Processamento de pernas de insetos para microscopia de fluorescência: um método para preservar estruturas neuromusculares para imagens

- Para começar, mergulhe os insetos anestesiados em solução de etanol a 70% para reduzir a hidrofobicidade da cutícula. Em seguida, lave e permeabilize o tecido com solução salina tamponada com fosfato contendo um detergente por pelo menos 30 minutos para permitir a penetração do tecido durante a fixação.

Em seguida, remova a cabeça e o abdômen do tórax. Use uma pinça para aplicar uma leve pressão na junção coxa-tórax e retire a perna. Coloque cuidadosamente as pernas em solução gelada de paraformaldeído a 4% durante a noite para permitir que ela penetre no tecido. O paraformaldeído fixa os tecidos por meio da reticulação de proteínas.

Em seguida, remova a solução de fixação e lave o tecido várias vezes com solução salina tamponada com fosfato contendo detergente. Antes de montar, coloque as pernas em tampão de montagem puro ou ligeiramente diluído por pelo menos um dia para fornecer tempo suficiente para que o tampão entre no tecido.

Por fim, monte as pernas em uma gota de meio de montagem. Use um espaçador entre a lâmina do microscópio e a lamínula para evitar danos à amostra e prenda o suporte com esmalte.

No exemplo a seguir, veremos a dissecação, fixação e montagem das pernas