Remoção de insetos puparium: um método para investigação de pupas

-Para obter acesso à pupa em desenvolvimento, remova o pupário após o epitélio da pupa se separar da cutícula ou após o estágio de pupa P5. Para começar, coloque a pupa intacta com o lado ventral voltado para você. Use uma pinça para segurar o pupário no espaço vazio entre a extremidade anterior do invólucro e a cabeça da pupa. Em seguida, quebre e remova suavemente a parte anterior do pupário para expor a cabeça.

Mantendo a orientação ventral, use a pinça para criar pequenas quebras ao longo do eixo ântero-posterior do pupário e garantir que uma lacuna contínua seja formada no processo. Tenha cuidado para não danificar nenhum tecido da pupa diretamente abaixo. Em seguida, continue a quebrar o pupário da abertura para fora, uma porção de cada vez, e espalhe o invólucro rasgado no processo. Usando um pincel fino e úmido, pegue a pupa exposta para uma investigação mais aprofundada. No protocolo de exemplo, veremos como remover o pupário de Drosophila guttifera e preparar a pupa para imagens.

-Para iniciar a remoção do pupário, cole um pedaço de fita dupla-face em um pedaço de papel toalha. Coloque a pupa na fita dupla-face, com o lado ventral para cima. Localize o espaço entre o lado anterior do pupário e a pupa interna. Segure e remova o pupário ao redor dessa lacuna usando uma pinça e exponha o lado anterior da cabeça da pupa.

Insira a ponta de uma pinça movendo-a paralelamente ao eixo ântero-posterior. Levante a ponta da pinça para quebrar localmente o pupário. Repita esta ação até que a quebra atinja a parte posterior do pupário. Certifique-se de que uma lacuna seja formada entre o pupário e as pernas da pupa e quebre o lado ventral do pupário, minimizando os danos à pupa interna. Depois de quebrar o pupário o máximo possível, retire a pupa com um pincel fino. Coloque a pupa em um pedaço de papel de seda umedecido com ddH2O e colocado em uma placa de Petri de plástico. Tire fotos imediatamente, pois a pupa exposta é vulnerável e seca facilmente.