Modelo de tumor hepático murino Bioluminescent

Olá a todos. Meu nome é Simon Regenron. Sou um dos médicos residentes em cirurgia no centro de pesquisa sobre câncer de cabeça e pescoço aqui na Irlanda.

Hoje vou mostrar a vocês uma técnica cirúrgica para induzir metástases hepáticas. Em um modelo de câncer, o fígado é um local comum de disseminação metastática e uma causa importante de mortalidade relacionada ao câncer. Apenas um pequeno percentual de pacientes é elegível para ressecção cirúrgica em casos de doença hepática avançada.

Portanto, são necessários terapêuticos inovadores para o tratamento dessa condição. Muitos modelos animais de metástases hepáticas não resultam em doenças semelhantes ao quadro clínico. O modelo que estou mostrando a vocês hoje é um modelo clinicamente relevante e é relativamente fácil de aprender, com taxas de sucesso muito boas.

Este modelo envolve dividir o baço em dois hemibaços. Um hemibaço é utilizado para a inoculação de células tumorais. Essas células tumorais viajam pela circulação porta até o fígado.

O outro baço hemi é deixado intacto, mantendo suas propriedades imunológicas. A linhagem celular que estou utilizando expressa estavelmente luciferase, permitindo a análise bioluminescente do crescimento tumoral in vivo. Portanto, este modelo permitirá o monitoramento não invasivo de terapêuticas para doenças hepáticas.

Ok, vamos em frente e iniciemos este procedimento hoje. Os instrumentos de que precisamos são tesoura de dissecação, porta-agulha, duas pinças pequenas, lâmina de bisturi tamanho 10, sutura de polipropileno 5-0 para fechamento da pele, sutura de poliglactina 4-0 para fechamento da camada peritoneal, laços de Vicryl 3-0 para divisão do baço, solução salina, agulha de insulina 29 gauge para injeção anestésica, agulha de insulina 26 gauge para injeção da suspensão tumoral, suspensão de células tumorais em meio livre de soro, anestésico injetável, marcador de pele e compressas estéreis pré-cortadas. O modelo murino que utilizarei hoje é o camundongo nu Athymic MF1.

Outros modelos, como o C57 e o BC, podem ser utilizados com linhagens celulares tumorais apropriadas. Uma placa aquecedora é usada e um anestésico geral injetável é administrado em um laboratório. A profundidade da anestesia é avaliada por meio da compressão do dedo do pé.

Não deve haver reflexo de retirada do dedo do pé ao apertar o dedo. O rato do tamanho de um joelho está adequadamente posicionado e fixado com fita adesiva, e o abdômen é preparado com Betadine e coberto de forma asséptica. É feita uma incisão subcostal, entra-se na cavidade abdominal, identifica-se o baço e exterioriza-se o mesmo.

O baço é isolado do restante do camundongo utilizando uma gaze estéril pré-cortada. Dois laços verticais são passados entre os dois pedículos vasculares e amarrados suavemente. O baço é dividido em dois hemibaços iguais.

Um hemiespleno é utilizado para a inoculação de células tumorais. As células tumorais são injetadas lentamente no hemiespleno para evitar vazamento. As células tumorais viajam pela circulação porta e chegam ao fígado.

Após 10 minutos de incubação, o hemiesplênio injetado é ressecado e o outro hemiesplênio é retornado à cavidade abdominal. Suturas absorvíveis e um ponto contínuo são utilizados para fechar a cavidade peritoneal, e sutura de polipropileno 5-0 não absorvível é usada para o fechamento da pele. A recuperação é realizada de forma rotineira.

O desenvolvimento da doença hepática pode ser avaliado ao longo do tempo utilizando imagem ivus 2D. O camundongo é anestesiado como anteriormente e o substrato Lucifer é administrado por via intraperitoneal. O camundongo é colocado sobre a platina na câmara a 37 graus.

A imagem é obtida durante três minutos e é produzida uma imagem sobreposta do camundongo com a luminescência detectada. Três semanas após o tratamento, o abdômen é aberto e é identificada uma doença hepática difusa. Em conclusão, esta técnica permite a indução do crescimento de células tumorais metastáticas localizadas no fígado, e a imagem por luminescência possibilita a visualização e quantificação do crescimento tumoral, bem como a aplicação na avaliação de respostas terapêuticas.