O ensaio CApillary FEeder (CAFE): um método para rastrear o consumo e a preferência alimentar em Drosophila

- Para se preparar para o alimentador capilar, ou ensaio CAFE, insira capilares de vidro graduados ou marcados cheios de alimentos líquidos coloridos, primeiro na extremidade inferior, através das pontas da pipeta em cima de um frasco experimental pré-montado. Certifique-se de que os capilares estejam bem posicionados na mesma altura e não estejam em contato com o aparelho.

Marque o nível inicial do menisco em cada capilar. Em seguida, aloje os frascos em um ambiente com temperatura e umidade controladas durante o experimento, substituindo os capilares conforme necessário. Durante o ensaio CAFE, as moscas móveis são desenfreadas e têm livre acesso à extremidade aberta inferior da micropipeta. As moscas se alimentam voluntariamente à medida que estendem sua tromba e ingerem o líquido, reduzindo o meio dentro do capilar.

Para rastrear o consumo e a preferência de alimentos por um determinado período de tempo, registre a descida do menisco da marca inicial para o nível no final desse período de capilares qualificados. No protocolo de exemplo, veremos o ensaio CAFE com o conjunto modificado para obter evaporação reduzida dos capilares cheios de líquido.

- Remova cuidadosamente a ponta da pipeta que está fechando uma das aberturas externas e insira um capilar de vidro cheio, extremidade inferior primeiro. Prenda o capilar colocando a ponta da pipeta de volta ao lado do capilar. Repita esta etapa para todas as soluções alimentares testadas.

Em seguida, coloque as extremidades capilares dentro de todos os frascos no mesmo nível, a 3 a 4 centímetros da tampa. Deixe alguma distância entre o papel de filtro para evitar que o capilar vaze. Use uma caneta marcadora para rotular a extremidade superior do líquido colorido. Rotule-os individualmente usando um código de faixa para garantir que os diferentes capilares possam ser identificados.

Coloque os ensaios CAFE preparados em uma caixa de plástico com uma incrustação quadriculada. Use um tampão de esponja para aplicar 100 microlitros de água doce a cada 24 horas para manter a umidade constante dentro do ensaio. Use quatro frascos separados cheios de 30 mililitros de H2O bidestilado como dispositivos de umidade e coloque-os ao lado dos ensaios CAFE na caixa plástica.

Cubra a caixa de plástico para criar um ambiente com umidade controlada durante o experimento. Transfira a caixa para uma posição segura em uma câmara climática com temperatura controlada, luz e umidade durante o período experimental. Antes de cada intervalo de 24 horas, anote as moscas mortas e use o número de moscas vivas para calcular o consumo por mosca para o período seguinte.

No final do ensaio e antes de substituir o capilar, mantenha o ensaio CAFE na posição vertical. Não remova a tampa e marque o menisco inferior do capilar. Descarte os dados se o final da marca não estiver abaixo da marca inicial. Substitua os capilares usados por capilares recém-preenchidos para experimentos de longo prazo a cada 24 horas.

Meça o declínio do menisco. Em seguida, descarte os capilares antigos. Em seguida, remova cuidadosamente os capilares do ensaio e armazene-os para coleta de dados. Verifique se o líquido dentro do capilar atingiu a extremidade inferior. Se o líquido dentro do capilar não atingir a extremidade inferior, descarte os dados.

Após o experimento, desmonte a configuração e lave os frascos, tampas e tampões de esponja em um banho de sabão. Em seguida, seque-os durante a noite em temperatura ambiente para uso posterior. Repita experimentos com os mesmos genótipos em pelo menos três dias diferentes. Usando um paquímetro, meça a distância entre o início e o fim da marca no capilar. Por fim, descarte os capilares após a medição.