Rastreando moscas que andam livremente: um método para avaliar a locomoção em Drosophila

0 views • 2:45 min • April 30th, 2023

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- Use uma arena coberta - por exemplo, uma placa de Petri cheia de silicone transparente - para garantir que as moscas possam andar livremente, mas não possam voar dentro da arena quando ela estiver coberta. Coloque o prato em uma superfície iluminada branca e posicione uma câmera diretamente acima.

Com a tampa aberta, transfira as moscas anestesiadas para o prato, cubra-o e permita que os sujeitos se recuperem. As moscas se moverão livremente pela arena durante o teste. Para avaliar a locomoção, acompanhe a posição de cada mosca ao longo do tempo e calcule os parâmetros que caracterizam a locomoção, como a distância percorrida por cada mosca. Neste protocolo de exemplo, veremos uma demonstração da configuração e análise do ensaio usando software de rastreamento de vídeo.

- Para rastrear os movimentos das moscas em uma placa de Petri, primeiro encha uma placa de 6 centímetros com elastômero de silicone transparente para fazer a arena de rastreamento. Deixe um espaço de 3 milímetros entre o silicone e a tampa, para que as moscas possam andar livremente na lacuna, mas não voar. Abaixo da arena de rastreamento, tenha um fundo branco.

Em seguida, anestesiar quatro moscas do mesmo grupo de tratamento e colocá-las na arena. Deixe as moscas se aclimatarem por uma hora à arena, que deve estar totalmente iluminada e a cerca de 22 graus Celsius, não mais quente do que a temperatura ambiente. Após uma hora, use uma câmera de dispositivo de carga acoplada posicionada acima da arena para registrar a atividade da mosca por 5 minutos.

Após a gravação de 5 minutos, anestesie as moscas na arena e devolva-as a um novo frasco doméstico. Em seguida, descarte a arena. Posteriormente, analise as gravações usando o software Ctrax disponível gratuitamente. Este software gera dados de rastreamento, que podem ser exportados em um formato compatível com linguagem programável, como o formato MATLAB.

A partir dos dados, calcule a distância percorrida por quadro, a distância média percorrida para cada mosca e a distância média percorrida por mosca. Para significância estatística, espere testar cerca de 100 moscas por grupo de tratamento.

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Last updated: 11 July 2026