0 visualizações • 3:26 min. • April 30th, 2023
- Permita que a Drosophila ponha ovos durante a noite em um prato contendo ágar suplementado com suco de uva para visualizar os ovos e coberto com fermento para estimular as moscas a acasalar e botar ovos. Para remover os ovos, adicione água destilada ao prato e limpe suavemente a superfície com um pincel. Em seguida, despeje a mistura através de uma malha de náilon colocada em uma bucha de plástico para coletar os ovos. Mergulhe os ovos em duas rodadas de alvejante a 7% para remover o córion, ou camada externa protetora, do embrião. Esse processo é chamado de descorionação.
Os ovos agora estão presos ao lado da bucha. Lave-os três vezes com água para remover o alvejante. Finalmente, use um pincel para transferir os ovos da bucha para os frascos para continuar o desenvolvimento ou para uso imediato em um experimento. No protocolo de exemplo, coletaremos e descorionaremos ovos de Drosophila em condições estéreis para criar moscas com microbiota definida.
- Coloque a malha de náilon em uma bucha de plástico para preparar a peneira para a coleta dos ovos. Se as mesmas moscas forem usadas no dia seguinte, transfira-as imediatamente para uma nova gaiola contendo placas de ágar suco de uva com fermento fresco. O prato de suco de uva na gaiola anterior contém os ovos da mosca-da-fruta. Remova as moscas mortas com um pincel limpo e tome cuidado para não quebrar o ágar. Enxágue a placa de ágar com água destilada e escove suavemente os ovos da superfície do ágar e, em seguida, despeje a pasta sobre a malha para coletar os ovos.
Esterilize o gabinete de biossegurança com etanol a 70% e acenda a luz UV. Pulverize todos os suprimentos não biológicos com etanol 70% e coloque-os imediatamente no gabinete de biossegurança e, em seguida, esterilize-os com luz ultravioleta.
- É fundamental garantir que uma boa técnica asséptica seja praticada ao trabalhar dentro ou ao adicionar ou remover novos materiais ao gabinete de biossegurança.
- Transfira a bucha com os ovos para um copo de amostra de 120 mililitros e despeje lentamente 90 mililitros de solução de hipoclorito de sódio a 0,6%, ou alvejante a 7%, na bucha, logo abaixo da borda. Usando uma pinça, mova periodicamente a bucha para cima e para baixo na solução para ressuspender os ovos. Transfira a bucha diretamente para um segundo copo de amostra pré-preenchido com 90 mililitros de alvejante.
No final do segundo tratamento com alvejante, os ovos devem começar a aderir às laterais da bucha. Descarte o alvejante e enxágue completamente a bucha com água estéril. Novamente, use uma pinça para ressuspender o ovo várias vezes durante cada lavagem. No final da terceira lavagem, a maioria dos ovos deve ser presa na lateral da bucha.
Usando um pincel estéril, transfira os ovos da lateral da bucha para a dieta estéril. Deixe as tampas soltas para permitir que o oxigênio entre no tubo. Os ovos transferidos serão visíveis na superfície da dieta.