0 visualizações • 2:52 min. • April 30th, 2023
- Para começar, prenda uma pupa de mosca da fruta dorsal, ou de volta, com o lado voltado para cima. Remova o opérculo ou a extremidade anterior da pupa para expor a cabeça do animal. Continue a abrir a pupa cortando e descascando o invólucro. Uma vez libertado, cubra a pupa dissecada com PBS para evitar a dessecação. Faça um corte transversal limpo no tórax e remova a parte posterior da carcaça.
Para expor o complexo olho-cérebro, que inclui as duas retinas ligadas aos lobos ópticos, comece a rasgar o epitélio da borda aberta do tórax e continue a abrir a cápsula da cabeça gradualmente. Em seguida, guie cuidadosamente o complexo olho-cérebro para longe dos restos da cápsula da cabeça.
No protocolo de exemplo, veremos uma demonstração de uma dissecção olho-cérebro pupal usada para isolar tecido para várias análises a jusante.
- Depois de colocar as pupas de Drosophila em um prato de dissecação preto, coloque um novo pedaço de fita dupla-face no prato de dissecação, longe das pupas, e use uma pinça para colocar cuidadosamente o lado dorsal das pupas para cima na fita.
Coloque o prato sob um microscópio estéreo e use uma pinça para remover o opérculo de cada pupa. Use uma tesoura de microdissecção para cortar cada caixa de pupa, permitindo que ela seja aberta para revelar a cabeça, o tórax e o segmento abdominal anterior, e prenda as bordas da caixa de pupa à fita dupla-face.
Perfure o abdômen de cada pupa com uma pinça afiada e remova a pupa de sua caixa de pupa. Coloque a pupa na placa de dissecação, longe da fita, e cubra a pupa com 400 microlitros de PBS gelado. Use uma pinça para agarrar cada um pelo abdômen e use a tesoura de microdissecção para fazer uma incisão transversal limpa através do tórax, cortando as pupas ao meio.
Usando dois pares de pinças finas, segure as bordas cortadas de cada epitélio do tórax e gradualmente rasgue o tórax e a cápsula da cabeça, expondo o complexo olho-cérebro no tecido adiposo circundante. Em seguida, sem agarrar o tecido, use uma pinça para guiar cada complexo olho-cérebro translúcido, esbranquiçado e em forma de haltere, para longe dos restos da cápsula da cabeça.