Por que a análise de curva de sobrevida é importante para a validação da via endócrina?

Curvas de sobrevivência quantificam as respostas de organismos à exposição química, permitindo a detecção de efeitos que modulam a longevidade e refletem a perturbação de vias endócrinas. Isso fornece uma leitura funcional para priorizar alvos em estudos mecanicistas subsequentes.

Como o isolamento de coorte melhora a consistência do pipeline de descoberta?

Sincronizar a emergência das moscas por meio de postura controlada de ovos e remoção de adultos minimiza a variabilidade no desenvolvimento, garantindo que as diferenças observadas na longevidade resultem das condições experimentais e não da heterogeneidade etária. Isso aumenta a reprodutibilidade do ensaio em campanhas de triagem.

O que permite a comparação quantitativa entre grupos de exposição química?

Registrar moscas mortas em intervalos regulares permite o cálculo das porcentagens de sobrevivência, que são plotadas para gerar curvas médias de sobrevivência para cada condição. Essas curvas permitem a comparação estatística da longevidade mediana e das taxas de mortalidade.

Por que experimentos replicados são essenciais para a colaboração interfuncional?

Pelo menos três experimentos replicados garantem que as tendências de sobrevivência sejam robustas e não sejam influenciadas por variações aleatórias, proporcionando confiança às equipes de toxicologia para compartilhar dados com grupos de patologia e regulamentação. A replicação apoia o alinhamento sobre os perfis de segurança dos compostos.

Quais resultados estatísticos são necessários antes de implementar a triagem de longevidade?

A geração da curva de sobrevida requer o cálculo das porcentagens médias de sobrevida entre as réplicas, permitindo testes estatísticos como a análise de log-rank para determinar diferenças significativas entre os grupos controle e tratamento. Isso orienta decisões de prosseguir ou não prosseguir na avaliação inicial de segurança.

Protocolo de vida útil para Drosophila melanogaster: gerando curvas de sobrevivência para identificar diferenças na longevidade da mosca

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biologia

0 vistas • 3:28 min • April 30th, 2023

- Comece coabitando um determinado número de moscas da fruta Drosophila melanogaster machos e fêmeas em um frasco contendo meio de fubá. Isso permite uma densidade consistente de descendentes.

Permita que as moscas fêmeas ponham ovos. Em seguida, remova as moscas adultas. Os ovos se tornarão larvas, pupas e, finalmente, moscas adultas em um período de 10 dias. Novas moscas que emergem antes de sua coorte devem ser removidas antes do dia 9. Divida as moscas agora sincronizadas em grupos para as condições de controle e experimentais. A coabitação de moscas machos e fêmeas permite o acasalamento, removendo uma variável que afeta a expectativa de vida.

Depois de vários dias, separe as moscas por sexo em grupos. Colocar um número igual de moscas na condição experimental correspondente. A cada três dias, transfira as moscas vivas para um novo frasco e registre o número de moscas mortas. Repita esse processo até que todas as moscas morram.

Após pelo menos três experimentos replicados, plote a porcentagem média de moscas sobreviventes por dia para gerar curvas de sobrevivência médias para cada condição. Neste exemplo, veremos como gerar curvas de sobrevivência para coortes tratadas com produtos químicos desreguladores endócrinos.

- No protocolo de vida útil, primeiro coloque 20 frascos com oito fêmeas e quatro machos, cada um cheio de 10 mililitros de fubá, e coloque-os a 25 graus Celsius. Após quatro dias, descarte as moscas e coloque os frascos de volta na incubadora. No final da tarde do dia 9, remova todas as moscas recém-emergidas dos frascos e devolva-os à incubadora.

Após 16 a 24 horas, divida 250 moscas adultas de um dia de idade de ambos os sexos em quatro grupos sob anestesia leve com dióxido de carbono e transfira-os para frascos de 250 mililitros contendo alimento médio adulto, três suplementados com diferentes concentrações de EDC e um com o solvente EE2 sozinho. Mantenha as moscas a 25 graus Celsius por dois a três dias para permitir que elas acasalem. Em seguida, classifique cada coorte de moscas por sexo em dois grupos. Dentro de cada condição de tratamento para ambos os sexos, subdivida aleatoriamente cada grupo em cinco frascos paralelos a uma densidade de 20 indivíduos por frasco. Prepare uma planilha de vida útil na qual o número de moscas mortas seja subtraído do número de moscas sobreviventes da transferência anterior para que o número de sobreviventes em cada transferência seja obtido automaticamente.

Após três dias, transfira as moscas sem anestesia para novos frascos contendo o alimento correspondente ao mesmo tempo e verifique se há morte. Registre a idade das moscas e o número de moscas mortas. Repita a transferência a cada três dias até que todas as moscas morram.