelo que simula a condição de doenças pulmonares em humanos é fundamental para o estudo da fisiopatologia e / ou etiologia de uma doença em particular e para o desenvolvimento da intervenção terapêutica. Aqui um método de intubação orotraqueal não invasivo que pode entregar diretamente materiais exógenos aos pulmões do rato é apresentado.

Não invasiva Intratraqueal intubação para estudar a Patologia e Fisiologia do Rato Lung

Para estudar o alotransplante combinado de órgãos sólidos e compostos vascularizados, descrevemos um novo modelo heterotópico de transplante de parede torácica, timo e coração em camundongos usando uma técnica de manguito cervical sem sutura.

A Microsurgical Modelo Novel para heterotópico, em bloco da parede torácica, Thymus, e Transplante Cardíaco em Ratos

Este artigo apresenta um método rápido e simples para a administração de bleomicina diretamente na traquéia do mouse através de intubação. As principais vantagens deste método é que ele é altamente reprodutível, fácil de dominar, e não requer equipamento especializado ou tempos de recuperação longos.

Um método melhorado para rápida de intubação da traqueia em Ratos

Estenose de enxerto representa um obstáculo crítico em substituição de engenharia de tecidos das vias respiratórias. Para investigar os mecanismos celulares subjacentes estenose, utilizamos um modelo murino de substituição traqueal de engenharia de tecidos com células mononucleares de medula semeado (BM-MNC). Aqui, nós detalhe nosso protocolo, incluindo a fabricação de andaime, BM-MNC isolamento, enxerto semeadura e implantação.

A propagação e a implantação de um enxerto traqueal biossintética engenharia de tecido em um modelo do rato

Diversos modelos animais de hérnia diafragmática congênita e oclusão traqueal fetal apresentam vantagens e desvantagens em relação a questões éticas, custo, dificuldade cirúrgica, tamanho, taxas de sobrevivência e disponibilidade de ferramentas genéticas. Este modelo fornece uma nova ferramenta para estudar o impacto da oclusão traqueal e do aumento da pressão luminal no desenvolvimento pulmonar.

Modelo de oclusão traqueal fetal transuterina em camundongos

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Um modelo heterotópico de camundongo para estudar o transplante laríngeo

O modelo de transplante traqueal intrapulmonar murino (TTPI) é valioso para o estudo da doença obliterativa das vias aéreas (DAO) após o transplante pulmonar. Oferece informações sobre o comportamento imunológico e angiogênico pulmão-específico na obliteração das vias aéreas após alotransplante com alta reprodutibilidade. Descrevemos aqui o procedimento do IPTT e seus resultados esperados.

Transplante de Traqueia Intrapulmonar Purino: Modelo para Investigação de Doença Obliterativa das Vias Aéreas Após Transplante Pulmonar

Teste de sensibilidade visual em lagartos usando um paradigma de condicionamento operante, que emprega a reprodução de vídeo de random-dot kinematograms e computer-generated invertebrados.

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Aprenda os modelos de transplante traqueal heterotópico e ortotópico em camundongos para estudar o desenvolvimento da doença obstrutiva das vias aéreas. Este método auxilia pesquisadores a compreender complicações pós-transplante.

Heterotópico e Transplante ortotópico traqueal em ratos usados ​​como modelos para estudar o desenvolvimento de doenças das vias aéreas obliterante (Vídeo) | JoVE Journal

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