Congelamento de nematóides: um método para expor tecidos de vermes internos para coloração

- Transfira C. elegans lavado em líquido para uma lâmina de vidro previamente revestida com polilisina, um composto que ajudará as cutículas dos vermes a aderirem à superfície do vidro. Pressione suavemente outra lâmina de vidro para baixo com uma borda pendendo sobre a corrediça inferior. Para imobilizar os vermes sem danos, comprima os animais evitando movimentos laterais. Em seguida, coloque as lâminas de vidro com minhocas imprensadas em um bloco de metal dentro de um recipiente de laboratório isolado cheio de um agente de congelamento, como nitrogênio líquido ou gelo seco.

O metal é um condutor de temperatura eficaz, garantindo que a superfície do bloco esteja fria o suficiente para congelar rapidamente as cutículas do verme em ambas as superfícies de vidro. Depois de congeladas, separe rapidamente as lâminas de vidro para separar ou abrir as cutículas do verme. Prossiga com a fixação e coloração do tecido, pois a ruptura da cutícula de baixa permeabilidade permite que fixadores químicos e anticorpos de coloração acessem os tecidos internos do verme. No protocolo a seguir, veremos uma demonstração detalhada da técnica de fissuração por congelamento e fixação tecidual.

- Primei