drosófila Dissecção da glândula acessória masculina: um método para isolar células secundárias

- Sob um microscópio de dissecção e em meio suplementado com soro, remova o trato reprodutivo de cada mosca com uma pinça. Primeiro, remova partes do trato digestivo que podem ter acompanhado o trato reprodutivo. Para isolar as glândulas acessórias e o ducto ejaculatório, remova os testículos, o bulbo ejaculatório e os terminalia. Lave o tecido por um a dois minutos em PBS para remover o soro. Em seguida, transfira-o para a solução de dissociação.

Para expor as células dentro das glândulas à solução de dissociação, segure o centro de cada glândula com uma pinça e corte a glândula com uma pinça afiada. Remova a porção proximal da glândula e o ducto ejaculatório para deixar para trás a extremidade distal das glândulas contendo a rara população de células secundárias responsáveis pela secreção de proteínas envolvidas no acasalamento. Por fim, transfira as pontas das glândulas acessórias para um tubo de microcentrífuga em preparação para a digestão. No protocolo a seguir, dissecaremos as glândulas acessórias para isolar células secundárias para análise do transcriptoma.

- Antes de iniciar o procedimento, corte e chame pontas redondas e largas de 200 microlitros para manusear as glândul