Drosophila melanogaster Dissecção do ovário: uma técnica para preparação de tecido ex vivo

- Para isolar os ovários das moscas Drosophila vivas, comece movendo uma fêmea anestesiada para um dos três poços de dissecação cheios de meio de dissecação de insetos pré-aquecidos. O meio ajudará a manter a integridade e a viabilidade do tecido.

Sob um microscópio de dissecação, separe o abdômen do tórax. Em seguida, mova o abdômen para um novo poço. Para isolar os ovários, segure o abdômen na extremidade posterior e raspe cuidadosamente os órgãos reprodutivos. Por fim, transfira os ovários para um poço fresco. Após esta etapa, você pode usar todo o ovário ou dissecá-lo em suas estruturas componentes.

Cada ovário de Drosophila é composto por vários ovaríolos, consistindo em uma cadeia de câmaras de ovos com níveis crescentes de maturidade. Para liberar os ovaríolos, prenda o ovário na extremidade posterior opaca e provoque cuidadosamente a bainha protetora ao redor do ovário até que os ovaríolos estejam devidamente separados.

No protocolo de exemplo, mostraremos a dissecção de ovários de Drosophila para seu uso em microscopia de tecido vivo e fixo.

- Depois de separar cinco moscas fêmeas anestesiadas de acordo com o protocolo de texto, sob o microscópio de dissecação, use dois pares de pinças para separar o tórax do abdômen. Em seguida, transfira cuidadosamente o abdômen para o segundo poço do prato. Usando um par de pinças para segurar o abdômen na extremidade posterior, use o outro par de pinças para empurrar lentamente os ovários para fora.

Em seguida, use a pinça para segurar um ovário individual pela extremidade posterior opaca e mova-o cuidadosamente para o terceiro poço do prato para provocar ou fixar. Provoque cuidadosamente a bainha protetora ao redor dos ovários usando um par de pinças para segurar a extremidade posterior e varrendo levemente uma agulha provocadora da extremidade posterior para a anterior.