0 visualizações • 4:49 min. • April 30th, 2023
- Comece montando uma larva limpa e anestesiada sob uma lamínula de vidro com a cabeça erguida. Em seguida, exponha a área de interesse empurrando suavemente a lamínula para rolar a larva e ajustar sua posição. Use imagens confocais para localizar as células neurais da larva. Identifique um axônio específico em uma das células neurais alvo como o local da lesão.
Em seguida, exponha o axônio alvo a um laser de dois fótons com uma potência maior do que a usada para imagens para induzir danos. Um laser de dois fótons é usado devido à sua capacidade de penetrar e localizar com precisão os danos no tecido vivo com danos mínimos ao tecido circundante.
Pare a exposição ao laser imediatamente quando houver dano ao neurônio alvo, resultando em axotomia ou corte do axônio. Por fim, imagine o neurônio lesionado para visualizar sua degeneração e subsequente regeneração nos pontos de tempo desejados.
No protocolo de exemplo, montaremos uma larva para microscopia, induziremos danos aos neurônios sensoriais larvais e rastrearemos a regeneração neural.
- Comece com uma anestesia das larvas. Em uma capela de exaustão, coloque uma placa de vidro de 60 milímetros em uma placa de Petri de plástico de
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