Drosophila In Vivo Imagem de cálcio: um método para imagem funcional da atividade neuronal

- Para realizar imagens de cálcio in vivo no sistema nervoso de Drosophila, direcione a expressão de um indicador de cálcio geneticamente codificado, como GCaMP, para os neurônios de interesse. Quando os neurônios disparam um potencial de ação, a rápida despolarização da membrana faz com que os canais de cálcio dependentes de voltagem se abram, levando a um influxo de cálcio extracelular na célula.

GCaMP é uma proteína de fusão na qual a proteína fluorescente verde aprimorada, ou EGFP, é modificada e fundida ao fragmento M13 da cadeia leve de miosina no terminal N e à proteína de ligação ao cálcio, calmodulina, no terminal C. O cálcio se liga à calmodulina, desencadeia alterações de conformação no GCaMP, causando um aumento na fluorescência da proteína.

Para obter imagens de alterações na fluorescência de GCaMP como um proxy para a atividade neuronal in vivo, exponha a região do sistema nervoso com atividade antecipada. Em seguida, use um microscópio fluorescente que possa capturar a dinâmica do GCaMP e esteja equipado com uma configuração de entrega de estímulo. Entregue o estímulo, por exemplo, um odor, enquanto registra a fluorescência do GCaMP nos neurônios que respondem.

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