Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- M9 tamponu içeren bir tüpte, gelişimin istenen aşamasında 150'ye kadar hermafrodit solucanı toplayın. M9 tamponu ile yıkayarak ve numuneyi santrifüj ederek solucanlardaki bakterileri çıkarın.
Numune kaybını önlemek için süpernatant çıkarılırken tüpü bir diseksiyon mikroskobu altında görüntüleyin. Solucanları minimum hacimli M9 tamponuna sahip bir cam tabağa aktarın. Solucanları uyuşturmak için levamisole ekleyin.
Solucanın ve farenksin başını veya iki ampul şeklindeki yapı içeren önseçimini bulun. Farenksin arkasındaki solucanı kesmek için iki iğne kullandı. Dokuyu etkilememek için diseksiyonu hızlı bir şekilde tamamladığınızdan emin olun.
Manikül bozulduğunda, solucanın iç basıncı nedeniyle iki gonad kolu ekstrüde edilir veya vücuttan dışarı itilir.
Bu örnekte, immünofluoresans analizi için yetişkin solucanlardan gonadları parçalara alacağız.
- İstenilen gelişim aşamasında 100 ila 150 solucan toplayın ve 100 mikrolitre M9 tampon içeren 1,5 mililitrelik bir mikrosantrifüj tüpünde toplayın.
Bir diseksiyon mikroskobu altında, M9 tamponunun 900 mikrolitresini hafifçe çıkarın.
Daha sonra, genişlemiş delikli 200 mikroliterli bir mikropipette ucu kullanarak, Solucanları 100 mikrolitrelik M9 tamponunda düz bir alt cam saat kabına aktarın.
Bir diseksiyon mikroskobu altında, her iğneyi her solucanın altına ve üzerine yerleştirin ve hareket gibi bir makas kullanarak ikinci farengeal ampulün yakınındaki her solucan üzerinde ince bir kesim yapın. Levamisolün etkili kalması için tüm hayvanları beş dakika içinde en az bir kez kesin.
- Çanaktaki hayvanların diseksiyonunun beş dakikadan kısa bir altında tamamlanması çok önemlidir.
- Ekstrüde bir gonad görünmüyorsa, sadece o hayvanın üzerinden atlayın. Uygun ekstrüde gonadlar burada görülebilir.
