Ensaio de escalada com mosca: um método para testar a locomoção geral em Drosophila melanogaster

-Primeiro, obtenha um número definido de Drosophila adulta. A câmara de teste para o ensaio de escalada é composta por dois frascos colados juntos. Um destes frascos para injetáveis deve ser marcado com uma linha.

Sem anestesia com dióxido de carbono, que pode prejudicar o comportamento de escalada, transfira um determinado número de moscas para a câmara de teste. Permita que as moscas se recuperem por um período de tempo predeterminado. Com o lado marcado da câmara para baixo, bata firmemente na câmara em um mouse pad colocado em uma superfície sólida. Isso forçará as moscas para o fundo da câmara. O ensaio de escalada aproveita a tendência natural da Drosophila de subir contra a gravidade, um comportamento chamado geotaxia negativa.

Durante o teste, as moscas não devem ser expostas à luz solar direta porque as moscas podem exibir comportamento de fototaxia ou movimento em resposta ao estímulo luminoso. Registre o número de moscas que atingem ou passam a linha. Em seguida, obtenha a taxa de aprovação percentual dividindo esse número pelo número total de moscas testadas. Permita que as moscas se recuperem antes de repetir o teste. No exemplo, observaremos um ensaio de escalada com mosca sendo usado para avaliar a função motora de Drosophila após mutagênese química.

-Para começar, colete moscas homozigóticas de linhagens pertencentes à coleção mutagênica ENU de mutantes de Drosophila mapeados para o segundo cromossomo. Vire as moscas de 10 a 12 dias em uma câmara de teste sem anestesia, uma linha de cada vez, e deixe-as se recuperar por cinco minutos.

Com a linha de cinco centímetros marcada com o lado voltado para baixo, bata à força na câmara três vezes em um mouse pad colocado em uma superfície sólida para que todas as moscas comecem o ensaio na parte inferior. Observe a locomoção da mosca durante um período de 10 segundos. Registre o número de moscas que atingem ou ultrapassam a linha de cinco centímetros dentro desse tempo, bem como o número total de moscas testadas. Aguarde um minuto antes de iniciar um segundo teste. Repita um mínimo de três réplicas de teste por linha.